雌激素对大鼠小脑神经元生长发育的影响

    为了观察雌激素对离体培养神经元的生长发育及神经分泌的影响,取1日龄SD大鼠,对小脑神经细胞进行培养,通过补充17β-雌二醇观察神经细胞生长发育情况及运用免疫组织化学SP法研究雌激素受体(ER)、神经生长因子(NGF)和胆碱乙酰转移酶(ChAT)的表达变化结果表明,雌激素对体外培养小脑神经元的生长、发育影响显著,可促进胞体的生长、突起的伸长;延长培养神经元的存活时间,阻止神经元的退化、萎缩和死亡雌激素对体外培养小脑神经元的神经分泌功能影响显著,可促进培养神经元ER、NGF和ChAT的表达,显著增加ER、NGF和chAT阳性神经元的数量并呈现出培养时间依赖性的变化说明雌激素通过ER可直接或间接地作用于培养神经元,发挥神经营养和调控神经信息传递的作用     

大豆异黄酮对去卵巢大鼠小脑ERα、NGF、IL-2、AR mRNA表达的影响

建立去卵巢SD大鼠模型,运用原位组织杂交方法,通过补充不同剂量大豆异黄酮观察其对ERα、NGF、IL-2、AR mRNA在小脑中的表达和分布影响,探讨大豆异黄酮对小脑的作用机制和意义及其剂量关系。结果显示:ERα、NGF、IL-2、AR mRNA杂交信号主要分布于小脑皮质的蒲肯野氏细胞层和小脑室顶核、间位核和齿状核中,小脑皮质的分子层和颗粒层也有少量弱杂交信号表达;杂交信号主要定位于胞核,也存在于胞浆、胞膜和突起中,4种杂交信号变化的总趋势为去卵巢大鼠小脑皮质及小脑核中ERα、NGF、IL-2、AR mRNA的表达强度和阳性数目显著降低;而补充不同剂量大豆异黄酮后,4种物质的阳性杂交信号强度和数目均有不同程度回升,其中高剂量组基本恢复到假手术组水平,低剂量组仅有少许回升或无变化,中剂量组介于两者之间。从以上结果得出:大豆异黄酮可在基因水平上促进ERα、NGF、IL-2、AR在小脑中的表达,且存在剂量依赖性;这4种物质表达变化的相似性提示四者在大豆异黄酮对小脑的作用中是相互调节和影响的。     

雌激素α、β受体在雌性山羊星状神经节的分布

【目的】研究雌性山羊星状神经节中雌激素受体(Estrogen receptor,ER)的分布特点,探讨雌性山羊星状神经节神经元对雌激素是否具有反应性。【方法】取雌性山羊星状神经节,制作石蜡切片,经免疫组化SP法染色后,在数码显微镜下拍照,用高清晰图像分析系统对ER的分布特点进行分析,并计算相对表达量。【结果】在星状神经节的神经元胞体、卫星细胞和过路纤维中均有ERα、ERβ免疫阳性产物分布,但主要分布于神经元胞体。在神经元胞体中,细胞膜和细胞质为强阳性染色,而细胞核为弱阳性染色。ERα在神经元胞体中的相对表达量显著高于非神经细胞结构(P0.05),ERβ在神经元胞体中的相对表达量极显著高于非神经细胞结构(P0.01)。【结论】雌性山羊星状神经节神经元具有对雌激素刺激反应的受体,提示星状神经节可能作为雌激素作用于心血管的内分泌途径和自主神经对心血管调节的神经途径之间相互协调的网络节点,从而对心血管系统起调节作用。     

17-β雌二醇对去卵巢大鼠垂体前叶IFN-γ表达的影响

【目的】探讨雌激素对去卵巢大鼠垂体前叶γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)表达的影响。【方法】将大鼠分为对照组(CG组)、去卵巢组(OVX组)和去卵巢并用17-β雌二醇治疗组(OVX+E2组),应用免疫组化SP法检测不同时程各组大鼠垂体前叶IFN-γ免疫阳性物质含量的变化特点。【结果】去卵巢后不同时程,OVX组大鼠垂体前叶IFN-γ表达较CG组显著减少(P<0.05);OVX+E2组大鼠IFN-γ表达显著回升(P<0.05),且在第4周时回升至CG组水平。【结论】雌激素对大鼠垂体前叶IFN-γ免疫阳性物质的表达有明显影响,提示IFN-γ可能以自分泌或旁分泌方式,参与雌激素对垂体前叶调节功能的部分作用。     

IFN-γR和ER在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中的共表达

为了探索干扰素-γ受体(IFN-γR)和雌激素受体(ER)在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中的相互关系,用免疫组化Max Vision双标法,对正常成年雌性SD大鼠下丘脑、垂体、卵巢中IFN-γR和ER共表达情况及分布特点进行了研究。结果表明,IFN-γR和ER双标记阳性细胞广泛存在于大鼠下丘脑多个核团中,并且也分布在垂体和卵巢组织中;IFN-γR阳性产物主要存在于细胞质中,少数为全细胞着色;ER阳性产物主要存在于整个细胞中,部分为核表达。推测γ-干扰素(IFN-γ)和雌激素在大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴中,以其各自的受体为介导进行两种物质间的信息传递,以此共同参与机体的神经免疫内分泌调节。     

17β-雌二醇上调绵羊输卵管上皮细胞β-防御素-2(SBD-2)表达的可能信号通路研究

【目的】探讨17β-雌二醇(E2)上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2表达的可能信号通路。【方法】分离培养绵羊输卵管上皮细胞,将第2代输卵管上皮细胞分为E2(10-8 mol/L)组、雌激素受体拮抗剂ICI182780(10-7mol/L)组、PKA阻断剂KT-5720(1μmol/L)组、PKC阻断剂H-7(50μmol/L)组、NF-κB阻断剂PDTC(50μmol/L)组及空白对照(Control)组,在不同阻断剂组加入各自阻断剂干预绵羊输卵管上皮细胞1h后,在各阻断剂组和E2组中再加入10-8 mol/L 17β-雌二醇培养6h,然后采用实时荧光定量RT-PCR方法检测各组SBD-2mRNA表达水平的变化。【结果】10-8 mol/L 17β-雌二醇可显著上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2mRNA的表达(P<0.05);雌激素受体拮抗剂ICI182780、NF-κΒ阻断剂PDTC、PKC阻断剂H-7均可阻断17β-雌二醇对SBD-2的上调作用,PKA阻断剂KT-5720对17β-雌二醇介导的SBD-2上调无明显影响。【结论】17β-雌二醇上调绵羊输卵管上皮细胞SBD-2的表达由雌激素核受体、NF-κΒ、PKC信号转导通路所介导,而PKA不参与17β-雌二醇对SBD-2的上调作用。     

雌激素对大鼠脑重量的影响

为了研究雌激素对脑重量的影响,对雌激素下降或去除的老年和去卵巢大鼠补充17β-雌二醇,结果发现,老年和去除卵巢大鼠的平均脑重较之青年大鼠和假手术大鼠显著降低(P<0.05或P<0.01)。而补充外源性17β-雌二醇后,脑的重量有显著增加,基本恢复其正常状态。这些结果表明雌激素对神经元结构和功能的维持是必须的,且对神经元具有营养和保护作用,能够维持其脑的重量,延缓或阻止其重量的降低。     

雏鸵鸟脾脏的显微与超微结构及脾内5-HT的分布定位

 【目的】观察雏鸵鸟脾脏的解剖学、显微和超微结构特点，探明5-HT免疫反应阳性细胞在脾内的分布规律。【方法】采用光镜和电镜制片及染色技术，并结合免疫组化SABC法对5-HT在脾脏内的表达进行定位。【结果】雏鸵鸟脾脏被膜较薄，小梁不发达；白髓内动脉周围淋巴鞘薄，偶见脾小结，但无生发中心；淋巴细胞内含较多的线粒体、游离核糖体及少量RER，核膜双层，有明显的核膜孔；椭球体积小，其周围淋巴鞘较厚，且数量多，椭球与周围淋巴组织之间有强嗜酸性均质物形成的明显界限，鞘毛细血管外细胞胞质内富含RER、线粒体和游离核糖体。5-HT免疫反应阳性细胞呈圆形或卵圆形，胞体较大，胞质较多，核多位于细胞一侧，阳性产物位于胞质内；红髓内阳性细胞数量最多，阳性产物表达最强；动脉周围淋巴鞘内阳性细胞数量较少，但阳性产物表达较强；而椭球内有弱阳性产物表达。【结论】雏鸵鸟椭球周围淋巴鞘数量远比动脉周围淋巴鞘的多；椭球与周围淋巴组织之间界限明显，其间的强嗜酸性物质主要由纤维构成；5-HT免疫阳性细胞数量较多，主要位于红髓、动脉周围淋巴鞘和椭球，阳性产物表达强；脾脏是合成外周5-HT的重要场所，可能主要由浆细胞和原浆细胞合成分泌；外周5-HT可能参与机体的体液免疫应答反应。     

亚麻籽木脂素对雄性大鼠肌肉生长的促进作用及机制探讨

 【目的】以大豆黄酮为对照，研究亚麻籽木脂素对雄性大鼠骨骼肌生长的影响并探讨其作用机制。【方法】在SD雄性大鼠基础日粮中分别添加大豆黄酮（5 mg?kg-1）和亚麻籽木脂素（50 mg?kg -1），利用高压液相色谱、放射免疫分析、RT-PCR等方法，分析大鼠血清中亚麻籽木脂素及两种主要代谢产物（肠内酯、肠二醇）浓度、睾酮及生长激素含量、比目鱼肌和下丘脑中ERβmRNA的相对表达量。【结果】亚麻籽木脂素与大豆黄酮均能显著提高雄性大鼠饲料利用率，促进大腿肌肉增重，提高腿肌中RNA/DNA的比值，促进下丘脑和比目鱼肌中ERβ mRNA表达量显著上升，使大鼠血清中睾酮含量增加，极显著性降低血清中尿素氮含量。【结论】亚麻籽木脂素可能通过与ERβ结合，作用于下丘脑-垂体-性腺轴，调节大鼠血清中睾酮水平，抑制蛋白质分解，促进骨骼肌卫星细胞与肌细胞的融合，从而促进骨骼肌生长。     

GABA免疫阳性神经元在三黄鸡小脑内的分布

为探明三黄鸡小脑皮质各层的细胞构筑和GABA免疫反应神经元在其小脑内的分布情况,采用尼氏染色和免疫组织化学SABC技术,对10羽三黄鸡的小脑进行了研究。研究发现:三黄鸡小脑皮质各层的细胞构筑与北京鸭、乌鸡、鸽子和非洲鸵鸟的大体相似;GABA免疫阳性细胞位于小脑皮质的蒲肯野细胞层中,阳性较明显;小脑中央核也有大量阳性神经元,多数呈梭形或不规则多边形,多数神经元胞质呈强阳性染色。以上结果表明:GABA阳性神经元在三黄鸡小脑皮质各层均有分布,GABA可能在介导小脑复杂功能中发挥重要作用。     

Effects of Estrogen on ER, NGF, and ChAT Expression in Cerebellum of Aging Female Sprague-Dawley Rat

This article discusses the effects of estrogen on the expression of estrogen receptor （ER）, nerve growth factor （NGF）, and choline acetyltransferase （CHAT） in the cerebellum of rats. The model of aging female rat was established to study the expression and distribution of ER, NGF, and ChAT in the cerebellum following 17β-estradiol treatment using the technique of immunohistochemical ultrasensitive SP in sprague-dawley rat. The immunoreactive productions were distributed in stratum Purkinje cell, nucleus dentatus, nucleus interpositus, and nucleus fastigii of cerebellum, and the ER positive production was mainly located in the plasma, cytoplasmic membrane, and neurite, and also existed in nucleus. The general tendency of the expression of ER, NGF, and ChAT positive production in the cerebellum cortex and nuclei of aging rat significantly decreases, while the intensity and quantity of the immunoreactive production ascends predominantly after 17β-estradiol treatment. Simultaneously, the positive neurite of Purkinje cell shows a similar tendency. The above- mentioned results suggest that the estrogen upregulates the expression of NGF and CHAT, and plays a vital role in sustaining and protecting the structure and function of cerebellum neurons. Furthermore, the similarity of their changing tendency implies that they were correlated and cooperated during the course in effect of estrogen on cerebellum. It also showed that the action of estrogen in cerebellum could be via genomic and nongenomic mechanism.     

花䱻抗缪勒氏管激素基因克隆、抗体制备及其对外源雌激素的响应

【目的】克隆花䱻抗缪勒氏管激素基因Amh,分析其序列特征及亚细胞定位,检测不同浓度雌二醇处理下的表达变化规律,为后续研究Amh基因的功能及其在卵巢发育中分子机制提供理论参考。【方法】基于花转录组文库测序结果,克隆Amh基因cDNA序列,并对其进行生物信息学分析。构建重组表达质粒pET32a-Amh,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,用纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。通过免疫荧光技术检测荧光信号确定蛋白的亚细胞定位情况。同时,利用实时荧光定量PCR检测Amh基因在雌二醇处理后的表达情况。【结果】克隆的花䱻Amh基因cDNA序列全长为1849 bp,开放阅读框（ORF）为1671 bp,编码556个氨基酸残基。系统进化分析结果显示,花䱻Amh基因与斑马鱼、鲤鱼等鲤科鱼类Amh基因聚为一支,表明其亲缘关系较近。将纯化的AMH重组蛋白免疫小鼠以制备AMH多克隆抗体,通过酶联免疫方法（ELISA）检测其抗体效价为2.4×106以上,Western blotting检测显示抗体具有特异性。AMH蛋白在花卵巢颗粒细胞表达。利用不同浓度的雌二醇处理花䱻60 d后发现,低浓度雌二醇（100 μg/g）促进花䱻卵母细胞生长,卵巢内皮质液泡数量增多。经雌二醇处理后,卵巢中Amh基因的表达量降低,说明雌激素在卵巢发育中对Amh基因表达具有抑制作用。【结论】Amh基因含有TGF-β家族典型的结构域,在卵巢颗粒细胞表达,且响应雌激素的调控,可能在花䱻卵巢发育中发挥调控作用。     

雌激素受体α和孕激素受体在不同发情周期牦牛子宫中的表达变化

 【目的】观察发情周期不同阶段牦牛子宫中ERα、PR mRNA和蛋白的表达变化。【方法】采用实时荧光定量PCR技术和免疫组织化学SP法分别对发情期、发情后期、间情期和发情前期牦牛子宫中ERα和PR mRNA及ERα和PR蛋白的表达特点进行了研究。【结果】发情周期不同阶段牦牛子宫内膜和肌层中均有ERα mRNA和 PR mRNA的表达，ERα和PR蛋白免疫阳性产物表达于子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞、基质细胞、血管内皮细胞和子宫肌层平滑肌细胞中；子宫内膜中ERα mRNA和PR mRNA在发情后期表达最强，间情期显著下降（P＜0.05），发情前期回升；ERα和PR蛋白表达在发情期最强而间情期最弱；子宫肌层中ERα mRNA和PR mRNA的表达在发情期较高，发情后期显著下降（P＜0.05），间情期降到最低，发情前期显著回升（P＜0.05），且达到最高值；ERα和PR蛋白发情期表达最强，间情期最弱，但其间无显著差异（P＞0.05）。【结论】ERα和PR在牦牛子宫内膜和肌层中随发情周期不同呈周期性变化，参与调节发情周期不同阶段牦牛子宫内膜及肌层功能的发挥。     

玉米种胚内质网胁迫相关基因对人工老化处理的响应

【目的】在植物中,内质网胁迫(endoplasmic reticulum stress,ERS)和未折叠蛋白应答(unfolded protein response,UPR)参与环境胁迫响应过程,然而,玉米种子老化过程中内质网胁迫相关基因表达情况尚未见报道。文章利用基因数字表达谱技术探究玉米种子老化过程中内质网胁迫相关基因表达规律,以期为揭示种子衰老的分子机制提供理论依据。【方法】以玉米杂交种郑单958种子为材料,采用高温(45℃)高湿(相对湿度100%)的方法进行人工老化处理。分别提取未老化处理(对照)和老化处理3 d的玉米种胚总RNA,利用Illumina Hi Seq TM 2000平台进行高通量测序。去除原始数据中的接头序列、包含模糊碱基的序列以及低质量序列,获得Clean reads,利用短序列比对软件SOAPaligner/SOAP2将Clean Reads分别比对到玉米参考基因组和参考基因序列,采用RPKM(reads per kb per million reads)方法计算基因的表达量,根据FDR(false discovery rate)0.001和|log2 ratio(T/CK)|≥1的标准筛选差异表达的基因,对获得的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)进行KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)数据库功能注释分析,筛选出响应人工老化的内质网胁迫相关差异表达基因。利用q RT-PCR技术定量分析内质网胁迫相关基因在不同人工老化时间内的表达特性。【结果】基因数字表达谱鉴定结果表明,有104个差异表达基因在人工老化过程中参与内质网蛋白质加工(protein processing in endoplasmic reticulum)通路,其中内质网胁迫相关基因有97个(81个上调表达,16个下调表达)。对差异表达基因功能注释分析表明,内质网胁迫的标志性蛋白基因Bi P以及分子伴侣蛋白基因CRT、CNT和GRP94等显著上调表达。参与内质网相关性降解(endoplasmic reticulum-associated degradation,ERAD)途径的有83个差异表达基因(70个上调,13个下调),其中启动ERAD途径的关键酶基因EDEM(ER degradation enhancing mannosidase I-like protein)下调,参与蛋白泛素化的E2泛素结合酶基因Ubc H5、E3泛素连接酶基因Hrd1和Doa10等也发生显著的表达变化。q RT-PCR结果表明,内质网胁迫相关基因在不同人工老化时间内表现表达多样性和复杂性。【结论】人工老化处理能造成玉米种胚细胞发生内质网胁迫。细胞通过上调分子伴侣基因表达和诱导ERAD途径响应内质网胁迫,但ERAD途径受阻可能引起错误折叠蛋白聚集,从而进一步加剧细胞损伤,最终导致种子活力降低甚至丧失。     

公鸡生殖器官组织结构及其IL-1β和IL-6在生殖器官中的定位

【目的】IL-1β和IL-6在公鸡生殖器官免疫保护中发挥着重要的作用,研究拟揭示公鸡生殖器官的组织构造,以及定位IL-1β和IL-6在其生殖器官中的表达部位。【方法】通过苏木精-伊红染色方法,制作正常生理状态下公鸡生殖器官切片,观察公鸡生殖器官的组织构造以及生殖管道上皮细胞变化规律;同时采用免疫组化定位IL-1β和IL-6在生殖器官的部位。【结果】实验表明,附睾中的管道在公鸡生殖管道中占有很大比例,且生殖管道的上皮细胞的变化特征与其输送精液高度适应;IL-1β和IL-6主要定位于附睾近端输出管上,且IL-1β主要定位于短皱褶的近端输出管,IL-6主要定位于长皱褶的近端输出管上。【结论】结果表明附睾的输出管,尤其是近端可能是清除生殖道中的异常精子、脱落细胞等异物的主要部位。     

益母草总黄酮对去卵巢大鼠下丘脑和海马雌激素受体α及β mRNA表达的影响

目的：观察益母草总黄酮对去卵巢大鼠下丘脑和海马雌激素受体α及β mRNA表达的影响,探讨其对绝经后骨质疏松的作用机制。方法选取10~11月龄SD雌性大鼠48只,随机分为对照组、去势组、益母草总黄酮组和雌二醇组,以双侧卵巢切除法建立大鼠骨质疏松模型。益母草总黄酮组、雌二醇组分别用益母草总黄酮、雌二醇给药4个月,采用RT-PCR法检测各组下丘脑和海马雌激素受体α及β mRNA的表达。结果大鼠卵巢切除后,血清中雌二醇水平、椎骨骨密度、子宫湿重、下丘脑和海马雌激素受体α及βmRNA的表达均明显下降。雌二醇治疗后血清中雌二醇水平、椎骨骨密度、子宫湿重升高,下丘脑和海马β mRNA的表达均明显下降。益母草总黄酮治疗后,血清中雌二醇水平、椎骨骨密度、下丘脑和海马雌激素受体α及β mRNA的表达均明显升高,子宫湿重无明显改变。结论益母草总黄酮对切除卵巢所致的骨质疏松大鼠有防治作用,对子宫无不良影响。     

雄激素对大鼠嗅球中AR和NGF蛋白表达的影响

利用免疫组化SP法,检测了去势及去势后补充雄激素大鼠嗅球中雄激素受体(A ndrogen recep-tors,AR)和神经生长因子(N erve grow th factor,NGF)蛋白的表达情况,探讨了雄激素对嗅球的作用机制。结果表明,睾丸摘除组大鼠嗅球内AR与NGF蛋白的表达显著减少;睾丸摘除并用睾酮替代组大鼠嗅球内2种蛋白的表达接近正常水平。说明去睾丸大鼠由于缺乏内源性雄激素,会引起嗅球内AR和NGF蛋白表达减少,而补充外源性雄激素可缓解或抑制这一变化。     

劳动力老龄化对农户生产技术效率的影响——基于1430个农户水稻生产数据分析

【目的】研究农村农业劳动力老龄化、经营特征和区域特征等因素对稻农生产技术效率的影响,为提升水稻生产技术效率提供参考和建议。【方法】采用长江流域12个省(直辖市)的1430个农户水稻生产的微观调研数据,运用随机前沿生产函数模型和效率损失模型,对比经营特征和区域特征等因素,分析农户不同年龄段特征对农业生产技术效率的影响。【结果】长江流域水稻种植农户老龄化现象普遍,农忙时节劳动力相对不足;受体力及人力资本限制,老龄劳动力的技术效率高于年轻农户;增加当前结构劳动力生产要素的投入量,并不能有效带来水稻种植产出增加。对比看来,长江上游地区老龄劳动力平均技术效率水平最高;下游地区中年农户技术效率水平最稳定,部分地区农户水稻生产技术效率仍有提升空间。老龄农户当前流入土地比率大于年轻农户,但未来土地流转倾向低于年轻农户;文化程度、参加农业技术培训人次、专业协会、农资经营部门和农技推广部门等变量对技术效率有正向影响,而是否为村干部、土地流转情况、家庭兼业情况、基层信息服务站及地方政府等变量则对技术效率有显著的负向影响。【建议】应客观认识农业劳动力老龄化因素对稻农生产技术效率的影响,从出台优惠政策吸引劳动力回流、加强农业技能培训、完善土地流转机制、健全农业信息发布机制等方面着手,提升稻农生产技术效率。