黄孢原毛平革菌过氧化物酶的分离、纯化和酶学特性研究

从木质素降解菌Phanerochaete chrysosporium中纯化出两种木质素降解酶：木质素过氧化物酶（LiP）和锰依赖过氧化物酶（MnP）。经测定LiP和MnP的分子量分别为37kD和40kD，最适作用温度均是37屯；保温2h，LiP的半失活温度为40℃，MnP为45℃；LiP最适作用pH2．8，稳定pH2．2—5．2；MnP最适作用pH4．6，稳定pH4．0—7．0。Fe^2＋LiP和MnP均表现出促进作用，Na^＋、K^＋、Ca^2＋、Mg^2＋、Zn^2＋、Fe^3＋、Ag^＋、CO^2＋、NH4^＋对LiP有促进作用，对MnP则表现出抑制作用。与此相反，Mn^2＋对MnP酶活的高效促进作用，对LiP表现出了轻度的抑制作用，这也体现出了MnP对Mn^2＋的依赖性。Cu^2＋对LiP活性无影响，而对MnP有强烈的抑制作用。Fe^3＋两者活性的抑制都达到了90％。     

嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiacus var.levisporusβ-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性研究

采用室内培养、测定方法，对嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiaeus var．1ez，lecisporus产生的β-葡萄糖苷酶进行了分离纯化及特性研究。粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE—Sepharose Fast Flow阴离子层析、Phenyl-Sephamse疏水层析等步骤获得了凝胶电泳均一的β-葡萄糖苷酶。结果表明，经12％SDS-PAGE测得酶的单亚基分子量约为118kDa,凝胶过滤层析测得酶的分子量约为350kDa。该酶反应的最适温度和最适pH分别为80℃和4．5～5．0，在pH5．0条件下．该酶在70℃条件下基本稳定，80℃保温30min，剩余酶活为15％。金属离子对β-葡萄糖苷酶活性影响较大．其中Ca^2＋、Ba^2＋对酶有激活作用；Ag^＋、Fe^3＋、Cu^2＋对酶有显著的抑制作用。该酶对水杨苷具有很强的底物特异性。     

木聚糖降解细菌的鉴定及其木聚糖酶的特性

[目的]探讨木聚糖酶的生理生化特性。[方法]采用平板活性筛选法从不同环境样品中筛选出木聚糖降解能力最强的菌株进行鉴定并对其所产粗木聚糖酶的特性进行研究。[结果]菌株GXM1被鉴定为洋葱假单胞菌,菌株GXM4为类芽孢杆菌。菌株GXMI所产木聚糖酶的最适pH为6．0,最适温度为55℃,菌株GⅫ咐所产木聚糖酶的最适pH为6．0,最适温度为50℃。2株菌株所产的木聚糖酶在40℃以下较为稳定。Mn^2＋、Ca^2＋和Zn^2＋对菌株GXM1所产木聚糖酶有显著的激活作用,而Cu^2＋、Fe^2＋和Fe^2＋对其有显著的抑制作用;Ca^2＋和Fe^3＋对菌株GXM4所产木聚糖酶有显著的激活作用,而Mn^2＋、Zn^2＋和Fe^2＋对其有显著的抑制作用。[结论]为高效木聚糖酶的生产应用奠定了理论基础。     

枯草芽孢杆菌WHNB 02植酸酶的酶学性质研究

从118份样品中分离到1株产植酸酶的枯草芽抱杆菌（Bacillus subtilis WHNB02）,其发酵液经乙醇沉淀、硫酸铵分级沉淀及Sephadex G-100柱层析等步骤后分离纯化了该酶,纯化倍数约为31．5倍,回收率为13．0％。该酶为单体酶,SDS—PAGE测得的分子量约为43KD,以植酸钠为底物的Km值为0．5mmol／L,酶反应的最适温度为60℃,80℃作用10min酶活保存61％,最适pH为7．0,在pH6．0—10．0范围内稳定,酶活性及稳定性都需Ca^2＋存在。EDTA,Mn^2＋,Ba^2＋（5mmol／L）对酶活具有很大的抑制作用。     

柿果实乙醇脱氢酶酶学特性研究

以磨盘柿（Diospyroskaki Thunb．）果皮为试材,提取乙醇脱氢酶（Alcohol Dehydrogenase）并进行纯化。经过30％～70％硫酸铵沉淀分离、SephadexG-25脱盐柱脱盐、DEAESepharose Fast Flow离子交换层析纯化后,研究温度、pH、金属离子、底物对乙醇脱氢酶活性的影响。结果表明,纯化后乙醇脱氢酶纯化倍数为41．80倍,活性回收率为44．73％。将乙醇脱氢酶酶液分别置于20、30、40、45、50、55和60℃温育后测定,其最适反应温度为45℃;在pH5．0、7．0、8．0、9．0、10．0和11．0下乙醇脱氢酶的最适PH为10．0;在甲醇、乙醇、丙醇、丁醇和戊醇为反应底物时,最适底物为丁醇;金属离子中,K^＋0和Na^＋对活性略有增强的作用,二价金属离子除Mg2＋几乎没有影响之外,Zn2＋、Mn2＋和Ca^2＋对酶活性有一定的抑制作用,Cu^2＋和Fe^3＋则完全抑制了酶的活性。在25℃,pH10．0的条件下ADH氧化乙醇的米氏动力学参数Km值为8．33mmol／L,最大反应速度Vmax为0．021μmol／min。乙醇脱氢酶的活性受温度、pH、金属离子、底物的影响较大,并且只有在合适的条件下,酶活性才能达到最大值。     

蟹源副溶血弧菌胞外蛋白酶的纯化与特性分析

采用硫酸铵盐析、Sephadex G-100凝胶层析和DEAE—Cellulose离子交换柱层析等方法,从中华绒螯蟹Eriocheir sinensis弧菌病病原菌——副溶血弧菌Vibrio parahemolyticus的胞外产物中分离纯化出两种具有致病作用的胞外蛋白酶。相对分子质量为39600的蛋白酶是一种金属蛋白酶,EDTA可抑制其活性,金属离子Cu^2＋、Mg^2＋、Fe^2＋对该酶有抑制作用,而Ca^2＋对其则有一定程度的激活作用;该酶在50—60℃下热稳定性最好,最适pH为9。而相对分子质量为20000的蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶,EDTA对其酶活力几乎没有影响,但苯甲基磺酰氟（PMSF）可抑制其酶活性;该酶的最适温度为50℃,最适pH为8。     

一株降解PCBs嗜盐菌的筛选及产酶条件研究

从深海底泥中提取出一株生长盐度在15％的降解PCBs的嗜盐菌，并将其命名为B2．6。此菌株能以PCBs为惟一碳源和能源生长．72h的降解率可达90％以上。对其进行了形态观察、革兰氏染色及各项生理生化指标鉴定，并和Biolog细菌鉴定系统鉴定的结果进行了比对。研究结果表明，菌株B2．6合成PCBs降解酶的模式为延续合成型；主族的一价离子Na^＋．K^＋能够提高PCBs降解酶的酶活，过渡金属离子Co^2＋, Mn^2＋, Cu^2＋, Fe^2＋和Fe^3＋酶活则有一定程度的抑制；此酶的最适温度和pH值分别为25～35℃和pH6-8。     

嗜碱菌AL-103果胶酶酶学性质的研究

研究了嗜碱菌AL-103果胶酶酶学性质。经硫酸铵盐析和缓冲液透析,获得粗酶,该酶最适反应温度60℃,最适作用pH6,40℃保温10min酶活基本不损失,在pH7．0～10．5范围内酶蛋白稳定：Li^＋、Ca^2＋和Mg^2＋对酶有激活作用,AL^3＋有抑制作用,Co^2＋、Pb^2＋、Fe^3＋、Mn^2＋和Hg^2＋有强烈抑制作用。     

产碱性纤维素酶真菌的筛选鉴定及酶学性质研究

经过初筛和复筛从从碱性土样中分离出的7株产纤维素酶的真菌中获得1株能够产碱性纤维素酶的丝状真菌t42。经18SrRNA基因序列分析和,确定该菌株为镰刀霉菌（Fusarium sp）。酶学性质初步研究显示t42的CMC酶最适作用pH值为7．5,在pH值7．0～8．5的范围内具较高的稳定性：反应温度以50℃左右为宜,且在55℃以下具有较高的温度稳定性;Mg^2＋、Mn^2＋和Zn^2＋对酶反应有促进作用,Pb^2＋和Cu^2＋对酶反应有抑制作用。     

饲料用米曲霉酸性蛋白酶研究

[目的]研究米曲霉酸性蛋白酶的纯化技术以及催化特性,为米曲霉酸性蛋白酶的开发和利用提供理论依据。[方法]采用丙酮沉淀,DEAE—Sephadex A-50柱层析方法分离纯化了米曲霉酸性蛋白酶,以酪蛋白为底物对其酶学性质进行了研究：[结果]结果表明：纯化倍数达到20．77;该酶最适pH值为6．0,最适温度为45℃;Fe^2＋、Mg^2＋对该蛋白酶的活性有明显的抑制作用,而Mn^2＋、Cu^2＋对该蛋白酶的活性有明显的激活作用。该蛋白酶Km=4．704mg/ml,Vmax=22．27μg／min。[结论]米曲霉蛋白酶具有很好的应用前景。