胸腺肽α1对H5亚型禽流感疫苗的免疫增强作用

为了研究Tα1的免疫增强效果,以120只1日龄SPF鸡作为试验对象,联合应用表达Tα1的重组质粒pcDNA-Tα1和H5亚型禽流感灭活疫苗,观察不同剂量Tα1对免疫鸡只血清HI抗体水平、免疫器官指数以及抗病毒作用的影响。结果表明:Tα1各剂量处理组在鸡只免疫后7～21 d对HI抗体水平有轻微抑制,28 d与正常免疫组达同一水平;鸡只的法氏囊、胸腺和脾脏免疫器官指数均显著增加(P<0.05),尤以低剂量组(50μg/只)效果最佳;攻毒后,Tα1各剂量组对鸡只的保护率均为100%。可见,Tα1对禽流感H5N1疫苗有较强的免疫促进作用,且呈现一定的剂量关系,以低剂量(50μg/只)的免疫增强效果最为理想。     

PHA复方制剂对鸡新城疫疫苗的免疫增强作用

PHA复方制剂由植物血凝素(PHA)为主药组成,为探讨其对鸡新城疫(ND)疫苗的免疫增强作用,将复方制剂按体重0.05、0.2和0.3 g.kg-1三个剂量灌服,对Lasota疫苗免疫鸡ND的抗体效价、免疫球蛋白、血液中T淋巴细胞进行检测,攻毒后计算攻毒保护率。结果表明,PHA复方制剂0.05、0.2 g.kg-1组可显著提高抗体、IgG和IgA(P<0.05),提高血中T淋巴细胞数(P<0.05)和攻毒保护率,显示PHA复方制剂对ND疫苗有免疫增强作用及免疫保护作用。     

3种免疫增强剂对猪伪狂犬灭活疫苗的免疫效果评价

【目的】评价盐酸左旋咪唑(LH)、刀豆素(ConA)和胞壁酰二肽(MDP)3种免疫增强剂对猪伪狂犬病毒(PRV)灭活疫苗的免疫增强作用。【方法】将免疫增强剂混入灭活的PRV水相,和油相乳化后制成相应含有免疫增强剂的灭活疫苗,使各免疫增强剂终剂量为:LH 7.5 mg·mL~(–1)、ConA 25.0 mg·mL~(–1)、MDP 150.0 mg·mL~(–1)。首次免疫后14 d进行二次免疫,首次免疫后14 d、二次免疫后7和14 d采取小鼠血清,检测相关的细胞因子和特异性抗体水平,并在二次免疫后14 d攻毒,计算最终的攻毒保护率。【结果】相对于白油组,ConA组和MDP组在二次免疫后14 d对小鼠白介素2(IL-2)含量提升效果极显著;LH组在首次免疫后14 d、MDP组在二次免疫后14 d对白介素4(IL-4)含量提升效果显著;3种免疫增强剂分别在二次免疫后14和7 d对干扰素(IFN-γ)和特异性抗体含量提升效果极显著,并提高了攻毒保护率,LH组和ConA组存活率为20%,MDP组存活率为60%。【结论】3种免疫增强剂使用试验剂量均能不同程度地提升猪伪狂犬灭活疫苗的免疫效果,具有较好的应用前景。本研究结果为后续复合免疫增强剂筛选打下了基础。     

蛋鸡抗IBV HI抗体效价与攻毒后产蛋性能的相关性

【目的】研究抗呼吸型IBV HI抗体水平与蛋鸡产蛋率的对应关系。【方法】将180只SPF鸡分为4组,第1组和第2组首免用鸡传染性支气管炎H120活疫苗免疫,1羽份/只,4周后采血,第2组鸡同时用3批次的鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+HN6株)分别进行加强免疫,试验同时设置攻毒对照第3组和不免疫攻毒对照第4组。灭活疫苗免疫4周后,当产蛋率稳定在80%以上时,对试验鸡采血测定抗体,同时使用M41株病毒进行攻毒,记录攻毒后4周内各组鸡的产蛋性能,分析抗IBV HI抗体水平与攻毒后产蛋性能的相关性。【结果】弱毒活疫苗和灭活疫苗联合免疫组抗IBV HI抗体水平在2-8.2~2-9.3时,免疫鸡能够耐受IBV强毒的攻击,其产蛋性能不受影响。弱毒活疫苗免疫组抗体为2-4.8,产蛋量下降了12.69%。攻毒对照组抗体水平为2-2.0,攻毒后产蛋量下降45.22%。【结论】蛋鸡抗IBV HI抗体效价与产蛋率对鸡传染性支气管炎强毒的攻毒保护之间呈正相关,可以用HI抗体检测来评价鸡传染性支气管炎灭活疫苗对产蛋鸡的免疫效果。     

免疫增强剂提高H9亚型禽流感灭活疫苗在SPF鸡体中细胞因子的免疫应答

为探讨免疫增强剂(VA5)提高SPF鸡免疫功能的机理,将SPF鸡分别免疫H9亚型禽流感灭活疫苗、含VA5的H9灭活疫苗、含IL-4和/或IFN-γ真核质粒的H9亚型禽流感灭活疫苗,另设空白对照。检测免疫鸡外周血CD4~+、CD8~+T淋巴细胞亚群数目及IL-4和IFN-γ细胞因子含量的变化及血清抗体效价。结果显示,在14日龄、17日龄和21日龄和28日龄,免疫IL-4和H9、IL-4与IFN-γ和H9以及VA5佐剂与H9组的CD4~+淋巴细胞亚群上升快且比例高于其他组,免疫IFN-γ和H9、IL-4与IFN-γ和H9以及VA5增强剂与H9组的CD8~+淋巴细胞亚群上升快且比例高于其他组,IL-4的上升趋势与CD4~+细胞类似,IFN-γ的上升趋势与CD8~+类似。免疫含VA5的禽流感(H9亚型)灭活苗组在免疫后第2周、3周和4周血清HI效价达到7lg2以上,高于其他各免疫组。说明,与直接添加IL-4和IFN-γ的细胞因子质粒组相比,VA5免疫增强剂能够促进SPF鸡外周血淋巴细胞增值,提高CD4~+、CD8~+T淋巴细胞的比例,并诱导IL-4和IFN-γ细胞因子分泌。     

特异性抗体对新城疫疫苗免疫原性的影响研究

对特异性抗体对新城疫活疫苗和灭活疫苗免疫原性的影响进行了研究.鸡源抗体与Ⅰ系苗制备的复合物(ND-IC)对有、无抗体的1,28日龄雏鸡安全,能诱导产生良好的免疫应答,免疫14 d后获得完全的攻毒保护;18日龄鸡胚免疫接种后不影响孵化率和8日龄内雏鸡的死亡率,14日龄小鸡血清抗体滴度在5 log 2(HI)左右及获得80%～100%的攻毒保护率.特异性抗体与灭活病毒混合后制备的油佐剂苗免疫1,28日龄鸡,血清抗体水平高于传统油佐剂苗,且免疫原性不受母源抗体的影响.以上结果表明,鸡源特异性抗体能提高Ⅰ系苗的安全性,而不影响免疫原性;对灭活抗原具有免疫增强作用.     

特异性抗体对新城疫疫苗免疫原性的影响研究

对特异性抗体对新城疫活疫苗和灭活疫苗免疫原性的影响进行了研究。鸡源抗体与Ⅰ系苗制备的复合物(ND-IC)对有、无抗体的1,28日龄雏鸡安全,能诱导产生良好的免疫应答,免疫14d后获得完全的攻毒保护;18日龄鸡胚免疫接种后不影响孵化率和8日龄内雏鸡的死亡率,14日龄小鸡血清抗体滴度在5log2(HI)左右及获得80％～100％的攻毒保护率。特异性抗体与灭活病毒混合后制备的油佐剂苗免疫1,28日龄鸡,血清抗体水平高于传统油佐剂苗,且免疫原性不受母源抗体的影响。以上结果表明,鸡源特异性抗体能提高Ⅰ系苗的安全性,而不影响免疫原性;对灭活抗原具有免疫增强作用。     

重组鸡IL-18对新城疫疫苗免疫增强作用的研究

将200只1日龄鸡随机分为4组,每组50只鸡,分别为空白对照组,新城疫疫苗组,新城疫疫苗+重组IL-18组,新城疫疫苗+空载体对照组。所有免疫组鸡均于8日龄免疫接种相应疫苗,并分别于免疫后的第3,7,14,21,28天和第35天对各组鸡随即抽取4只,对其血清的抗体效价、外周血的T淋巴细胞转化水平和γ干扰素含量进行测定。免疫18 d后每组鸡随机取20只进行动物攻毒保护试验。结果表明重组鸡IL-18蛋白不仅能够显著增强新城疫疫苗所诱导的细胞免疫和体液免疫反应,而且还可以明显提高疫苗的保护率     

免疫增强剂提高禽用二联苗免疫效力的研究

为评价免疫增强剂(VA5)对禽用联苗的免疫增强作用,将VA5分别与市售鸡新城疫-传染性法氏囊(新法)二联苗合用免疫SPF鸡和蛋鸡、与新城疫-H9亚型禽流感(新流)二联苗合用仅免疫SPF鸡,评价免疫后的抗体效价和SPF鸡攻毒后的保护效力。结果显示,SPF鸡或蛋鸡免疫含VA5的新法二联苗、新流二联苗后,新城疫血凝抑制(HI)抗体效价比常规苗组提前1周达到6 log2,禽流感HI抗体效价比常规苗组提前1周达到7 log2,法氏囊血清琼扩抗体和中和抗体比常规苗组均提前1周合格,且3种抗体持续高于常规疫苗组。免疫含VA5疫苗组的SPF鸡对新城疫强毒攻毒,以临床症状判断,可达全保护;以囊病变和临床症状判断,对法氏囊的攻毒提供全保护;H9变异株攻毒后不排毒。对上述3种病毒的保护力均高于常规苗。上述结果表明,VA5免疫增强剂能够提高鸡新法二联苗、新流二联苗对鸡的免疫效力,具有很好的应用前景。     

蛹虫草基质多糖对传染性支气管炎病毒感染鸡免疫指标的影响

试验应用滴鼻+点眼法对7日龄黄羽肉鸡攻毒建立传染性支气管炎感染模型,采用蛹虫草基质多糖进行治疗试验,通过对肉鸡免疫器官指数、外周血淋巴细胞增殖指数、血清抗体水平和γ-干扰素浓度的检测来研究蛹虫草基质多糖用于防治鸡传染性支气管炎的可能性。结果表明,蛹虫草基质多糖能够促进肉鸡法氏囊和脾脏的生长发育,加快其增重,从而提高免疫器官指数,又能促进外周血淋巴细胞增殖转化水平;同时还能使血清抗体水平和γ-干扰素浓度升高,增强机体的免疫力。因此,蛹虫草基质多糖可作为鸡传染性支气管炎防治的临床候选药物。     

囊素肽对禽流感(H9N2)油乳剂灭活疫苗免疫效果的影响

为研究囊素肽对禽流感(H9N2)油乳剂灭活疫苗免疫效果的影响,将200只鸡分为疫苗组、疫苗+囊素组、囊素组和对照组,每组50只。从13日龄起每7 d测定其法氏囊指数、禽流感(H9)HI抗体水平。结果表明：囊素肽能提高禽流感(H9N2)油乳剂灭活疫苗免疫后的抗体水平,并延长高水平抗体的维持期,能显著地促进法氏囊的生长发育。     

AA鸡禽流感母源抗体和免疫抗体消长变化的研究

[目的]为AA鸡的禽流感预防提供依据。[方法]用不同剂量的2种禽流感疫苗免疫8日龄AA鸡,通过血凝抑制(HI)试验研究AA鸡禽流感母源抗体和免疫抗体的消长变化。[结果]AA鸡禽流感母源抗体在1~7日龄时缓慢下降,之后迅速下降,表明其半衰期约为2 d。2种禽流感疫苗均可用于AA鸡的预防接种,免疫后15 d,免疫抗体HI效价达到保护临界值,20 d时达到峰值,然后缓慢下降,43日龄时仍在临界值以上。2种不同剂量的禽流感灭活油乳剂疫苗接种后所产生的HI抗体效价的峰值差异极显著。[结论]选用禽流感灭活油乳剂疫苗,免疫剂量为0.5 ml/只,免疫时间为8日龄,整个饲养期免疫1次,即可预防商品代AA鸡禽流感。     

鸡白细胞介素-18对H9亚型禽流感灭活油乳苗的免疫增强作用

[目的]探索鸡白细胞介素-18（IL-18）在H9禽流感（AI）灭活油乳苗免疫中的免疫佐剂作用.[方法]从鸡脾淋巴细胞中克隆鸡IL-18基因,亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1（＋）中,构建真核表达质粒pIL-18.将重组真核表达质粒pIL-18、H9亚型AI灭活油乳苗及其二者联合分别免疫14日龄SPF鸡,检测其细胞免疫和体液免疫水平,评价鸡IL-18在H9亚型禽流感灭活油乳苗中的免疫增强作用.[结果]成功克隆了鸡IL-18全基因,大小为597 bp.质粒pIL-18和H9亚型AI灭活油乳苗联合免疫的SPF鸡所产生的HI抗体效价在接种第4周后明显高于H9亚型AI灭活油乳苗免疫组;其T淋巴细胞的增殖反应也强于H9亚型AI灭活油乳苗免疫组.[结论]质粒pIL-18能提高H9亚型禽流感灭活油乳苗诱发的免疫应答,为研究防制禽流感的新型疫苗提供了新思路.     

悬浮MDCK细胞的驯化与H5亚型禽流感病毒的培养

【目的】为评估细胞源重组禽流感病毒H5亚型灭活疫苗的有效性提供数据支持。【方法】选取一株来源清楚的贴壁MDCK细胞,通过逐步降低培养基中血清含量及不断调整无血清培养基配方,将其驯化为悬浮MDCK细胞,并以此为基质增殖重组禽流感病毒H5N1 Re-6株、H5N1 Re-7株和H5N1 Re-8株;比较不同毒株在贴壁和悬浮MDCK细胞中增殖的差异。分别将经悬浮MDCK细胞增殖的病毒与经SPF鸡胚增殖的病毒制备成重组禽流感病毒(H5亚型)三价灭活疫苗,免疫商品蛋鸡和商品鸭,通过血清学方法比较细胞源与鸡胚源禽流感灭活疫苗的免疫效果。海兰褐商品蛋鸡:6 050只,分为3组,2组为免疫组,每组3 000只,28日龄免疫0.5 mL/只,80日龄免疫0.5 mL/只;不免疫对照组1组,50只,同等条件下隔离饲养。分别于蛋鸡日龄49、110、210 d(即首免后21 d、82 d、6个月)时采血分离血清,测定禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株的HI抗体效价,监测抗体消长。长白飞鸭:220只,分为3组,2组为免疫组,每组100只,10日龄免疫0.5 mL/只,24日龄免疫1.0 mL/只,不免疫对照组20只,同等条件下隔离饲养。分别于鸭日龄24、38、52 d(即首免后14、28、42 d)时采血分离血清,测定禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株的HI抗体效价,监测抗体消长。【结果】获得一株可在无血清培养基中悬浮生长的MDCK细胞,摇瓶、5L生物反应器中的培养数据及细胞状态显示,该细胞株适合放大生产。此悬浮MDCK细胞培养48 h细胞密度可由1.5×10~6 cells/mL左右增殖到1.0×10~7 cells/mL左右,状态良好、活率高、单个悬浮于培养基中。以此悬浮MDCK细胞为基质增殖重组禽流感病毒,H5N1 Re-6株的HA效价达1﹕512,TCID_(50) 10~(7.67)/mL,EID_(50) 10~(7.83)/0.1 mL;H5N1 Re-7株的HA效价达1﹕256,TCID_(50)达10~(7.33)/mL,EID_(50)10~(7.17)/0.1 mL;H5N1 Re-8株的HA效价达1﹕1024,TCID_(50) 10~(8.5)/mL,EID_(50) 10~(8.38)/0.1 mL,与经贴壁MDCK细胞增殖的病毒毒价相当。细胞源三价灭活疫苗免疫海兰褐商品蛋鸡,首免后21 d时,禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕446、1﹕111、1﹕416,二免后30 d时三者HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕588、1﹕362、1﹕776,6个月时分别为1﹕239、1﹕128、1﹕223,维持了较高的抗体水平;免疫长白飞鸭,首免后14 d时,禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕30、1﹕17、1﹕64,28 d时三者HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕194、1﹕91、1﹕137,42 d时分别为1﹕416、1﹕128、1﹕239;以上两组的试验结果与鸡胚源重组禽流感灭活疫苗免疫后诱导产生的HI抗体效价相当。【结论】经驯化获得的可在无血清培养基中悬浮生长的MDCK细胞株,其增殖重组禽流感病毒H5N1 Re-6株、H5N1 Re-7株、H5N1 Re-8株能力强,且病毒被制备成灭活疫苗免疫海兰褐商品蛋鸡和长白飞鸭可产生较高水平的抗体。为大规模工业化生产禽流感疫苗提供技术支持。     

汉中地区鸡禽流感母源抗体与免疫抗体的监测及免疫程序的建立

[目的]为禽流感免疫程序的建立提供依据。[方法]从汉中市某规模化养鸡场采集罗曼蛋鸡的血清样品,检测不同时期的抗体水平。接种禽流感油乳剂灭活苗后,检测用不同剂量的疫苗免疫后雏鸡血清中抗体水平。[结果]1d雏鸡平均母源抗体效价为8.9,在19d降到4.3。免疫36d后,平均抗体效价达6.37,保护率为100%。免疫85d后,抗体达最高值。免疫9周后,平均抗体水平降至4.17,保护期约为2个月。禽流感的首免时间应在出生后19～22d。首次免疫85d后,HI抗体水平逐渐降至临界值。建议在3月龄左右进行第2次免疫,剂量可增大到0.5ml/只。[结论]鸡场应建立抗体效价监测手段,应对抗体水平偏低或空白的鸡群及时再接种。     

重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗免疫SPF鸡、SPF鸭后抗体消长规律分析

为了解重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-6株+Re-4株)的免疫效果,为临床上制定合理的禽流感疫苗免疫程序提供依据,选取3个企业生产的12批疫苗,免疫SPF鸡、SPF鸭,跟踪至免疫后24周,每3周采血检测Re-6、Re-4 HI抗体效价。结果表明:SPF鸡、SPF鸭分别在免疫后6周和3周Re-4、Re-6抗体即可达到高峰值,随着时间的推移,抗体水平逐渐下降;SPF鸡抗体的高峰值高于SPF鸭;SPF鸡的高抗体水平的维持期长于SPF鸭;3个企业的疫苗均有良好的免疫效果。     

免疫程序对肉鸡新城疫·禽流感(H5亚型)HI抗体消长规律的影响

[目的]为制定商品肉鸡新城疫(ND)、禽流感(AI)的免疫程序提供理论依据。[方法]在调查不同规模化养殖场免疫程序的基础上,制定商品肉鸡的免疫程序,分析不同免疫程序下ND和AI(H5亚型)HI抗体消长规律。[结果]1~7日龄商品肉鸡ND和AI的母源抗体均维持在免疫保护临界值之上。用ND疫苗免疫后,鸡群抗体水平不断下降,各免疫组均在24日龄最低。使用ND活疫苗和灭活苗的免疫组中ND抗体滴度比其他免疫组高。非免疫组AI(H5亚型)抗体滴度均随日龄的增加而逐渐下降,而免疫组24日龄后缓慢上升,38日龄达到免疫保护临界值。[结论]禽流感(H5亚型)灭活苗对商品肉鸡的免疫效果较差,应从免疫佐剂、抗原浓缩等方面进行新型商品肉鸡禽流感疫苗研究。     

H9N2亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备及其表位鉴定

[目的]制备H9N2亚型禽流感病毒单克隆抗体和鉴定表位。[方法]选取H9N2亚型禽流感病毒(AIV)WD-1株的纯化抗原免疫BALB/c小鼠,对获得2株抗H9N2亚型禽流感病毒的特异性单抗4C10和6E3表位进行鉴定。[结果]单抗4C10和6E3分别属于IgG1和IgG2b亚型,ELISA检测效价分别为1∶10~3和1∶10~5;HI效价分别为2~(15)和2~(14);2株单抗均具有鸡胚中和活性。利用噬菌体展示表位技术对2株单抗的抗原表位进行鉴定,结果显示均为针对HA蛋白的1个线性表位。[结论]该研究为禽流感病毒快速诊断方法的建立提供了依据。     

鹅源H5N1亚型禽流感病毒对SPF雏鸡血液免疫功能的影响

以21日龄SPF雏鸡为实验动物,应用细胞培养和免疫酶技术,通过外周血液免疫球蛋白(Igs)含量、T和B淋巴细胞数量及其增殖功能的检测,较全面系统的研究了鹅源H5N1亚型中强毒禽流感病毒(AIV)感染SPF雏鸡后,其外周血液上述被检指标的动态变化.结果表明,鹅源H5N1亚型中强毒AIV感染SPF雏鸡后,其血清IgG和Ig...     

蛋鸡重组高致病性禽流感H5N1(Re-4+Re-5)2价灭活疫苗免疫效果的评价

参照农业部既定的蛋鸡高致病性禽流感免疫程序,对100只蛋鸡雏免疫重组高致病性禽流感H5N1(Re-4+Re-5)2价灭活疫苗,300只蛋鸡雏分3组分别免疫重组高致病性禽流感H5N1(Re-4)株、(Re-5)株灭活单苗作为对照,通过免疫应激反应观察、抗体效价检测,以评价该疫苗的免疫效果。