激光扫描共聚焦显微镜在园艺植物研究中的应用

综述了激光共聚焦显微镜的原理以及激光扫描共聚焦显微镜技术在园艺植物细胞学、植物荧光方面、发育生物学和遗传学的应用研究进展,并对其在园艺植物研究中的应用前景进行了展望。     

激光扫描共聚焦显微镜在生物科学研究中的应用

介绍了激光扫描共聚焦显微镜的工作原理和特点,在此基础上,综述了激光扫描共聚焦显微镜在生物科学研究中的应用和应用技巧.     

一种对固氮细菌感染植物进行显微观察的改良方法

介绍了一种对固氮细菌感染植物进行显微观察的改良方法--共聚焦激光扫描显微镜三通道扫描法.该方法与常规的光学显微镜观察、电子显微镜观察相比,具有操作简便、不需要繁琐的前处理、所用仪器少、有效可行等特点,而且在有些应用共聚焦激光扫描显微镜双通道法观察固氮细菌对植物的感染效果不理想的情况下,可以采用共聚焦激光扫描显微镜三通道扫描法观察.     

激光扫描共聚焦显微镜在植物研究中的应用

荧光成像技术、光学显微镜和计算机成像分析系统的完美结合催生了激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)的出现,其优越的结构特点实现了将较厚样品能够逐点逐层扫描成清晰图像,有利于各种荧光信号的采集,直观进行三维重建和样品多重荧光信号采集进行的定量分析。这些优势功能极大地提高了从细胞、分子水平来探求生物时空表达基本功能的能力。本文详细阐述了近年来随着该项技术发展的日益多样化,激光扫描共聚焦显微镜技术在植物组织化学、植物细胞器和细胞骨架、植物发育方面的应用。     

激光扫描共聚焦显微镜的原理及其在植物学中的应用概况

激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)技术是先进的分子和细胞生物学研究技术。LSCM具有高分辨率,可以实现无损伤连续光学切片,对活体或固定的组织细胞进行定性定量检测和定时定位分析。为进一步了解并应用LSCM技术,对LSCM的基本原理及LSCM技术在植物学研究中的应用及展望进行了综述。     

油杉花粉发育进程的共聚焦显微镜观察

油杉为我国特有易危树种.为探究油杉花粉发育过程,其花粉样品经荧光染料曙红和Hoechst 33342双染并以冬青油透明后,在激光扫描共聚焦显微镜下观察.结果表明:单核小孢子经过连续4次有丝分裂后形成5-细胞型花粉粒,成熟花粉由2个退化的原叶细胞、1个精原细胞(体细胞)、1个不育细胞(柄细胞)和1个管细胞组成.应用激光扫描共聚焦显微术结合荧光染色技术能更清晰地显示出油杉花粉发育过程中的核相变化,观察效果远较常规的醋酸洋红染色法理想.此技术可用于其他花粉发育阶段的鉴定.      

鼻咽癌凋亡细胞核DNA与胞质微丝形态结构的激光共聚焦显微镜观察

用激光共聚焦显微镜的细胞＂ＣＴ＂、双重荧光标记、全自动图像分析及全自动摄影等技术研究鼻咽癌细胞ＣＮＥ－２Ｚ体外增殖和凋亡时核ＤＮＡ和胞质微丝的分布,获得了高质量图像,显示了不同光切面核ＤＮＡ的变化、胞质微丝的分布、核与胞质微丝间的相互关系以及胞核ＤＮＡ三维空间结构,为研究鼻咽癌细胞增殖和凋亡时核ＤＮＡ与胞质做丝的形态结构提供了一个新的方法。     

Etoposide通过线粒体路径诱导Hela细胞凋亡

目的研究Etoposide诱导Hela细胞凋亡的分子机制.方法 Etoposide处理含有10%胎牛血清DMEM培养液培养的Hela细胞;Caspase-3活性检测试剂盒检测Etoposide处理Hela细胞Caspase-3活性;激光共聚焦显微镜和Western blot技术检测细胞色素C从线粒体的释放.结果 Etoposide能够导致Hela细胞凋亡;Etoposide处理Hela细胞内的Caspase-3活性增加;Etoposide诱导细胞色素C从线粒体释放到细胞质.结论 Etoposide通过线粒体路径诱导Hela细胞凋亡.     

转基因马铃薯中人白介素-12体外诱导人肝癌细胞凋亡的研究

[目的]检测从人白介素-12（human interleukin12,hIL-12）转基因马铃薯中提取的hIL-12的抗肝癌效应。[方法]用MTT法检测转基因马铃薯中hIL-12对人肝癌细胞HepG22.2.15的体外杀伤作用;用AnnexinV/PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察转基因马铃薯中hIL-12对HepG22.2.15细胞的诱导凋亡作用。[结果]转基因马铃薯中表达的hIL-12与重组人白介素-12（rhIL-12）在体外对HepG22.2.15具有杀伤作用,而野生对照组无杀伤作用;AnnexinV/PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察结果表明,转基因马铃薯中表达hIL-12可诱导HepG22.2.15细胞凋亡。[结论]转基因马铃薯表达体系表达的人白介素-12具有抗肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡的作用。     

转基因马铃薯中人白介素-12体外诱导人肝癌细胞凋亡的研究（摘要）

[目的]检测从人白介素-12（human interleukin 12,hIL-12）转基因马铃薯中提取的hIL-12的抗肝癌效应。[方法]用MTT法检测转基因马铃薯中hIL-12对人肝癌细胞HepG22.2.15的体外杀伤作用;用AnnexinV/PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察转基因马铃薯中hIL-12对HepG22.2.15细胞的诱导凋亡作用。[结果]转基因马铃薯中表达的hIL-12与重组人白介素-12（rhIL-12）在体外对HepG22.2.15具有杀伤作用,而野生对照组无杀伤作用;An-nexinV/PI双染色法加激光共聚焦显微镜观察结果表明,转基因马铃薯中表达hIL-12可诱导HepG22.2.15细胞凋亡。[结论]转基因马铃薯表达体系表达的人白介素-12具有抗肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡的作用。     

小鼠乳腺发育、泌乳和退化的组织形态学(Ⅰ)——一般组织形态学变化

文章研究小鼠乳腺发育、泌乳和退化的一般组织形态学变化,为产奶动物泌乳生物学与乳腺功能调控奠定实验基础。将小鼠青春期、妊娠期、泌乳期和退化期乳腺,制成石蜡切片用HE染色方法在普通光镜下进行组织结构观察。结果发现,在性成熟前或两个泌乳期之间的乳腺静止期,乳腺内主要是结缔组织、分散的输出导管和一些萎缩、塌陷的腺泡或实心的细胞索,腺泡及小导管均为单层立方上皮;性成熟后,乳腺分泌部和导管都开始发育,特别是妊娠期乳腺组织发育尤为迅速,结缔组织包绕在腺泡周围和小叶间;分娩后进入泌乳期,乳腺处于全面活跃状态,泌乳后期乳腺停止泌乳活动,结缔组织和脂肪组织增殖;退化期或老龄后乳腺腺组织及导管退化,被结缔组织和脂肪取代;小鼠青春期、妊娠期、泌乳期和退化期乳腺组织结构呈现有规律的周期性变化。     

犬乳腺癌的病理组织学诊断

研究旨在通过对病犬乳腺肿瘤的病理组织学检查来确定肿瘤的性质、癌巢结构、肿瘤细胞的异型性,恶性程度等,探讨犬乳腺癌的病理组织学变化。利用苏木素一伊红（HE）染色,在光学显微镜下观察发现病犬患有乳腺癌。根据组织病理学方法确诊此病犬肿瘤为腺癌,且其恶性程度较高,与人类及其它哺乳动物乳腺肿瘤有较大的差异。     

小鼠乳腺发育、泌乳和退化的组织形态学(Ⅱ)——超微组织形态学变化和β-酪蛋白分泌

研究小鼠乳腺发育、泌乳和退化的超微组织形态学以及蛋白质分泌功能变化,为产奶动物泌乳生物学与乳腺功能调控奠定实验基础;将小鼠青春期、妊娠期、泌乳期和退化期乳腺,一部分制成超薄切片复染法染色后在透射电镜下进行超微结构观察,另一部分制成冰冻切片应用免疫组织化学染色方法进行β-酪蛋白分泌跟踪。结果为透射电镜观察见青春期(性成熟前期和退化期)或静止阶段乳腺上皮细胞胞质内含细胞器相对较少,泌乳期上皮细胞变成高柱状或立方形,胞质内内质网丰富,近腺腔处见大量分泌颗粒,泌乳期乳腺肌上皮细胞内可见少量分泌小泡;β-酪蛋白跟踪染色发现,β-酪蛋白在妊娠初期就有表迭,到泌乳期达到相对稳定水平;小鼠青春期、妊娠期、泌乳期和退化期乳腺结构呈现有规律的周期性变化。     

microRNA在调节乳腺发育和乳腺免疫功能中的作用

miRNAs分子是除了激素之外对乳腺发育以及乳腺免疫功能进行调控的重要分子,综述了miRNAs在乳腺发育以及乳腺免疫中的最新研究进展。     

奶山羊乳腺上皮细胞系的建立

乳腺上皮细胞系的建立为乳蛋白基因表达调控机制的研究及乳腺表达载体的检测提供有利条件。本研究建立了正常培养的奶山羊乳腺上皮细胞系。利用胶原酶和透明质酸消化法从奶山羊乳腺组织中分离并获得了纯化的乳腺上皮细胞,利用细胞角蛋白18的免疫荧光染色对乳腺上皮细胞进行了鉴定。通过细胞生长曲线、群体倍增时间、细胞接种存活率、细胞活力检测等生物学性状的检测建立并鉴定了奶山羊乳腺上皮细胞系。结果表明,奶山羊乳腺上皮细胞在添加表皮生长因子、胰岛素样生长因子-1、转铁蛋白-硒钠、10%胎牛血清的DF12培养液中生长状态良好,细胞传至30代时仍保持旺盛的增殖活力。通过细胞传代及反复冻存和复苏实现了细胞系的长期保存,建立了乳腺上皮细胞系,获得了大量的乳腺上皮细胞。从而为开展奶山羊、奶牛等产奶动物乳腺生物反应器及泌乳机制的研究提供了便利条件。     

Regulation of leptin in involution of mammary gland

Leptin,a protein hormone produced and secreted predominantly by white adipose tissue,has a critical role in the regulation and coordination of energy metabolism.Leptin is produced in the mammary gland by the fat tissue or by the mammary epithelium.In vitro study has shown that leptin triggers apoptosis in mammary epithelial cells.Mammary gland involution is characterized by extensive apoptosis of the epithelial cells.At the onset of involution,STAT3 is specifically activated.Various studies show that leptin act as a paracrine and autocrin factor to influence mammary epithelial cell proliferation and differentiation.This paper reviewed the function of leptin to the involution of mammary gland.     

牛乳腺上皮细胞体外分离、培养和鉴定的研究

建立可用于基因打靶的乳腺上皮细胞系是乳腺生物反应器研制的重要环节,分别采用胰蛋白酶、胶原酶及其两者的混合消化液分离获得了包括少量成纤维细胞在内的原代牛乳腺上皮细胞,比较了不同消化方法的优缺点。利用Trypsin-EDTA阶段消化法在体外培养牛乳腺上皮细胞,观察了此细胞培养到第5代、10代、15代和20代时的细胞形态特征和生长特性,比较了该细胞在胶原基质和混合型基质包被培养皿中的培养效果。以乳腺腺泡上皮细胞中的细胞特征蛋白角蛋白18为标志,利用角蛋白18单克隆抗体进行了细胞免疫组化鉴定,证明分离培养细胞的上皮特性。     

羊乳腺上皮细胞的形态观察

用组织块培养法获得山羊乳腺细胞原代培养物,并根据山羊乳腺成纤维细胞与上皮细胞对胰蛋白酶的敏感性不同将二者分离纯化。对细胞形态进行光镜观察发现:纯化的山羊乳腺上皮细胞传代至第15代时其生长仍正常。山羊乳腺上皮细胞含不同的细胞类型,大多数上皮细胞呈短梭形或多角形,呈蜂窝状;部分细胞呈圆饼状,体积较大;部分细胞呈长形。纯化的乳腺上皮细胞增殖可形成圆顶型结构,呈乳头状,称之为乳球体。     

实时荧光定量PCR对犬乳腺肿瘤组织VEGF-C基因的定量检测研究

运用实时荧光PCR定量检测了38例犬乳腺肿瘤病例(包括15例良性乳腺肿瘤和23例恶性乳腺肿瘤)、4例正常乳腺组织.结果表明:在犬恶性乳腺肿瘤组织中,VEGF-C表达量明显高于良性乳腺肿瘤和正常乳腺组织,两者差异极显著(P<0.001);在伴有淋巴结转移的犬乳腺癌组织中,VEGF-C基因表达量明显高于没有发现转移的乳腺癌组织,两者差异极显著(P<0.01),但VEGF-C的表达量与肿瘤的大小和发病动物年龄无关.由此表明,VEGF-C在犬乳腺癌组织中的表达量远高于其在正常乳腺和良性乳腺肿瘤组织中的表达,且与淋巴结是否发生转移相关,因此VEGF-C有可能作为乳腺癌转移、复发的预测指标之一.     

奶牛乳腺上皮细胞体外培养技术研究进展

奶牛乳腺上皮细胞具有合成和分泌乳汁的特殊功能,是制作乳腺生物反应器的靶细胞。以奶牛乳腺上皮细胞为试验模型,能够真实反应乳腺生长、发育及泌乳的细胞或分子生物学机制,验证乳腺组织特异性表达载体构建的合理性和有效性,对研究奶牛乳腺生物反应器、乳蛋白基因表达具有重要的意义。文章主要从培养方法、培养体系的建立、形态结构与细胞增殖分化方面阐述乳腺上皮细胞体外培养技术研究进展。