不同条件下蔗糖溶液对隐孢子虫卵囊分离纯化效果的比较

[目的]探索以蔗糖溶液作为介质分离纯化隐孢子虫卵囊的最佳条件。[方法]以隐孢子虫感染阳性奶牛粪样为材料,设计5个蔗糖浓度、3个离心时间和3个离心速度进行隐孢子虫卵裳的分离纯化。[结果]蔗糖浓度为1：2．0和1：2．5时,分离出的卵囊总数极显著大于其他3组（P〈0．01）,其中1：2．5组卵囊平均数最大;不同离心时间分离出的卵囊总数在数量上差异均不显著（P〉0．05）,其中离心20min时卵囊平均数最大;不同离心速度分离出的卵囊总数的比较表明,3000r／min得到的卵囊数量最多。[结论]蔗糖浓度为1：2．5、离心速度为3000r／min、离心时间为20min是隐孢子虫卵囊分离纯化的最佳条件。     

隐孢子虫检测方法研究进展

本文介绍了近年来用于检测隐孢子虫的方法,包括卵囊分离与纯化方法、卵囊染色镜检方法、免疫学检测方法、分子生物学检测方法。根据文献中表述的不同方法的敏感性和特异性,本文对所述方法的优缺点进行了对比分析,以便广大寄生虫病学工作者参考,在具体实践中选择比较适合的隐孢子虫检测方法。     

安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白的原核表达及其免疫原性研究

[目的]验证安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白(COWP)的免疫原性,为建立安氏隐孢子虫病免疫学诊断方法奠定基础.[方法]根据GenBank已公布的安氏隐孢子虫COWP同源基因序列(DQ060431)设计引物,克隆COWP基因并构建原核表达载体,经IPTG诱导表达后,采用蛋白印迹法检测其免疫原性.[结果]扩增获得的COWP基因片段为549bp,其序列与GenBank已公布CO WP同源基因序列(DQ060431)的同源性达100％,将其插入pET-32a载体可构建pET-32a-COWP表达载体.重组菌在30℃下经0.5 mmol/L IPTG诱导5h后,其表达形式以可溶性表达为主;NTA-Ni亲和层析柱层析时用200 mmol/L咪唑洗脱液洗脱,即能得到纯化的重组蛋白,重组蛋白分子量约40 kDa.以抗His标签鼠单克隆抗体或鼠抗安氏隐孢子虫高免血清为一抗进行Western blotting检测,均能获得预期的目的条带.[结论]重组COWP蛋白具有良好的免疫原性,可作为安氏隐孢子虫病免疫学诊断的候选抗原.     

保存在重铬酸钾中的微小隐孢子虫卵囊活性及传染性研究

探索保存在4℃2.5%重铬酸钾(K2Cr2O7)中1～30个月的微小隐孢子虫卵囊(CPO)的活性和对免疫抑制BALB/c小鼠的传染性.通过体外脱囊技术评价卵囊的活性,以BALB/c小鼠为感染模型,通过检测CPO感染小鼠的潜伏期、排卵囊数量和回肠末端绒毛中的隐孢子虫数量来评价卵囊的传染性.结果表明:保存在K2Cr2O7中1～16个月的卵囊出现脱囊;免疫抑制BALB/c小鼠在感染保存1～16个月的卵囊后3～8天开始排出大量的卵囊,且在末端回肠绒毛中寄生有大量的隐孢子虫;卵囊的保存时间与潜伏期之间存在强烈的相关性(R2=0.92).因此,CPO在4℃K2CCr2O7中能保持活性和传染性至少16个月,k2Cr2O7是保存CPO的良好介质.     

次氯酸钠对隐孢子虫卵囊在体外脱囊的影响

隐孢子虫卵囊的无菌化及体外脱囊是虫体体外细胞培养不可缺少的环节,本试验通过使用不同浓度次氯酸钠提前处理卵囊,在不同脱囊液的条件下比较各处理组的脱囊率。试验结果表明,不经任何处理的卵囊,在37℃的温度下可发生脱囊,但脱囊率只有15.5%(90 min 的脱囊时间);100%bleach(含5.25%次氯酸钠)作用30 min,对卵囊的活性有很大的影响,在 T+TDC(Trypsin+taurodeocycholic acid)脱囊液中,其脱囊率只有17%(约正常卵囊的20%)15%～20%的 Bleach 对卵囊的活性没有明显的影响,反而有很强     

十种药物对牛隐孢子虫卵囊的抑杀效果

采用光学显微镜观察及免疫抑制小鼠感染方法评价了菌毒敌、单甲脒、速尔2号、福尔马林、氨水等10种化学药物对隐孢子虫卵囊的抑杀效果.试管内杀灭试验结果表明,2%的菌毒敌、2%的单甲脒、2%的速尔2号杀灭率分别为98.2%,93.8%,88.7%.经上述3种药物处理24h的卵囊感染小鼠6d后。小鼠粪中仍未见卵囊排出。表明这3种药物对牛隐孢子虫卵囊有良好的杀灭作用.     

离心速度与时间对奶牛隐孢子虫卵囊浮集效果的影响

采用饱和糖溶液漂浮法,选择不同离心速度(1000,1500,2000,2500,3000,3500r/min)与不同离心时间(6,9,12,15,18,21.24,27min)对同一隐孢子虫阳性牛粪卵囊浮集效果作了比较观察,F检验及多重比较.结果表明,在3000r/min转速条件下离心21min时卵囊浮集效果明显高于其它各组,此即为分离牛隐孢子虫卵囊较为理想的离心速度和离心时间.     

实验性雏鸡隐孢子虫病治疗试验

评价了交沙霉素、大蒜素、甲硝唑、复方新诺明等４种药物对实验性雏鸡隐孢子虫病的治疗效果．雏鸡感染后第９ｄ起，分组在饲料中添加交沙霉素（８．０ｇ／ｋｇ）、大蒜素（６ＯＯｍｇ／ｋｇ），甲硝唑（４．０ｇ／ｋｇ），复方新诺明（８．６ｇ／ｋｇ），连续５ｄ任鸡采食，结果试验组鸡粪中卵囊数明显低于对照鸡，病鸡症状和眼观病变得到缓解，表明这４种药物对雏鸡实验性隐孢子虫病有一定治疗作用．     

交沙霉素等四种药物对雏鸡隐孢子虫病的预防效果

对经口感染(4.0×10~5个/鸡)贝氏隐孢子虫(Cryptosporidium baileyi)卵囊的雏鸡在其饲料中分别添加交沙霉素(4.0g/kg)、复方新诺明(4.9g/kg)、大蒜素(400mgkg/)、甲硝唑(2.0g/ks),任鸡自由采食,连用7d.结果表明,实验鸡潜隐期延长,粪中卵囊数显著降低,体重明显增加,血液学值及血清酶学指标与健康对照鸡无明显差异.由此证明,这4种药物对实验性雏鸡隐孢子虫病有不同程度的预防作用.     

3种方法检测仔猪球虫卵囊的比较研究

[目的]为有效检测仔猪球虫卵囊提供参考。[方法]通过对检测仔猪球虫病的3种方法(直接涂片镜检法、饱和盐水漂浮法和Teleman法)进行比较,研究检测仔猪球虫卵囊的有效方法。[结果]比较3种方法分别对仔猪球虫卵囊阳性检出的效果,结果表明,Tele-man法能观察到较清楚的圆形球虫卵囊,是检测效果最好的方法。对仔猪球虫卵囊检出率的比较结果表明,Teleman法和饱和盐水漂浮法是较好的仔猪球虫卵囊检出方法,而检出比率Teleman法最高。饱和盐水漂浮法、直接镜检法都由于粪便中存在脂肪颗粒等异物而影响检测效果。对检测的结果进行分析可知近年来乐山仔猪球虫病发病率有所升高。[结论]Teleman法是最有效的卵囊检出方法。     

微小隐孢子虫重组蛋白CP21的免疫特性

采用微小隐孢子虫CP21基因的原核表达蛋白的抗血清对微小隐孢子虫感染HCT-8细胞进行了体外阻断试验,检测不同浓度抗血清对HCT-8细胞感染隐孢子虫感染率的影响.同时应用纯化的重组CP21蛋白对小鼠进行免疫,检测体液免疫水平和细胞免疫水平的变化.对免疫后的小鼠接种微小隐孢子虫,检测重组CP21蛋白对微小隐孢子虫感染的保...     

鸡大肠杆菌计数方法研究

寻求一种简单、快捷的大肠杆菌计数方法。采用分光光度计测定经鉴定的大肠杆菌悬液的OD值,同时通过直接涂片计数法计算大肠杆菌数。细菌悬液经适当浓度稀释后OD值在0.1~1.0范围内,细菌悬液的OD值与活菌数之间成直线关系。利用OD值测定大肠杆菌数目是一种简单、快捷的细菌计数方法。     

几种微量提取盐芥DNA方法的比较

[目的]探讨一种提取盐芥高质量DNA的方法。[方法]分别采用简化SDS法、改良CTAB法、CTAB法和改良尿素法提取盐芥DNA,测定不同方法所提取DNA的纯度和浓度,并进行电泳和酶切检测,并对其结果进行比较。[结果]改良CTAB法提取的DNA纯度高、质量好,没有糖类、酚类及蛋白质的污染,能用于PCR扩增和限制性内切酶酶切。CTAB法提取的DNA没有蛋白质的污染,但有酚类物质的污染,可作为PCR扩增的模板。SDS法以及尿素法提取的DNA质量较差,不能满足分子生物学研究的要求。[结论]改良CTAB法比其他方法更适合分子生物学分析和研究。     

小菜蛾人工饲养方法比较

比较了离体菜叶法（养虫缸法）、蛭石萝卜苗法、甘蓝苗活株法（养虫笼法）3种饲养小菜蛾的方法。结果表明：离体菜叶法（养虫缸法）的幼虫死亡率高;蛭石萝卜苗法,萝卜苗不耐吃,更换频率高,湿度不易控制,幼虫化蛹位置不固定,不便收集;甘蓝苗活株法（养虫笼法）,成活率高,长势均一,且能缩短生育历期1～3d,是较为适宜的方法。     

双向电泳中4种常用染色方法的比较

采用SDS-PAGE电泳技术,比较分析了双向电泳中常用4种染色方法的优、缺点。结果表明:常规银染法灵敏度低;改进的双胺硝酸银银染法与质谱分析不兼容;考染方法-银染复合染色法的灵敏度稍低于双胺硝酸银银染法,但它的质谱兼容性最高;改进后的银染方法灵敏度高、背景清晰、与质谱兼容。因此后两种方法较广泛适用于蛋白质组学研究。     

单味中药对兔球虫卵囊孢子化抑制效果的研究

研究单味中药在不同时间及不同浓度下对兔球虫卵囊孢子化抑制效果。首先,在同浓度单味中药培养的条件下进行观察,发现随着时间的延长,除鸦胆子中卵囊孢子化率没有升高外,其余中药球虫卵囊孢子化率均有不同程度的升高;鸦胆子对兔球虫卵囊孢子化有显著的抑制作用,仙鹤草、常山、青蒿、马鞭草、使君子和柴胡有一定的抑制作用;各组洗去中药继续培养3 d,发现各组卵囊孢子化率均呈上升趋势。这表明,虽然有些中药对兔球虫孢子化有一定的抑制作用,却不能杀灭卵囊。不同浓度中药抑制实验结果表明,仙鹤草、常山、青蒿、鸦胆子随浓度增高孢子化率改变明显,100%浓度抑制球虫卵囊孢子化的效果优于50%和25%浓度,而马鞭草、使君子、柴胡随浓度变化改变不明显。     

应用巢式PCR-RFLP方法鉴别我国常见的几种隐孢子虫

应用巢式聚合酶链反应(Nested PcR)-限制片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)方法对微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)、安氏隐孢子虫(C.andersoni)、贝氏隐孢子虫(C.baileyi)和猪隐孢子虫(C.s...