鸡致病性大肠杆菌的质粒DNA指纹图谱分析

从山东省诸城地区6个集约化养鸡场的大肠杆菌感染鸡群的死鸡、毛蛋的心血中分离到32株细菌,经形态、培养特性及生化反应鉴定为大肠埃希氏杆菌(Escherichia.coli)简称大肠杆菌(E.coli)。对其作动物回归试验结果表明,全部为致病性大肠杆菌。从而证明从死鸡(毛蛋)心血中分离到的大肠杆菌与其致病性密切相关。将分离到的鸡大肠杆菌的14株优势血清型菌株进行了质粒DNA分析,通过碱裂解法小量提取质粒,然后对质粒进行了琼脂糖凝胶电泳分析,用hindⅢ限制性内切酶对质粒进行了酶切分析,结果表明:质粒的得率为100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株的质粒图谱一般不同。将血清型和质粒图谱比较发现:同一血清型可以有不同的质粒图谱,不同血清型可以有相似的质粒图谱,血清型与质粒图谱没有直接的联系。本试验同一来源菌株的质粒指纹图谱相同、但它们的血清型不一致的现象可作为自然条件下同一质粒在不同血清型大肠杆菌中扩散转化的一个分子生物学依据。     

广西地区仔猪致病性大肠杆菌的菌毛基因多重PCR检测及质粒DNA指纹图谱分析

对广西地区56株仔猪致病性大肠杆菌进行菌毛基因的多重PCR检测及质粒DNA指纹图谱分析。多重PCR检测结果证实该方法可用于各大肠杆菌野生菌株的检测,且适用于仔猪大肠杆菌性腹泻病的快速诊断和流行病学调查。质粒DNA指纹图谱分析发现这56个菌株质粒的获得率为100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株的质粒图谱一般不同。所有菌株都含有1条大小相同的质粒带,表明广西流行的猪大肠杆菌性腹泻病主要是由携带相同质粒的大肠杆菌引起。试验结果表明,质粒DNA指纹图谱法可作为大肠埃希氏菌分型的分子生物学方法。     

利用质粒指纹图谱法对大肠杆菌耐药质粒遗传特性的研究

为研究鸡源大肠杆菌耐药性及耐药的生物学特性，选用30株来自不同地区的鸡源大肠杆菌，在药敏试验的基础上，对耐药菌质粒进行了指纹图谱分析。结果表明：30株鸡源大肠杆菌对氨苄青霉素、青霉素、四环素的耐药率为100.00%，对氯霉素、庆大霉素、利福平、红霉素的耐药率为60.00%-93.33%，多重耐药率为26.67%-80.00%，质粒图谱比较发现：来源相同的菌株质粒图谱相同或相似；来源不同的菌株质粒图谱一般不同。聚类分析表明：30株大肠杆菌遗传距离在0.224-0.416处聚成五类，其中同一地区聚为一类。这表明同一地区的大肠杆菌病的病原之间有一定的同源性。其次，这30株大肠杆菌在遗传距离为0.864处聚成一大类，说明它们之间有一定程度的遗传相关性。     

河南省鸡致病性大肠杆菌血清型、耐药性的研究

对河南省3个不同地区的38株鸡致病性大肠杆菌进行了O血清型的鉴定、15种抗生素药物的耐药性试验。结果表明:河南省鸡致病性大肠杆菌的血清型种类众多,以O78,O1,O2为优势血清型,分别占定型菌株的35.29%,23.53%,17.65%;耐药图谱复杂,可以分为21种耐药类型,菌株耐药种类4~14种;不同来源的菌株其血清型、耐药性一般不同;相同来源的菌株,其耐药图谱相同或相似,但血清型有多种。     

四川省规模化猪场大肠杆菌质粒DNA分析

在系统鉴定、药敏试验和血清型鉴定的基础上,对23株致病性大肠杆菌和5株标准血清型大肠杆菌进行了质粒DNA分析.结果表明,菌株的质粒获得率为100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株具有不同的质粒图谱.质粒图谱与血清型及耐药谱之间无明显关系.     

四川省规模化猪场大肠杆菌质粒DNA分析

在系统鉴定、药敏试验和血清型鉴定的基础上，对２３株致病性大肠杆菌和５株标准血清型大肠杆菌进行了质粒ＤＮＡ分析。结果表明，菌株的质粒获得率１００％，来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱，来源不同的菌株具有不同的质粒图谱。质粒图谱与血清型及耐药谱之间无明显关系。     

仔猪黄痢江西流行株微生物特性及耐药性的研究

从江西省数个集约化养猪场的仔猪黄痢中分离到 1 0个分离株 ,经形态染色、培养特性及生化反应鉴定为大肠埃希氏杆菌 (Escherichiacoli,E .coli)。随后对该 1 0株细菌进行了常规药物的敏感试验和耐药性质粒抽提 ,结果显示对复方新诺明 (SXT)、红霉素 (E)、四环素 (TE)、乙酰螺旋霉素 (Asp)等药物均不敏感 ,说明我省仔猪黄痢大肠杆菌的耐药性较普遍。 1 0株细菌的质粒DNA指纹图谱结果表明 ,都携带有 1到多个质粒 ,其中一个质粒是 1 0个菌株所共有的 ,6个株菌有相同的质粒图谱 ,另外各有两个菌株有相同的图谱 ,质粒图谱显示可分为 3个不同菌型。     

种鸭大肠杆茵性生殖器官病的研究——5.鸭生殖道大肠杆菌质粒指纹图谱分析

本文报导了对四川九个县1987年至1989年爆发流行鸭生殖道大肠杆菌病的89株菌的质粒指纹图分析。结果表明:同一来源的菌株具有完全相同或基本相同的PP和酶切图谱,不同来源菌株也共同具有1—2条质粒带和酶切片段,并与正常鸭肠道大肠杆菌的图谱有差异。这提示这次爆发流行的鸭生殖道大肠杆菌病是由少数几株在遗传学上具有高度同源相关性的菌株引起。本文也说明质粒指纹图谱法为一快速、简单、有效、特异性强的流行病学研究工具。     

仔猪黄白痢大肠杆菌耐药性检测及ERIC图谱分析

以47株黄白痢临床分离大肠杆菌为材料,通过Kirby-Bauer法检测细菌耐药表型并用PCR扩增Ⅰ型整合酶基因,进而对不同耐药谱菌株进行以肠杆菌科基因间重复一致序列为引物的聚合酶链反应(ERIC-PCR)基因分型并用统计分析软件SPSS 16.0聚类.耐药表型检测结果显示:47株大肠杆菌均呈多重耐药,共9种耐药表型;Ⅰ型整合子阳性菌株检出率为95.7%(45/47);ERIC-PCR扩增出现稳定可重复的基因指纹图谱,耐9~13种药物菌株(85.1%,40/47)的ERIC指纹图谱分别显示出2种主要谱型,各代表1个猪场的菌株类型.聚类分析提示,相同耐药谱的来自同一猪场和不同猪场分离株的平均相似率分别为68.7%和53.5%,显著高于47株菌的平均相似率37.3%.说明菌株耐药性可能与特定的ERIC指纹图谱相关,ERIC指纹图谱分析可作为考察猪源致病性大肠杆菌多重耐药表型与基因型特征的新视角.     

鸡源鲍氏志贺菌的RAPD分析

【目的】确定鸡源鲍氏志贺菌的进化地位。【方法】选用6条随机引物(P1~P6),采用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对1株鸡源鲍氏志贺菌、2株鸡白痢沙门菌、2株鸡肠致病性大肠杆菌和2株痢疾志贺菌共7株菌的基因组DNA进行分析,同时对个别特殊序列进行克隆测序,并在此基础上分析了鸡源鲍氏志贺菌与其他15个相关菌株的进化关系。【结果】6条随机引物中有4条引物(P1,P2,P4和P6)能较好地在志贺菌、鸡白痢沙门氏菌和鸡致病性大肠杆菌3种菌中检测到多态性分子标记;这4条有效引物共扩增出了64个DNA片段,其中7个菌株共有的谱带有3条,多态性片段有61条,多态率达95.3%。引物P2可根据扩增图谱将志贺菌和大肠杆菌与沙门菌鉴别出来;用引物P6对上述7株细菌进行扩增,发现同种菌株间谱带特别相似,其中鸡鲍氏志贺菌与人痢疾志贺菌扩增条带的相同率达66.7%,与鸡肠致病性大肠杆菌扩增条带的相同率达44.4%,而鸡白痢沙门菌与志贺菌的扩增谱带相差甚远,可用于3种细菌的鉴别。对扩增片段进行的测序及进化分析结果显示,鸡源鲍氏志贺菌与人源志贺菌的进化距离最近。【结论】鸡源鲍氏志贺菌可能是人源志贺菌的一个变异株或新的亚种。     

鸡肠道大肠杆菌多抗菌株C20耐药性基因的预测和分析

为揭示动物源大肠杆菌耐药性机制,追踪潜在的抗性基因传播机制及其来源,在先前公布的分离自鸡肠道的多抗耐药性菌株大肠杆菌Escherichia coli C20基因组基础上,对E.coli C20抗生素抗性基因种类、数量、来源及其耐药性机制进行分析。通过与已知的抗生素抗性基因数据库进行对比和注释,一共预测和注释了80个潜在的耐药性基因,包括与先前筛选的7种抗生素抗性对应的抗性基因。其中,喹诺酮类抗生素抗性基因位于C20基因组上,四环素、磺胺类、氯霉素、氨基糖苷类以及大环内酯类抗生素的抗性基因则位于C20环状质粒分子上。基因组聚类分析表明,菌株C20与大肠杆菌K-12菌株DH1、BW2952和MG1655亲缘关系较近,序列相似性97%~99%。3株K-12菌株基因组中没有发现与C20质粒类似的序列,表明C20菌株的抗性基因主要是通过质粒介导的水平基因转移方式从其他环境微生物中获得。     

麝致病性大肠杆菌的质粒DNA分析

[目的]将麝致病性大肠杆菌从分子水平上分型,为麝大肠杆菌的分子流行学研究提供基础材料。[方法]采用Lysis Triton法对24株麝致病性大肠杆菌进行质粒抽提,并用HindⅢ、EcoRⅠ及BamHⅠ3种内切酶对质粒进行单酶切。[结果]质粒得率为91.6%,24株麝致病性大肠杆菌具有相同或相似的质粒图谱。[结论]质粒DNA分析为四川养麝场致病性大肠杆菌的分子流行病学提供了科学依据。     

大肠杆菌质粒与喹诺酮耐药性关系的研究

为研究大肠杆菌质粒与喹诺酮耐药性的关系，临床分离32株耐喹诺酮药物的致病性大肠杆菌，经质粒消除剂溴化乙淀（EB）、硫酸黄连素（BS）分别处理24h和48h，其中4株对喹诺酮的耐药水平明显降低。经消除剂作用的菌株提取质粒进行电泳检测， 结果只有大肠杆菌CE01[其中氧 氟沙星（OFL）的最小抑菌浓度（MIC）＞50μg/mL]的质粒带发生变化，且该质粒的转移与喹诺酮抗性有关。经消除剂BS作用24h，在含OFL 20μg/mL的琼脂不能生长的CE01XC1菌株其质粒带浓度显著降低；作用48h后，在含OFL 20μg/mL琼脂不能生长的CE01XC2菌株其质粒带被消除；BS作用48h后在含OFL 20μg/mL琼脂仍然生长的CE01XC3菌株及质粒带几乎未改变。另外3株耐药水平降低的菌株质粒带无变化。结果表明：大肠杆菌CE01含有与喹诺酮药物抗性有关的质粒，这一质粒被消除剂消除后，CE01菌株的耐药性显著下降，对OFL的MIC由大于50μg/mL变为小于20μg/mL。其它3株经质粒消除剂作用耐药水平降低的菌株可能是细胞膜通透性改变导致耐药。     

致鸡肝炎大肠杆菌与鸡舍空气致病性大肠杆菌生物学特性比较分析

研究了河北某地区致鸡肝炎大肠杆菌(Escherichia coli)和鸡舍空气致病性大肠杆菌的血清型和耐药性差异。根据细菌分离培养特性、形态学、生化试验、动物试验及玻板凝集试验结果,从病鸡肝脏中分离出了致病性大肠杆菌38株,其O型优势血清型与同地区鸡舍空气分离出的大肠杆菌血清型相似。药敏试验结果显示,O型致鸡肝炎大肠杆菌与已分离出的同地区鸡舍空气致病性大肠杆菌的耐药特征也具有相似性。这说明致鸡肝炎大肠杆菌与同地区鸡舍空气致病性大肠杆菌的某些生物学特性是相同的,大肠杆菌引起的鸡肝炎病与存在于空气中的致病性大肠杆菌有一定的关系。     

潍坊地区肉鸡致病性大肠杆菌的血清型鉴定及药敏试验

从山东潍坊地区不同鸡场采集病料,经生化试验和血清型鉴定了95株大肠杆菌,78株为致病性大肠杆菌,它们覆盖了14种血清型,其中O78、O2、O15、O11优势血清型.对这些致病性大肠杆菌进行药敏试验,受试菌的平均耐药率为40.6%,同时多重耐药现象普遍.在21种受试药物中,高敏的药物有4种,分别为头孢噻肟钠、磷霉素钠、氟苯尼考、头孢曲松钠.试验结果对指导潍坊地区肉鸡大肠杆菌病防治具有参考价值.     

广州市售肉类食品源大肠埃希菌耐药性分析

【目的】了解广州市售肉类食品源大肠埃希菌的污染和耐药情况。【方法】自2011年7月至8月,从广州市各大农贸市场和超市采集市售肉类样品310份,其中猪肉253份,鸡肉57份。采用选择性培养基分离鉴定大肠埃希菌Escherichia coli,琼脂稀释法测定大肠埃希菌对19种抗菌药物的最小抑菌浓度(MIC)。【结果】310份样品中共分离到213株大肠埃希菌,分离率为68.7%,其中猪肉源177株,鸡肉源36株。受试菌株对复方新诺明、链霉素和四环素的耐药率超过75.0%,对氨苄西林、萘啶酸、氯霉素、新霉素、氟苯尼考、磷霉素、环丙沙星、安普霉素、恩诺沙星、庆大霉素和头孢唑啉的耐药率为10.0%~60.0%,而对头孢西丁、头孢曲松、头孢他啶、黏菌素和阿米卡星表现较为敏感,耐药率小于5.0%。鸡肉源大肠埃希菌对头孢唑啉、头孢西丁、头孢曲松、头孢他啶和磷霉素的耐药率均高于猪肉源大肠埃希菌,差异极显著(P0.01)。213株大肠埃希菌中82.2%为多重耐药菌。【结论】广州市售肉类食品存在较为严重的多重耐药大肠埃希菌污染,且鸡肉源大肠埃希菌耐药性较猪肉源大肠埃希菌严重。     

泰州地区仔猪大肠杆菌的分离鉴定及药物敏感性

为有效防治大肠杆菌病及控制其耐药性,从江苏泰州地区不同猪场腹泻猪粪便中分离细菌,经镜检、培养特性、生化试验和血清型鉴定,采用攻菌试验确定其致病性,获得6株致病性大肠杆菌,并进行药敏试验。结果表明:6株致病性大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、羧苄西林、氟苯尼考和四环素全部耐药;对头孢呋辛、头孢曲松、红霉素、复方新诺明、链霉素、阿奇霉素普遍不敏感;对头孢他啶、头孢噻肟、多西环素、庆大霉素敏感性差异明显,部分耐药,部分敏感;对头孢吡肟、丁胺卡那霉素、环丙沙星和氧氟沙星均表现敏感;对氨苄西林、阿莫西林和阿奇霉素等20种常用抗菌药均表现6~15耐的多重耐药。