分子标记及其在植物育种中的应用

本文介绍了限制性片断长度多态性（ＲＦＬＰ）、随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）、扩增片断长度多态性（ＡＦＬＰ）、简单重复序列（ＳＳＲ）、染色体原位杂交（ＩＳＨ）分子标记的基本原理、特点及其在植物育种中的应用。在植物育种中分子标记可用于绘制品种、品系的ＤＮＡ指纹图谱、种质资源遗传多样性的研究、种质资源的创新与鉴定、分子标记辅助选择。     

AFLP技术的发展及其应用

扩增片段长度多态性（ＡＦＬＰ）被称为“下一代分子标记”，是检测ＤＮＡ多态性的一种新技术。该技术在农作物、蔬菜、林木、果树等植物的种质鉴定、遗传多样性分析、构建遗传图谱、基因定位和标记辅助育种等方面得到应用。     

分子标记技术在植物遗传育种中的应用

以ＤＮＡ核苷酸多态性为基础的分子标记技术，在ＤＮＡ分子水平，实验室条件下，揭示性状的遗传差异，为遗传研究提供了有力手段。本文对ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ等分子标记技术原理及其在植物遗传育种中的应用作一综述。     

分子标记及其在作物遗传育种中的应用

遗传标记主要有形态标记、细胞学标记、生化标记和分子标记四种类型。作物遗传育种中应用的分子标记主要有ＲＦＬＰ、ＰＣＲ、ＲＡＰＤ、ＡＦＬＰ和ＳＳＲｓ等，均主要用于辅助育种。本文较详尽地介绍了遗传标记系统及其在作物遗传育种的应用，并着重探讨了作物遗传育种中应用分子标记进行辅助选种的研究现状、存在的问题及应用的策略     

DNA分子标记技术与作物品种纯度鉴定

本文对ＲＦＬＰ、ＤＮＡ指纹、位点特异小卫星与微卫星、ＲＡＰＤ及ＡＦＬＰ等５种ＤＮＡ分子标记技术的方法原理及研究概况作了介绍，并着重讨论了它们在作物品种真实性与纯度鉴定上的应用前景。     

大豆RFLP和RAPD研究现状

ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ技术近年来发展迅速．应用这些技术于作物遗传育种实践的前提条件是建立ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ分子标记连锁图，进而建立分子标记与重要在艺性状的连锁关系．大豆有些抗病性、生育期性状、形态性和品质性状等与ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ分子标记有连锁关系，分子标记有可能用于大豆育种的选择过程．ＲＦＬＰ和ＲＡＰＤ技术可用于评估大豆群体和品种资源，探索育种方法的分子基础，研究进行和分类，分析细胞质ＤＮＡ遗传变异．     

家畜育种中的分子遗传标记

在叙述ＲＦＬＰ技术、ＤＮＡ指纹技术、ＲＡＰＤ和ＡＦＬＰ技术的基础上,说明了分子遗传标记在家畜基因定位,基因图谱构建、背景基因型选择及杂交选育上的应用,并指出分子遗传标应用于家畜育种需要解决的问题     

苹果砧木亲缘关系AFLP分析

 在构建苹果ＡＦＬＰ指纹图谱的基础上，分析了我国及世界苹果生产中２０个重要苹果砧木间的遗传差异和亲缘关系。根据ＡＦＬＰ扩增结果，计算出２０个苹果砧木间的平均遗传距离为０．５５±０．１４σ．按ＵＰＧＭＡ法进行了聚类分析，并绘制了亲缘关系树状图，表明苹果属（Ｍａｌｕｓ Ｍｉｌｌ）中的两个亚属的砧木被分别聚成了两个大组，即花秋苹果亚属（Ｓｏｒｂｏｍａｌｕｓ Ｚａｂｅｌ）大组和真正苹果亚属（Ｅｕｍａｌｕｓ Ｚａｂｅｌ）大组。前者包括拥有河南海棠血统的４个砧木；后者Ｍ系、ＭＭ系矮化砧木自成一个聚类小组。研究结果与已知苹果砧木间的系谱是一致的。表明应用ＡＦＬＰ技术能在ＤＮＡ分子水平上较好地揭示苹果砧木的遗传背景及其亲缘关系。     

水稻AFLP标记的多态性,分布及分离的研究

采用５个ＰｓｔＩ／ＭｓｅＩ引物组合对来自２个籼稻品种Ｈ３５９和Ａｃｃ８５５８的重组自交系（ＲＩ，Ｆ７代，１３１个系）群体进行了扩增片断长度多态性（ＡＦＬＰ）分析并对ＡＦＬＰ的多态性程度、ＡＦＬＰ标记的染色体分布及分离比例进行了研究，在ＡＦＬＰ分析中，共检测到９８个多态性带，其中７８个定位到连锁图中，并分布在所有的１２条染色体上，表明ＡＦＰＬ是一种高效的分子标记，可与ＲＦＬＰ标记结合应用于遗传图谱的     

苹果AFLP分析体系的建立

以１２个苹果砧枯木基因型为试材,建立了扩增酶切片段长度多态性（ＡＦＬＰ）分析体系,对其分析过程中ＤＮＡ提取、双酶切、连接、预扩增、标记和选择性扩增的效果进行了检测。用Ｐ３２Ｍ６４引物构建了供试苹果砧木基因型的ＡＦＬＰ指纹图谱。该指纹图谱拥有扩增条带１０５条,多态性带６７条（占６３．８％）,条带清晰可辨,扩增信号强,无背景干扰。讨论了ＡＦＬＰ分析的影响因素。     

AFLP分子标记在作物育种中的应用

扩增片段长度多态性(AFLP)可靠性强,多态检出率高,因而被认为是最有效的DNA指纹分析技术.利用这一方法,在不需要预先知道DNA序列信息的情况下,就可以同时进行多数 DNA酶切片段的PCR扩增.目前,该技术不仅在小麦、水稻、玉米、棉花和大豆等主要农作物上得以应用,而且在蔬菜(番茄、马铃薯等)以及植物基因组研究的模式植物拟南芥上广泛应用.介绍了AFLP的原理,影响因素及其在作物育种中的应用.     

不同猕猴桃品种雌雄植株的AFLP分析

以猕猴桃(Actinidiaspp.)幼叶为材料提取基因组DNA,从64个引物组合中选取12对引物进行雌、雄集群DNA样品的扩增片段长度多态性(Amplified fragment length polymorphism,AFLP)扩增,再从中选取4对引物进行6对雌、雄DNA样品的AFLP扩增.4对引物共扩增出74个AFLP标记,其中多态性标记为58,多态性标记百分比为78.4%.遗传相似性分析表明,同一品种雌雄样品之间的AFLP电泳图谱表现出一定的差异,但小于不同品种间的差异,而品种间的差异又小于不同种间的差异.同时AFLP多态性初步检测出猕猴桃不同性别在DNA水平上的差异.     

DNA分子标记技术在甘薯遗传育种研究中的应用

近年来,以PCR技术为基础的RAPD、AFLP、ISSR、S-SAP和SRAP等DNA分子标记技术已经逐步应用于甘薯的遗传育种研究中。本文对DNA分子标记的应用原理做一简单分析,并主要介绍了DNA分子标记技术在甘薯的起源、进化、分类、遗传多样性分析、品种鉴定、连锁图谱构建和分子标记辅助育种方面的应用情况。     

梅根系丛枝菌根真菌AFLP分析

为了解决梅根系共生的丛枝菌根(AM)真菌难以应用形态学鉴定的问题,以巢式PCR的AFLP方法研究梅根系AM真菌DNA多态性。试验采集梅花期的根系样品,应用改良CTAB法提取总DNA,经纯化处理后,应用巢式PCR扩增根系AM真菌基因片段,进行AFLP分析。结果表明,18个梅品种的30个根系样品中,仅有8个样品经巢式PCR后获得纯化的DNA片段,占试验样品数的26.7%;8个样品共得到指纹图谱带24条,各样品平均多态性位点数为3.0个,Nei’s基因多样性为0.4097±0.0848,Shannon信息指数为0.5968±0.0955;利用Nei’s遗传相似性系数聚类,梅品种根系内AMF基因组DNA的聚类类别与梅"品种群"这一分类级别无相关性。该试验为植物根系共生AM真菌DNA多态性研究提供了一种简便的技术。     

AFLP技术在水产动物研究中的应用

扩增片断长度多态性(amplified fragment length polymorphism,AFLP)是基于PCR技术对基因组限制性片断进行扩增,其技术原理主要包括酶切、扩增和电泳检测。本文中作者就AFLP技术在水产动物中的遗传多样性、亲缘关系鉴定、遗传图谱构建、辅助育种等方面的应用做一综述。     

龙眼AFLP银染体系的建立与优化

[目的]优化龙眼AFLP银染体系中的影响因素。[方法]以23份龙眼品种和2份龙眼近缘植物龙荔为试材,通过对扩增片段长度多态性(AFLP)反应体系中的几个影响因素(DNA提取、酶切与连接、电泳与银染)进行研究,建立起龙眼AFLP银染分析体系。[结果]用紫外分光光度计检测样品DNA质量和浓度,发现提取的DNA吸光度A260/A280比值在1.8左右,A260/A230的比值大于2.0,说明所提取的DNA样品纯度较高,无蛋白质或盐类的污染。酶切与连接中采用37℃水浴5 h,然后转入65℃水浴2 h的方法能保证酶切充分,又能防止酶切过度。电泳和银染时用4℃预冷的显影液进行显影,可以降低显影速度。[结论]采用该技术体系得到的AFLP指纹式样清晰,重复性强,适宜用作龙眼品种鉴别和遗传多样性分析。     

拮抗链霉菌AFLP分析技术体系的研究(英文)

[Objective] The aim of this study was to investigate the preparation method and amplification system of antagonistic streptomyces DNA templates based on AFLP assays, and also provide a basis for the application of AFLP technology in the analysis of streptomyces or even actinomyces. [Method] The DNAs were extracted by the modified CTAB method and amplified by the Pst Ⅰ/Mse Ⅰ AFLP kit and its reaction system. The amplified products were analyzed by the denatured polyacrylamide gel electrophoresis. [Result] The genomic DNAs of ten antagonistic strains of Streptomyces were extracted and tested. The result of 0.8% agarose gel electrophoresis showed that the major DNA bands were clear without degradation and RNA residue, with the fragment sizes ranging from 37.64 to 40.86 Kb. By ultraviolet spectrophotometry, the OD260/OD280 values varying from 1.625 to 1.833 were obtained. Furthermore, the agarose gel electrophoresis of DNA products digested by Pst Ⅰ/Mse Ⅰ presented the dispersed fluorescent long band, which indicated that the enzymatic hydrolysis was fully carried out. The amplified bands of DNA templates by the screened three pairs of primers were clear with rich polymorphism. [Conclusion] The preparation method and amplification system of DNA template established in this study can be used in the AFLP analysis of Streptomyces.     

适于AFLP分析的盾叶薯蓣DNA的提取方法

用传统CTAB法和改良CTAB法提取盾叶薯蓣样品的基因组DNA。结果表明:传统CTAB法与改良CTAB法提取的基因组DNA完整性都比较好,但传统CTAB法获得的DNA含有较多杂质,不能被限制性内切酶消化,改良CTAB法提取的基因组DNA杂质去除彻底,条带清晰,可以完全酶切,并能获得清晰的预扩增图谱和有丰富条带稳定的AFLP指纹,完全适合于盾叶薯蓣分子标记鉴定所需。     

苹果基因组AFLP分析的DNA模板的制备及技术体系的建立

AFLP对模板的质量要求较高。在苹果上用常规的SDS法提取基因组DNA，若加以适当纯化，也可达到AFLP分析的要求，另外，在AFLP分析体系中，应注意选择性扩增模板的浓度，以及选用适当的引物组合，同时也应掌握好变性的条件。     

山核桃AFLP实验技术体系的建立

以充分展开的山核桃Carya cathayensis嫩叶为材料、利用改良CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）法与CTAB裂解一硅珠吸附法提取山核桃总DNA,对适合于山核桃叶片的AFLP（扩增片段长度多态性）分析体系进行了摸索。结果表明：①改良CTAB法适用于从山核桃叶中提取高质量的DNA,提取的DNA可用于AFLP的分析;②采用EcoR I/Mse I 酶切组合,酶切连接一步法与两步法的效果没有明显的差异,但一步法操作更为简便;③适合于山核桃叶AFLP分析的引物组合为E-ACT＋M-CAT,E-ACT＋M-CTG,E-ACG＋M-CAT,E-ACG＋M-CTG。扩增产物经60g·L^-1变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后进行银染,条带信号强度一致性好,条带分布均匀、清晰,分辨率较高。