MTT法在木醋杆菌活力检测中的应用

[目的]采用MTT法测定木醋杆菌静置培养时的活力,旨在探索一种快速检测木醋杆菌生长及繁殖的方法。[方法]以木醋杆菌为研究对象,探讨MTT法用于细菌计数的可行性及测量细菌数量的范围,并研究反应时间、MTT的用量、离心力等试验条件对MTT法的测定效果的影响。[结果]木醋杆菌活菌数在3.90×105～1.25×107cfu/ml范围内测出的OD570值与细菌浓度呈良好的正相关,且MTT法最优的试验条件是离心力7 000 g、孵育时间4 h,MTT添加量30μl,测量前用DMSO溶解。[结论]MTT法可快速、方便的检测木醋杆菌活力。     

木醋杆菌静态培养生产细菌纤维素的研究

静态培养条件下,木醋杆菌纤维素产量取决于培养基的成分和液层深度.采用GPY培养基ф90mm培养皿中,以培养基体积为30mL-,液层深度为5mm时纤维素产量最高,达4.1mg.mL-,液层过深或过浅均不利于纤维素的产生.培养基分别以果糖、蔗糖和葡萄糖为唯一碳源时,果糖作为碳源细菌纤维素产量最高,达6.3mg·mL-;蔗糖为碳源时次之,为5.4mg·mL-;而葡萄糖为碳源时细菌纤维素产量最低,为3,9mg·mL-.     

保持木醋杆菌种子液活力的简易措施

高质量的木醋杆菌种子液是椰纤果生产过程中的关键步骤。本文从种子液的培养基组成及生产培养基改良的角度,对保持木醋杆菌种子液活力的简易措施进行了探索。结果显示,2%的葡萄糖为碳源种子培养基并补充1%乙醇时最为合适,同时在基础生产培养基中补充1%的乙醇,则纤维素产量在种子液5代连续传代中都保持了较高的水平。     

木醋杆菌静态培养生产细菌纤维素的研究

静态培养条件下，木醋杆菌纤维产量取决于培养基的成分和液层深度。采用GPY培养基φ90mm培养皿中，以培养基体积为30mL^-1，液层深度为5mm时纤维素产量最高，达4．1mg.mL^-1，液层过深或过浅均不利于纤维素的产生。培养基分别以果糖、蔗糖和葡萄糖为唯一碳源时，果糖作为碳源细菌纤维素产量最高，达6．3mg.mL^-1；蔗糖为碳源时次之，为5．4mg.mL^-1；而葡萄糖为碳源时细菌纤维素产量最低，为3．9mg.mL^-1。     

根癌农杆菌介导的深绿木霉菌T23遗传转化研究

采用根癌农杆菌介导的方法,成功地建立了丝状生防真菌深绿木霉（Trichoderma atroviride）菌株T23的遗传转化体系。并且,通过提高筛选培养基中潮霉素B的浓度和调整农杆菌的培养时间,对转化体系作了进一步的优化。转化效率约为50个突变体／10^7个分生孢子。所有转化子经继代培养5代,潮霉素B抗性筛选后,共得到118个遗传稳定的转化子。随机抽取部分转化子,进行PCR和soutllem blot分子鉴定,结果证实外源的T—DNA已经随机整合到T23的基因组中。通过形态学观察,筛选出3个在产孢量和菌丝体生长速度方面显著不同于野生型菌株T23的转化子。农杆菌介导的遗传转化方法在深绿木霉菌株T23上的成功运用,将为研究该菌的功能基因组提供强有力的工具。     

益生芽孢杆菌B.licheniformis29质粒pBL29抗性基因的筛选

采用改良碱裂解法对30株益生芽孢杆菌进行质粒抽提，仅从1株地衣芽孢杆菌B．licheniformis29菌株中抽提得到质粒pBL29，纯化后通过琼脂糖凝胶电泳观察，确证质粒pBL29为闭合环状、分子量3．7kb左右。通过药敏试验、吖啶橙消除试验、十二烷基磺酸钠消除试验及原生质体转化试验证明：B．licheniformis29菌株具有卡那霉素抗性。而且卡那霉素抗性基因是质粒编码而不是染色体编码。     

捕食线虫真菌的潮霉素抗性基因标记及其在土壤抑菌研究中的应用

用潮霉素磷酸转移酶基因(hygB)转化了捕食线虫真菌蠕虫节丛孢Arthrobotrys vermicola;转化率为1-3个转化子μg^-1DNA;转化子的潮霉素抗性稳定性为87．5％。选取了一个潮霉素抗性稳定、生长和形态与原始菌株相似的转化子Tav36。研究了其在土壤中的生长及其对线虫的捕食。证明了此转化子能够在自然土壤中正常地生长和捕食线虫。但其生长速率和对线虫的致病能力受到了土壤抑菌作用的抑制。     

木醋在蓝莓扦插繁殖与栽培中的应用

[目的]研究木醋在蓝莓扦插繁殖及栽培中的作用.[方法]以蓝莓茎段和组培苗为材料,通过对扦插生根时间、生根综合指标、株高及土壤pH的测定,分析木醋在蓝莓扦插繁殖及栽培中的作用.[结果]木醋喷施能缩短蓝莓插穗的生根时间,各处理均比对照显著降低,稀释100倍处理生根时间最短;不同处理生根综合质量均比对照明显提高,稀释200倍处理生根综合质量最高.蓝莓移栽初期,各处理间株高无显著性差异;随着木醋喷施次数的增多,各处理间植株的生长出现了差异,稀释200倍处理蓝莓的株高最高.木醋喷施有降低土壤pH的作用,稀释100倍木醋pH与对照相比降低幅度最大.[结论]可以将木醋作为一种植物生长调节物质应用于蓝莓的繁殖与栽培中.     

苏云金芽孢杆菌几丁质酶基因chiA在枯草芽孢杆菌中的分泌表达

[目的]研究来源于苏云金芽孢杆菌的几丁质酶基因chiA在枯草芽孢杆菌中的表达情况。[方法]以苏云金芽孢杆菌染色体DNA为模板,PCR扩增获取几丁质酶基因chiA,将其与枯草芽孢杆菌表达载体pHSG连接,构建重组菌,经IPTG诱导后,检测培养液中的几丁质酶活性。[结果]扩增得到几丁质酶基因chiA大小为2.5 kb。构建的重组菌对底物[4-MU-(GlcNAc)3]显示出一定的水解活性,培养液酶活约为2.8 U/ml,而pHSG空质粒转化子在同样条件下其培养液没有明显酶活。该重组酶的最适pH值为6.5,最适反应温度为50℃,与苏云金芽孢杆菌自身产生的几丁质酶性质一致。[结论]几丁质酶基因chiA能在枯草芽孢杆菌中成功表达,表达产物可成功分泌到细胞外。     

木醋肥在农业生产中的应用及发展方向

随着农业生产方式与生产技术的进步,在注重环保与健康的大前提下,新型有机肥料-木醋肥的各项性能逐渐被认识并得到重视,在农业生产的不同领域应用也将越来越广泛.对木醋肥的特性、组成以及在农业生产中的应用研究及发展前景做一介绍和总结.     

以潮霉素抗性为选择标记的毛壳霉原生质体转化

利用PEG方法，将含有潮霉素抗性标记的质粒pCB1003转化毛壳霉原生质体,并在高于毛壳霉敏感的潮霉素浓度下筛选转化子。转化率达1～2个转化子/μg质粒DNA。以潮霉素抗性的毛壳霉转化子的基因组DNA为模板进行PCR扩增及其产物的Southern杂交。结果表明，潮霉素抗性基因已整合入毛壳霉染色体。稳定性试验表明，所获得的转化子可通过有丝分裂稳定传代。     

Synthesis of Fibrils in Vitro by a Solubilized Cellulose Synthase from Acetobacter xylinum

A digitonin-solubilized cellulose synthase was prepared from Acetobacter xylinum. When this enzyme was incubated under conditions known to lead to active synthesis of 1,4-beta-D-glucan polymer (cellulose), electron microscopy revealed that clusters of fibrils were assembled within minutes. Individual fibrils are 17 +/- 2 angstroms in diameter. Evidence that the fibrils were freshly synthesized and cellulosic in nature was their incorporation of the tritium from UDP-[(3)H]glucose (UDP, uridine 5'-diphosphate), their binding of gold-labeled cellobiohydrolase, and an electron diffraction pattern with 004, 200, and 012 reflections (characteristic of cellulose synthesized in vivo) but missing 110 and 110 reflections. The small size of the fibrils is atypical of native A. xylinum cellulose microfibrils. The fibrils synthesized in vitro resemble, in morphology and size, the fibrillar cellulose produced when A. xylinum is cultured in the presence of agents that interfere with the normal process of crystallization of the microfibrils. The solubilized enzyme unit may therefore be producing a basic fibrillar structure that, in vivo, interacts laterally with other fibrils to produce native cellulose microfibrils.     

cDNA-AFLP技术在植物抗逆性相关基因表达研究中的应用

cDNA-AFLP技术是以mRNA反转录的cDNA为模板进行AFLP分析,在保留AFLP多态性丰富、稳定性高、无需了解序列信息等优点的同时,集中显示了基因组表达序列的多态性差异,可对生物体转录组进行全面、系统的分析,并已成功地用于基因差异显示、表达基因遗传连锁作图和基因克隆等方面。文章综述了cDNA-AFLP在植物抗逆性相关基因表达特性分析及基因分离方面的应用。     

用叶片检测转基因水稻对潮霉素反应的可靠性研究

水稻的转基因研究一般以潮霉素磷酸转移酶(HyglomychlPhosphtobamfemse,6P6)基因HPT作为选择标记,因此潮霉素抗性检测的可靠性至关重要.该项研究以中花11和日本晴的T1,T2和T6代转基因水稻为材料,研究了苗期、减数分裂的完全伸展叶和乳熟期不同部位的叶片对潮霉素的抗性反应,同步提取相应叶片的DNA进行HPT基因的PCR扩增,两者符合率达到97.04%.结果表明,利用叶片对潮霉素的反应检测转基因水稻的方法适用于不同世代、不同生育期和不同部位的叶片,具有很高的可行性和可靠性.     

Heterologous expression of the ThIPK2 gene enhances drought resistance of common wheat

Th IPK2 is an inositol polyphosphate kinase gene cloned from Thellungiella halophila that participates in diverse cellular processes. Drought is a major limiting factor in wheat(Triticum aestivum L.) production. The present study investigated whether the application of the Th IPK2 gene could increase the drought resistance of transgenic wheat. The codon-optimized Th IPK2 gene was transferred into common wheat through Agrobacterium-mediated transformation driven by either a constitutive maize ubiquitin promoter or a stress-inducible rd29 A promoter from Arabidopsis. Molecular characterization confirmed the presence of the foreign gene in the transformed plants. The transgenic expression of Th IPK2 in wheat led to significantly improve drought tolerance compared to that observed in control plants. Compared to the wild type(WT) plants, the transgenic plants showed higher seed germination rates, better developed root systems, a higher relative water content(RWC) and total soluble sugar content, and less cell membrane damage under drought stress conditions. The expression profiles showed different expression patterns with the use of different promoters. The codon-optimized Th IPK2 gene is a candidate gene to enhance wheat drought stress tolerance by genetic engineering.     

烟粉虱对几种药剂的敏感度检测及其抗药性相关基因的表达特征分析

为筛选有效防治烟粉虱的药剂,采用琼脂保湿浸叶法,比较了烟粉虱成虫对生产上广泛喷施的5种药剂5%锐劲特、2.5%高效氯氟氰菊酯、4%阿维菌素、70%艾美乐、25%噻嗪酮的敏感性。对比得出烟粉虱对4%阿维菌素的敏感性较好,药剂处理72 h后成虫校正死亡率高达98.01%。70%艾美乐次之,烟粉虱成虫校正死亡率达80.91%。2.5%高效氯氟氰菊酯较差,处理72 h后成虫死亡率40.73%。25%噻嗪酮最差,处理烟粉虱成虫72 h后死亡率低于5.00%。CYP6CM1、Coe1基因分别是烟粉虱对吡虫啉类药剂、有机磷类药剂产生抗药性的重要响应基因,应用Semi-quantitive PCR检测药剂处理72 h烟粉虱成虫CYP6CM1和Coe1基因转录水平表达量变化。发现70%艾美乐处理后,CYP6CM1基因表达量显著升高,Coe1基因表达量与药剂处理前无明显差异。4%阿维菌素处理后,CYP6CM1基因表达量显著下降,Coe1基因表达量与药剂处理前无明显差异。2.5%高效氯氟氰菊酯处理后CYP6CM1基因表达量变化不大,Coe1基因表达量稍有增加。25%噻嗪酮处理后CYP6CM1基因表达量稍有增加,Coe1基因表达量略有下降。不同药剂对烟粉虱的防治效果与烟粉虱解毒酶基因(CYP6CM1、Coe1)的表达响应有一定的关系。     

谷子抗旱相关蛋白激酶基因家族鉴定及表达分析

[目的]蛋白激酶是一类催化蛋白质磷酸化反应的酶,普遍存在于植物体中,参与调控植物生长发育和抗逆等多种生理反应。本文旨在探究谷子响应干旱胁迫与蛋白激酶之间的关系,为谷子抗旱品种的培育提供参考。[方法]运用生物信息学方法,分析了谷子蛋白激酶基因家族的35个抗旱相关蛋白激酶基因的系统进化关系、基因结构、保守基序、保守结构域、启动子顺式元件以及在干旱处理下和不同组织中基因表达水平。[结果]这35个谷子抗旱相关蛋白激酶基因分布于8条染色体上,被分为4个亚家族;多数亲缘关系较近的基因,其外显子-内含子结构、保守基序、保守结构域也较为相似,它们可能具有功能上的相似性;启动子元件分析发现,多数基因启动子区含有ABA响应元件(ABRE)和干旱诱导响应元件(MBS);组织特异性表达发现,SiPK20和SiPK25基因表现出显著的组织特异性表达模式,SiPK20在叶中表达量较高,SiPK25在根中表达量较高;干旱诱导基因表达分析显示,在抗旱品种勾勾母鸡咀中,干旱处理后SiPK1和SiPK4基因表达量显著上升,并且SiPK1、SiPK4启动子区域都含有较多的MBS元件,说明SiPK1和SiPK4极有可能参与谷子干旱胁迫响应,并且SiPK4在根中表达量较高。[结论]SiPK4可能通过调控谷子根部发育参与根部对干旱胁迫的应答反应,可作为抗旱相关的候选基因。     

羊口疮病毒B2L基因的原核表达、纯化及反应原性分析

【目的】克隆和表达羊口疮病毒(ORFV)的B2L基因,进而纯化并分析其反应原性.【方法】根据GenBank已发表的ORFV(GQ328006)的B2L基因序列设计一对特异引物,以提取阳性临床样品的总DNA为模板,通过PCR方法获得ORFV的B2L基因,将该基因片段连接至原核表达载体pET-30a(+)上,获得重组质粒pET-30a(+)-B2L.将此重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞,挑取单克隆进行扩大培养,经IPTG诱导获得重组融合蛋白.用SDS-PAGE和Western-blotting对表达的目的蛋白进行分析.【结果】成功获得重组质粒pET-30a(+)-B2L,读码框正确.获得了43ku的表达产物,与预期目的蛋白大小相符;纯化后的目的蛋白能与ORFV阳性血清发生特异反应.【结论】成功对ORFV-B2L蛋白进行了原核表达,且纯化后蛋白具有良好的反应原性.     

Extensive DNA inversions in the B. fragilis genome control variable gene expression

The obligately anaerobic bacterium Bacteroides fragilis, an opportunistic pathogen and inhabitant of the normal human colonic microbiota, exhibits considerable within-strain phase and antigenic variation of surface components. The complete genome sequence has revealed an unusual breadth (in number and in effect) of DNA inversion events that potentially control expression of many different components, including surface and secreted components, regulatory molecules, and restriction-modification proteins. Invertible promoters of two different types (12 group 1 and 11 group 2) were identified. One group has inversion crossover (fix) sites similar to the hix sites of Salmonella typhimurium. There are also four independent intergenic shufflons that potentially alter the expression and function of varied genes. The composition of the 10 different polysaccharide biosynthesis gene clusters identified (7 with associated invertible promoters) suggests a mechanism of synthesis similar to the O-antigen capsules of Escherichia coli.