极端嗜热多肽的纯化、性质初探及对苗瘟的防效

本试验用加热法从多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)LM-3菌株的发酵液中纯化得到2个极端嗜热多肽。平板拮抗实验表明,5μl纯化多肽对稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)抑菌率达89.6%。SDS-PAGE电泳显示纯化多肽分子量介于6 000~7000 Da之间。多肽复性后,其中之一对稻瘟病菌表现出强的拮抗活性,命名为APPLM3(Antagonism Polypeptide fromPaenibacilluspolymyxaLM-3);另一个则无此活性,命名为PPLM3(Polypeptide fromPaenibacillus polymyxaLM-3)。APPLM3经氨基酸测序,获得了其N-末端5个氨基酸序列(H2N-ANDPR);以该序列为靶序列在NCBI上进行相似性检索,发现其可能与3个假设蛋白(或推导蛋白)相关。以APPLM3为主效成分配得5种微生物源生防乳剂,对水稻苗瘟进行了田间防效试验。试验结果表明,这5种乳剂的防效都优于LM-3拮抗液直接喷雾,其中AB4处理的防效最佳,达80.73%,其拮抗成分、吐温80、乳化剂OP、溶剂的质量比为50∶6.5∶1.75∶41.75。APPLM3为首次报道的兼具极端嗜热性和稻瘟病菌拮抗活性的小分子多肽。     

稻瘟病菌拮抗假交替单胞菌的分离与鉴定

为从海洋中分离并鉴定水稻稻瘟病菌拮抗菌,采用系列稀释法和对峙法筛选对稻瘟病菌具有较好抑菌活性的拮抗菌,根据其形态、生理特性及16S rDNA序列比对鉴定拮抗菌分类地位.结果:从辽宁省大连采集的样品中共分离到77株菌,以稻瘟病菌为指示菌,共筛选到9株具有拮抗作用的菌株,再通过发酵复筛,结果表明LM-003菌株的拮抗作用最好,且初步鉴定菌株LM-003为假交替单胞菌(Pseudoalteromonas).试验表明,假交替单胞菌LM-003是1株有应用前景的生防菌株.     

稻瘟病生防细菌的筛选及其防效测定

为筛选得到对稻瘟病有良好防效的拮抗细菌,为稻瘟病的生物防治提供更多的菌源.采用稀释涂布法从对节白蜡(Fraxinus hupehensis Chiu,Shang et Su)及其根际分离细菌,通过平板对峙、离体叶片试验和盆栽试验筛选稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)的拮抗菌株,测定其产胞外酶活性,并经16S rDNA序列分析对其进行鉴定.结果显示,从对节白蜡及其根际共分离得到193株细菌,经平板筛选得到7株对稻瘟病菌具有抑制作用的细菌,其抑制率为62.53％～75.47％,其中菌株YZU-S033和YZU-S061对稻瘟病菌的抑制率最高,在离体叶片试验中对稻瘟病的防效较强,分别为81.7％和69.4％.在盆栽试验中,菌株YZU-S033和YZU-S061的菌体悬浮液显著降低了稻瘟病的发病率,减轻了该病害的发病程度,其防效分别可达69.8％和64.0％,与对照药剂(枯草芽孢杆菌可湿性粉剂)的防效相当.这2株拮抗细菌均能产生蛋白酶和纤维素酶,其中YZU-S061还可分泌嗜铁素.经系统发育分析将菌株YZU-S033和YZU-S061均鉴定为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis).结果表明菌株YZU-S033和YZU-S061对稻瘟病均具有良好的生防潜力和应用前景.     

8种杀菌剂对稻瘟病菌的室内毒力及田间防效试验

筛选8种杀菌剂对稻瘟病菌的毒力,并进行稻瘟病的田间小区防效试验,为田间大面积防治稻瘟病提供参考。试验采用菌丝生长速率法测定稻瘟酰胺、咪鲜胺、稻瘟灵等8种药剂对稻瘟病菌的毒力作用,喷雾法进行田间小区防效试验。结果发现:咪鲜胺、戊唑醇和稻瘟灵对稻瘟病菌毒力较强,EC50值分别为0.02、0.35、2.69mg/L。叶瘟田间防效最高的是稻瘟酰胺,防效为79.7%。穗颈瘟防效最高的是稻瘟酰胺,防效为83.42%;其次为春雷霉素,防效为79.01%。     

3%新狼毒素B水乳剂防治水稻稻瘟病的田间药效研究

进行了3%新狼毒素B水乳剂防治水稻稻瘟病的田间药效试验。结果表明:3%新狼毒素B水乳剂对水稻稻瘟病菌防治效果较好,对叶瘟和穗瘟防效分别达87.82%和86.30%。     

柑橘溃疡病土壤拮抗菌的筛选、鉴定及防效测定

为了筛选具有生防潜力的柑橘溃疡病拮抗菌,从湖南省不同地区采集了16个土壤样品,经分离、纯化、筛选获得3株拮抗效果突出的菌株,其中CLT3为链霉菌属,CLH2为假单胞菌属,CZR1为伯克氏菌属;拮抗菌室内防效试验结果表明:3个菌株的防效基本都在50%以上,其中CLT3的防效最佳,达到83.85%。这说明3株拮抗菌对于柑橘溃疡病的防治有一定的作用,并显现出较大的开发潜能。     

筛选和应用拮抗细菌防治稻瘟病的研究

从水稻叶片、稻田土壤、菜地土壤和田间菌核中共分离细菌菌株1228株,经平板测定,对稻瘟病菌有拮抗作用的菌株有246株,其中具有强拮抗作用的菌株有29株。8个代表性的菌株对水稻稻瘟病菌、水稻纹枯病菌和水稻恶苗病菌均表现了强的拮抗作用。田间药效试验表明,菌株V-297在吉安市吉州区和修水县的平均防效分别为55.09%和57.20%;菌株R-122分别为55.61%和54.15%。经初步鉴定,菌株V-297和R-122均为Bacillusspp.;菌株S-96为Pseudomonassp.。     

3株棉花黄萎病菌拮抗菌株生防、促生效果研究

为测试对棉花黄萎病菌(Verticillium dahliae)具有拮抗作用的3株菌(kx-4、kf-43-1、kf-5-1)对棉籽发芽的影响及在盆栽和大田试验中拮抗、促棉花生长的作用。利用发酵液法对3株拮抗菌抑菌活性、促芽效果进行测定;通过切根蘸菌法、灌根接种法分别测定了拮抗菌对棉花黄萎病的盆栽、大田防病和促生效果。结果表明,3株拮抗菌无菌发酵滤液,对棉花黄萎病菌菌丝的抑制率为65.49%～87.41%,与对照比棉籽发芽率提高2.86%～14.29%;3株拮抗菌在盆栽、大田试验中防效均显著高于对照,对棉株均有不同程度的促生作用。其中拮抗菌株kf-43-1株防效最好,盆栽防效最高可达80.27%;在大田接拮抗菌20 d后防效为53.95%;kx-4株促生效果最好,发酵液灌根处理的棉株株高、下胚轴直径、始节高、铃数、有效铃数、衣分的测量数值均显著高于对照及其余2株拮抗菌发酵液灌根处理的棉株。     

7种杀菌剂对稻瘟病的田间防效研究

为了筛选出适合桃江县防治水稻稻瘟病的药剂,采用田间试验方法,测定7种杀菌剂对水稻稻瘟病的田间防效。结果表明:保治达、保治达2号、三环唑、嘧菌酯、苯甲·嘧菌酯、吡唑醚菌酯、富泽7种杀菌剂均对稻瘟病均有一定的防治效果。其中保治达2号的效果最好,10 d后对叶瘟的防效达到73.64%,20 d后的防效达84.95%,10 d后对穗颈瘟的防效达到85.76%,20 d后的防效达到80.94%。     

6种药剂组合对水稻稻瘟病的田间防效比较

通过2种生物农药(200亿芽孢/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂和5%氨基寡糖素水剂)与3种常用低毒化学农药(250 g/L嘧菌酯悬浮剂、25%咪鲜胺水乳剂和40%稻瘟灵可湿性粉剂)分别组合应用进行水稻稻瘟病防治试验,以250 g/L嘧菌酯悬浮剂、25%咪鲜胺水乳剂和40%稻瘟灵可湿性粉剂3种单剂防治作为常规对照处理,进行田间试验防效对比。结果表明:6种处理药剂组合对水稻稻瘟病均具有良好防治效果,速效性显著高于常规对照处理,其中200亿芽孢/克枯草芽孢杆菌可湿性粉剂+250 g/L嘧菌酯悬浮剂防效最高达到80.09%;6种药剂组合与单剂常规处理相比持效性效果均较好,药后14 d药效最大降幅只有2.38%。综合可见,6种药剂组合对水稻稻瘟病的防治效果比单一化学药剂防治效果速效性和持效性均佳,可根据实际情况在水稻生产上进行组合交替使用。     

短短小芽孢杆菌TW-2菌株对水稻穗颈瘟的防治效果

[目的]探讨生物农药的防治原理,寻找防治稻瘟病的新方法。[方法]采用系列稀释平板法测定生防菌TW-2对水稻稻瘟病菌的菌丝生长的抑菌活力,计算生防菌的抑菌活力回归方程式、EC50值和相对毒力。[结果]生防菌TW-2对田间水稻穗期的穗颈瘟的防效在80%以上。[结论]生防菌TW-2对水稻稻瘟病菌具有强烈的抑制作用,对水稻稻瘟病具有较高的防治效果。     

水稻病害生防细菌的筛选及其生物活性测定

从健康水稻植株体表筛选对稻瘟病等水稻主要病害有益的生防细菌 ,在室内分离到对稻瘟病等病菌菌丝具有很强抑制能力的细菌菌落 2 7株 ,经室外试验测定 ,有 9个细菌菌落对稻瘟病、纹枯病等具有一定的防治作用。其中 ,G_0 5的防治效果最佳 ,叶瘟、穗颈瘟防效分别为 5 0 8%和 4 4 7% ,纹枯病的防效达到 4 6 1% ,是一个非常有应用前景的菌株     

酶法制备鱼骨胶原多肽螯合钙的研究

以鲽鱼骨为原料,采用酶法制备鲽鱼骨胶原多肽螯合钙,优化鲽鱼骨胶原多肽螯合钙合成工艺参数。分析pH与酶解时间对鲽鱼骨胶原多肽功能特性的影响,在单因素试验的基础上采用正交试验,以螯合率为指标,研究多肽液与骨粉酸解液体积比、pH、反应温度和反应时间对骨胶原多肽与鲽鱼骨粉酸解液螯合反应的影响。结果表明:采用碱性蛋白酶为酶制剂,pH为8,温度60℃条件下酶解1h所得的骨胶原多肽具有良好的溶解性、热稳定性和乳化性。采用体积比为3∶1的多肽液与骨粉酸解液为螯合反应液,pH 8,反应温度40℃,螯合40min得到的产品螯合率最高,为98.64%。     

不同药剂对稻瘟病的防治效果

为筛选适合防治稻瘟病的药剂,以空育131水稻品种为试材,选用30%富米乐（900、1 200 mL·hm^-2）和40%富士一号（1 500 mL·hm^-2）药剂进行稻瘟病的田间防效试验。结果表明：30%富米乐（1 200 mL·hm^-2）效果最好,叶瘟防效为73.1%,穂颈瘟的防效达到75.5%,且能提高结实率和干粒重,产量达到9 490.5 kg·hm^-2,比清水对照增产17.9%。     

水稻稻瘟病与生态环境及施肥的关系

试验通过小区和异地盆栽对稻瘟病发生严重的生态环境条件以及如何通过施肥防治稻瘟病发生进行研究。结果表明，稻瘟病的发生与当地气候条件有很大关系，施用钾肥可达到预防的目的，最佳氮磷钾比例为１∶０．５∶１。     

水稻无公害生产病虫草调控技术研究

利用无公害农药和农业措施防治水稻主要病虫草害,试验结果表明,多抗霉素在水稻分蘖末期和孕穗末期各喷施1次,对纹枯病防效达75.16%～94.27%,优于化学杀菌剂三唑酮;春雷霉素和灭瘟素在叶瘟病发生初期及破肚期、齐穗期各喷施1次,对叶瘟防效为50.54%～72.67%,穗瘟为76.66%～87.42%,与化学杀菌剂三环唑相当。无公害农药在二化螟和稻纵卷叶螟1～2龄幼虫期使用,苏云金杆菌防效优于化学杀虫剂杀虫双,皂素烟碱和苦参碱与杀虫双相当;皂素烟碱和苦参碱在稻飞虱1～2龄若虫期使用,药后3～30d防效均在70%以上,低于化学杀虫剂吡虫啉。在水稻移栽前耕地2次,再配合施用适量的未腐熟有机质或人工除草,能控制杂草发生和提高产量。采用无公害农药和农业措施防治水稻病虫草,产量较常规化防区略有增加,稻谷中农药残留量较化防区低,符合绿色食品卫生指标要求。     

嗜碱假单胞菌Ej2对稻瘟病的防治效果及对水稻内源激素的影响

【目的】明确水稻内生菌嗜碱假单胞菌（Pseudomonas alcaliphila）菌株Ej2对镰孢菌（Fusarium spp.）等病原菌的抑菌效果,重点研究对稻瘟病的防治作用及对水稻内源激素的影响,为稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）杀菌剂的研发提供新的生防菌资源。【方法】嗜碱假单胞菌菌株Ej2分离于水稻叶片,采用对峙培养法测试该菌株对稻瘟病菌以及对镰孢菌、草莓炭疽病菌（Colletotrichum gloeospoioides）、链格孢苹果专化型（Alternaria alternata f. sp. mali）BJ-A5和草莓黑斑病菌（A. alternata) BJ-ST24等病原真菌的抑菌效果,并检测其挥发性物质对稻瘟病菌的抑菌作用以及发酵液对水稻种子萌发的促进作用,盆栽法检测对水稻叶瘟的温室防治效果,通过小区试验验证对叶瘟和穗颈瘟的田间防治效果及对水稻的促生效果,采用基于MRM方法的靶向代谢组学技术检测发酵液喷施3次对胁迫激素、细胞分裂素等水稻内源激素的影响。【结果】嗜碱假单胞菌菌株Ej2及其挥发性物质对稻瘟病菌菌丝生长具有显著拮抗作用,对水稻叶瘟的温室防治效果为78.26%,与75%三环唑可湿性粉剂无显著差异;对叶瘟和穗颈瘟的田间防治效果分别为75.07%—83.67%和62.79%—75.09%,对叶瘟的田间防治效果与稻瘟酰胺有显著差异,对穗颈瘟的田间防治效果与稻瘟酰胺无显著差异。菌株Ej2对西瓜枯萎病菌（F. oxysporum f. sp. niveum）、茄镰孢（F. solani）、串珠镰孢（F. moniliforme）、草莓炭疽病菌、链格孢苹果专化型和草莓黑斑病菌5种植物病原真菌具有抑菌活性。与清水对照相比,Ej2发酵液显著增加水稻种子萌发率、株高和穗重;喷施3次后,植物胁迫激素中的乙烯（ETH）和脱落酸（ABA）含量显著增加,细胞分裂素中的玉米素核苷（czR）、反式玉米素核苷（tZR）和异戊烯基腺嘌呤核苷（iPR）激素含量显著下降,植物生长素（IAA）、茉莉酸（JA）、顺反茉莉酸类激素(cis-OPDA)、茉莉酸-异亮氨酸（JA-LIE）、顺式玉米素（cZ）、反式玉米素（tZ）、异戊烯基腺嘌呤（iP）、水杨酸（SA）等植物内源激素含量无显著变化。【结论】嗜碱假单胞菌菌株Ej2具有防病、促进作物生长及增强水稻植株抗逆性的作用,是一种可以防治稻瘟病等真菌病害的生防微生物。     

水稻稻瘟病拮抗链霉菌的筛选

为从自然生态环境中寻找对水稻稻瘟病菌有拮抗作用的链霉菌,采用平板对峙法,从土壤中筛选出4株对稻瘟病菌有明显抑制作用的链霉菌St-10、St-85、St-107、St-120,通过测定拮抗带宽度并对拮抗菌株发酵液拮抗性的测定,最终得到1株高拮抗活性物质菌株St-10,抑菌率为52.0%。但试验分离到的菌株能否用于田间防治水稻稻瘟病,还需要进一步研究。     

3种常用植物源农药对甘蓝蚜的室内毒力测定和田间防效试验

为评估植物源农药对甘蓝蚜的毒力和防效,科学指导蔬菜用药,选取3种常用植物源农药,进行室内毒力测定和田间防效试验。毒力测定结果：10%印楝素ME对甘蓝蚜毒力作用最强,LC₅₀依次为1.5%除虫菊素EW 0.100 2 mg/L>5%阿维菌素EC 0.059 7 mg/L>10%印楝素ME 0.031 7 mg/L。防效试验结果：10%印楝素ME 2 000倍液在药后3 d达到最高,校正防效为91.15%; 5%阿维菌素EC 2 000倍液在药后3 d达到最高,校正防效为90.20%;1.5%除虫菊素EW 1 500倍液在药后7 d达到最高,校正防效为84.18%。结论：3种植物源农药都表现出一定的毒力强度和很好的防治效果,可参考选用。     

药剂防治水稻稻瘟病及施药技术的初步研究

研究稻瘟病的药剂防治,结果表明:20%氰菌胺SC 750～1 000 g/hm2对水750 kg/hm2防治稻瘟病效果显著;其次为40%富士1号EC 1 250 g/hm2对水750 kg/hm2.在施药技术上应注意多种药剂交替使用,在叶瘟发生初期及破口和齐穗期雨前各施药1次,可以有效控制稻瘟病的发生危害.分析了稻瘟病发生流行的影响因素,评价了常用的稻瘟病防治药剂.