长牡蛎四倍体诱导技术

报道了长牡蛎四体诱导的新技术。采用长牡蛎二倍体卵子与精子授精，用1.5mg/dm^3CB在受精后4min处理受精卵40min抑制第一和第二极体排放诱导四倍体，获得稚贝（1-3mm)2000粒，其中四倍体占85%，三倍体占5%，三倍体/四倍体嵌合体占10%。本文首次报道可存活的三倍体/四倍体嵌合体稚贝。     

长牡蛎四倍体诱导技术

报道了长牡蛎四体诱导的新技术。采用长牡蛎二倍体卵子与精子授精，用1.5mg/dm^3CB在受精后4min处理受精卵40min抑制第一和第二极体排放诱导四倍体，获得稚贝（1-3mm)2000粒，其中四倍体占85%，三倍体占5%，三倍体/四倍体嵌合体占10%。本文首次报道可存活的三倍体/四倍体嵌合体稚贝。     

细胞松弛素B诱导鲍异源三倍体

用细胞松弛素B（CB）处理受精卵（九孔鲍♀×盘鲍♂）,抑制第二极体释放,诱导异源三倍体.在水温24℃下,分别进行了不同起始处理时间（受精后5~25 min）、不同药物处理浓度（0.2~1.0 mg/L）和不同持续处理时间（5~15 min）的实验.结果表明：受精后10~15 min开始处理的效果较好,平均担轮幼虫成活率为52.07%,平均三倍体率为55.81%;最佳药物处理质量浓度为0.4 mg/L,最佳持续处理时间为10 min,担轮幼虫率为21.43%,异源三倍体率为50.96%;药物空白对照组1（九孔鲍♀×九孔鲍♂）担轮幼虫率为85.38%,二倍体率为95.42%;药物空白对照组2（九孔鲍♀×盘鲍♂）担轮幼虫率为54.37%,二倍体率为75.87%.综合考虑,鲍异源三倍体的适宜诱导条件为：在受精后13 min,即当40%~50%受精卵排出第一极体时,用0.4 mg/L的CB处理10 min.     

九孔鲍的极体释放和第一次卵裂与水温的关系

九孔鲍受精卵的第一极体、第二极体以及第一次卵裂的出现时间与水温有关.试验采用同一批卵子,在同一水温下,分别对同一次授精获得的第一极体、第二极体和第一次卵裂出现的时间进行三次以上观察,将得到的数值作为该试验样品的数值,并得出相关的关系式:(1)九孔鲍受精卵第一极体的出现时间与水温的关系:Y1=2.530 26+0.021 11T;(2)第二极体的出现时间与水温的关系:y2=19.00407-0.180 01T;(3)第一次卵裂的出现时间与水温的关系:Y3=40.629 1-0.315 81T.研究和掌握它们之间的关系,对于开展九孔鲍染色体组操作技术研究提供基础资料,特别是对多倍体育种具有非常重要的意义.     

仿刺参(Apostichopus japonicus )多倍体诱导的初步研究

报道了仿刺参（Apostichopus japonicus Liao）多倍体诱导的结果。采用经紫外线照射后的海水成功地使仿刺参分别单独产卵、排精，从而准确地控制了仿刺参的多倍体诱导的开始时间。使用0.2、0.4mg/L细胞松驰素B（CB）在授精后5、10min开始处理受精卵抑制第一极体（PB1）放出，用10、20、30、40mg/L的6－二甲基氨基嘌呤（6－DMAP）分别在授精后5、10、20、28、35min开始处理抑制受精卵PB1、第二极体（PB2)祚出的方法诱导了刺参的多倍体。研究了诱导的药物浓度、处理时间与诱导效果的关系，同时对幼体的成活率等进行了探讨。结果表明，2种药物均可诱导仿刺参产生三倍体和四倍体。采用CB抑制PB1诱导，到达下幼体时，可产生21.3％的四倍体。用6－DMAP抑制PB2放出诱导三倍体，三倍体率可达25.8%。以幼虫浮游期中，处理组和对照组幼虫的摄食、生长、浮游时间以及变态率等方面没有明显差异。     

用热休克法诱导虹鳟雌核发育二倍体的研究

采用经紫外线照射后遗传上失活的精子激活卵子,用热休克法诱导虹鳟Oncorhynchus mykiss减数分裂雌核发育二倍体。对影响诱导效果的紫外线照射精子的剂量及28℃热休克处理的持续时间和处理起始时刻进行了研究。结果表明:紫外线照射精子的最佳条件为照射距离8 cm、照度6 670μW/cm2、照射时间15 min;获得虹鳟减数分裂雌核发育二倍体的最佳参数为受精后20 min,28℃热休克处理10、15 min,雌核发育率为14.28%~37.75%。     

异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育早期胚胎发育及其倍性分析

采用紫外线遗传灭活的长牡蛎（Crassostrea gigas）精子作激活源,经6-DMAP加倍诱导栉孔扇贝（Chlamys farreri）第二极体抑制型雌核发育二倍体;运用荧光显微技术,对雌核发育二倍体卵子早期胚胎发育过程中的核相变化进行观察。结果显示,紫外线处理过的精子入卵后发生一次轻微膨胀,形成雄性原核,但不形成染色体,而是浓缩为致密的染色质小体（DCB）,DCB或滞留于两卵裂球的分裂沟上或进入其一的细胞质中,不与雌原核融合;雌核发育胚胎的发育速度明显滞缓,经6-DMAP处理后胚胎发育速度加快,发育同步化;在雌核发育二倍体诱导过程中,还观察到杂交体、异源三倍体、雌核发育单倍体、雌核发育四倍体。结果为异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育提供了细胞学证据。     

异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育早期胚胎发育及其倍性分析

采用紫外线遗传灭活的长牡蛎（Crassostrea gigas）精子作激活源,经6-DMAP加倍诱导栉孔扇贝（Chlamys farreri）第二极体抑制型雌核发育二倍体;运用荧光显微技术,对雌核发育二倍体卵子早期胚胎发育过程中的核相变化进行观察。结果显示,紫外线处理过的精子入卵后发生一次轻微膨胀,形成雄性原核,但不形成染色体,而是浓缩为致密的染色质小体（DCB）,DCB或滞留于两卵裂球的分裂沟上或进入其一的细胞质中,不与雌原核融合;雌核发育胚胎的发育速度明显滞缓,经6-DMAP处理后胚胎发育速度加快,发育同步化;在雌核发育二倍体诱导过程中,还观察到杂交体、异源三倍体、雌核发育单倍体、雌核发育四倍体。结果为异源精子诱导栉孔扇贝雌核发育提供了细胞学证据。     

金鳟伪雄鱼的制备及全雌三倍体的诱导

以4龄金鳟Oncorhynchus mykiss为试验鱼（雄、雌性平均体重分别为1．7、2．2kg），采用人工诱导雌核发育技术灭活金鳟精子，对受精卵进行热休克处理后正常孵化，获得初孵仔鱼；再用雄性激素诱导全雌二倍体，得到性逆转雄鱼（伪雄鱼）；培育至性成熟后进行人工繁殖，采用热休克法对受精卵进行处理获得全雌三倍体鱼类。结果表明：金鳟全雌二倍体的诱导出现率为80％，金鳟伪雄鱼获取成功率为75％；用不同pH人工精浆激活伪雄鱼精巢精子，高pH（9—10）的人工精浆激活受精卵的效果最好，金鳟三倍体的出现率为75％-80％，其中还有一定比率的嵌合体出现。     

中华绒螯蟹多倍体诱导的研究进展

水产动物多倍体诱导是一项具有重要经济价值的生物技术,其诱导方法包括物理、化学以及生物学等方法.关于水产类动物多倍体的诱导在鱼类和贝类中已有过较多的报道,相比之下对十足目甲壳类动物的研究就比较缓慢,仅在日本绒螯蟹、中国对虾、罗氏沼虾等少数虾蟹中有过报道.通过物理热休克法对河蟹进行多倍体诱导可以得到50％的三倍体率和52％的四倍体率,细胞松弛素B(CB)溶液处理河蟹受精卵来进行诱导也获得了58.18％的三倍体率和57.89％的四倍体率.将KCl溶液添加到一定盐度的海水里进行河蟹三倍体诱导试验,在探索到诱导的最佳时间和浓度后获得了100％的三倍体诱导率.本文综述多倍体诱导的原理、方法以及发展过程,对中华绒螯蟹多倍体的多种诱导方法及其诱导效果进行了比较,旨在为中华绒螯蟹多倍体诱导的研究提供参考.     

Primary Study on Experiment of Tetraploid Induction in Haliotis discus hannai with PEG

The experiment was performed on induction tetraploid of Haliotis discus hannai at two-cell stage through cell fusion with PEG treatment. In this paper, the orthogonal experiment of three factors and three levels [L9 (34)] was used. Three factors and three levels were molecular weight of PEG: 8 000, 6 000, 4 000 mol·g-1; PEG concentration: 45%, 50%, 55%; treatment duration time: 1, 2, 3 min, respectively. The results showed that the optimal pattern of three factors and three levels on inducing tetraploid of Haliotis discus hannai at two-cell stage through using PEG treatment were: molecular weight 4 000, concentration 55%, treatment duration time: 2 min. The highest tetraploid induction rate was 10.8% at embryo period. The three factors treatment sequence was treatment duration time→concentration→molecular weight.     

用电子鼻和SPME-GC-MS分析鲍鱼熟制前后挥发性风味物质的变化

为了揭示熟制鲍鱼主要特征气味的成因,采用电子鼻及固相微萃取结合气-质联用(SPME-GCMS),对熟制过程中皱纹盘鲍Haliotis discus hannai香气差异和挥发性成分变化进行了研究。结果表明:电子鼻能够灵敏地检测到熟制鲍鱼的香气变化,经PCA分析发现,熟制鲍与生鲍整体气味有显著差异;GCMS分析表明,熟制前后鲍鱼的挥发性成分发生明显变化,从生鲍和熟制鲍中分别鉴定出42种和61种风味物质,主要物质有醇、醛、酮、烃、酯、酸、芳香族、含氮化合物、酚类;生鲍中挥发性风味物质含量较高的为苯甲醛(68.15%)和1-辛烯-3-醇(9.22%),熟制鲍中挥发性风味物质含量较高的为2,3-丁二醇(22.80%)和(2R,3R)-(-)-2,3-丁二醇(19.84%)。研究表明,运用电子鼻和固相微萃取结合气-质联用(SPME-GC-MS)能够很好地分析鲍鱼熟制前后气味的变化。     

几种常用中草药对皱纹盘鲍摄食行为的影响

通过实验观察了皱纹盘鲍对党参、黄芪、当归、白术、白芍、麦芽、莱菔子、神曲、山楂、鸡内金１０种中草药的摄食行为反应，发现均未对皱纹盘鲍产生驱避效应，其中山楂还表现出诱食活性。结果表明这１０种中草药均可作为皱纹盘鲍的饲料添加剂。     

皱纹盘鲍血细胞分类及活性氧产生机理的研究

研究了皱纹盘鲍Haliotis discus hannai Ino血细胞的组成、数量、吞噬作用及活性氧产生机理。皱纹盘鲍血细胞分为透明细胞和颗粒细胞两大类。透明细胞无颗粒,具嗜碱性细胞质,约占循环血细胞总量的60％;颗粒细胞含嗜酸性颗粒。这两种血细胞都有吞噬作用,尤其是颗粒细胞,经酵母细胞刺激后,血细胞释放活性氧,还原氮蓝四唑(NBT)形成甲欣沉淀,有化学发光现象。长期饥饿的皱纹盘鲍,血细胞活性氧量低于正常水平。     

皱纹盘鲍与九孔鲍杂交的研究

采用皱纹盘鲍与九孔鲍进行杂交,并与两亲本自交进行育苗比较.结果表明：自交组的受精率、孵化率以及存活率显著高于杂交组（P〈0.05）;皱纹盘鲍（♀）×九孔鲍（♂）和皱纹盘鲍（♂）×九孔鲍（♀）杂交的受精率分别为0.9%和3.2%,受精率存在显著差异（P〈0.05）,而孵化率分别为12.4%和13.1%,二者差异不显著（P〉0.05）,二者之间幼体存活率的差异也不显著（P〉0.05）;自交组和杂交组之间的鲍生长速度存在明显的差异（P〈0.05）,杂交组合的生长速度明显比自交组合的要快;但杂交组中稚鲍的存活率和自交组之间差异不显著（P〉0.05）.     

皱纹盘鲍外套膜的组织学研究

对皱纹盘鲍外套膜的组织学观察发现,外套膜主要由上、下表皮和其间的结缔组织组成。上、下表皮细胞可分为高柱状细胞、弱嗜碱性腺细胞和颗粒状腺细胞3种,结缔组织中富含纤维、血管和神经。聚合体细胞发育形成结缔组织中的粘液泡腺细胞。     

对硫磷对皱纹盘鲍血细胞吞噬化学发光的影响

在体外条件下,利用化学发光法定量研究了对硫磷浓度对皱纹盘鲍Haliotis discus Hannm血细胞吞噬化学发光的影响。结果表明,用对硫磷浸泡1h和12h处理的皱纹盘鲍血细胞都能够抑制鲍血细胞吞噬时的化学发光,即抑制了血细胞吞噬时释放活性氧(BOS)杀菌的活性,而且这种抑制程度随着对硫磷浓度的增加而加强。用对硫磷浸泡处理皱纹盘鲍血细胞后,测定了血细胞吞噬酵母细胞的吞噬百分率和吞噬指数,结果显示,用低浓度的对硫磷(0．5、5．0、10．0mg／L)处理的血细胞能提高其吞噬酵母细胞的活力;用高浓度的对硫磷(20、30、40mg／L)处理的血细胞能抑制其吞噬酵母细胞的活力。研究还表明,当水中对硫磷浓度为20mg／L以上时,对皱纹盘鲍血细胞免疫活性有抑制作用。     

微量元素添加剂形态对皱纹盘鲍生长的影响

在鲍鱼基础饲料中,分别添加无机盐,氨基酸微量元素螯合盐,麦饭石等,对皱纹盘鲍的幼鲍进行喂养试验表明,添加螯合盐幼鲍生长最快,麦饭石其次,无机盐及对照生长最差。鲍的体重增长率,螯合盐与无机盐和对照的差异极显著,麦饭石与对照,螯合盐与麦饭石的差异显著、麦饭石、对照与无机盐差异不显著。