奶牛精子SRY基因原位杂交检测方法的建立

Sry基因是Y染色体性别决定基因,采用primer premier 6对SRY基因序列设计引物,以公牛基因组DNA为模板扩增,高效DNA地高辛标记和检测试剂盒制备探针,对X精子(Y精子纯度7％)、Y精子(Y精子纯度93％)和常规精子(Y精子纯度50％)DTT去凝集、蛋白酶K去除鱼精蛋白,杂交.结果表明:在荧光显微镜下可见标本背景清晰,精子头部成蓝色,边界清楚,X精子4.67％ (n =600)有荧光信号,Y精子86.33％(n=600)有荧光信号,常规精子46.17％有荧光信号.实验证明了所选取Sry基因序列为Y精子携带,建立了精子原位杂交方法.     

牛精子原位杂交DTT去凝集条件优化

[目的]确定牛精子原位杂交DTT去凝集处理的优化浓度及时同.[方法]牛精子解冻后经密度梯度离心优选并制片,采用0、5、10、20、40、80和100 mmol/L六个DTT浓度以及15、30、45和60 min4个时间段的28个组合进行去凝集处理,Motic Images Advanced 3.2软件测量精子解聚后头部面积.[结果]40 mmol/L DTT处理45min精子头部面积为(52.32±4.68 )μm2,浓度＜ 40 mmol/L的16个处理组及浓度≥40 mmol/L、处理时间＜45 min的6个处理组,精子头部面积小于(52.32±4.68) μm2(p＜ 0.01);浓度＞40 mmol/L、时间≥45 min的5个处理组,精子头部面积与40 mmol/L DTT 45 min组差异不显著(P＞0.05),但精子形态不完整.[结论]40mmol/L DTT 45 min为较优处理组合.     

鸡抗奶牛Y精子蛋黄抗体的制备

用洗涤后的奶牛Y精子与免疫佐剂1∶1混合,免疫产蛋母鸡,收集免疫蛋,用水稀释法进行卵黄抗体(YAb)的分离,对提取的YAb用奶牛Y精子进行滴度测定,并对提取样品进行抗体含量、得率以及提取前后抗体效价损耗率进行测定.结果表明:卵黄中含有与奶牛Y精子作用的有效抗体(IgY),并且能使精子发生凝集现象；水稀释法提取后抗体得率为88.38％,抗体效价损耗率为12.49％.该抗体对Y精子作用的专一性有待进一步研究.     

奶牛对精子的免疫学反应及其与不孕症的关系

利用固相酶染色法(SESA)和试管玻片凝集法(F-D 法)分别检测不孕母牛(试验组)和处女牛、正常空怀及妊娠母牛(对照组)血清和子宫颈粘液的抗精子抗体(AsAb)反应。结果表明,SESA 测定不孕母牛血清 AsAb 平均阳性反应率显著高于处女牛和空怀及妊娠母牛(P<0.001)。不孕母牛子宫颈粘液的 AsAb 阳性反应率亦高于对照组母牛(P<0.05)。不孕母牛 AsAb 阳性反应血清和子宫颈粘液的滴度分别为1∶133和1∶141,两者差异不显著(P>0.05)。F-D 法检测的结果,试验组血清 AsAb 阳性反应率高于处女牛(P<0.05),但与空怀及妊娠母牛比较无统计差异(P>0.05)。两种检测方法均未发现不孕母牛配种次数和胎次与AsAb 阳性反应率之间的明显相关。试验表明:母牛血清和生殖道的 AsAb 存在与繁殖状态有关,可能是母牛某些不孕症的免疫学原因之一;SESA 检测 AsAb 反应具有比 F-D 法更高的特异性、敏感性和精确性。     

氯化钠浓度对美洲鲥鱼精子活力的影响

观察了不同氯化钠浓度对美洲鲥鱼精子活力的影响,结果表明:氯化钠浓度为0~0.8%时,精子快速运动时间无显著差异。氯化钠浓度为0.9%(生理盐水)时,精子运动时间和寿命最长。氯化钠浓度为1.0%时,精子活力受到抑制,运动能力和寿命下降。氯化钠浓度为1.4%~4.2%时,精子呈不活动状态,并失去运动能力。     

Sry基因探针FISH检测奶牛XY精子纯度

为探讨荧光原位杂交技术（FISH）在评价奶牛精子纯度方面的应用价值，制备地高辛标记Sry基因探针，对分选X、Y精子及常规精子标本进行RNA水平的精子荧光原位杂交分析。结果显示，荧光原位杂交测定分选X、Y精子及常规精子纯度分别为94.6%、93.3%、50.3%，与对应精子纯度比较差异不显著（P>0.05），杂交信号多出现在精子尾部中段。可见：建立的Sry基因探针FISH方法评价奶牛精子纯度鉴定结果准确可靠，为其他精子纯度评价方法提供可靠的技术支持。     

蛋白酶K水解蜂王浆蛋白的研究

为评价不同蛋白酶水解蜂王浆蛋白的效果,本研究以蛋白酶K为试验用酶,对蜂王浆蛋白的最佳水解条件及水解产物稳定性进行了研究.结果显示,蛋白酶K水解蜂王浆的最佳条件为温度55℃,pH 7.5,酶添加量60 g/mL,氯化钙添加量0.01 mol/L,反应时间4 h,水溶性蛋白质提取率为31.03%;蛋白酶K水解蜂王浆蛋白的产物在酸、碱、热条件下能够保持较高的稳定性.蛋白酶K水解蜂王浆的效果介于植物性蛋白酶及动物性蛋白酶之间,可用于生产富钙型的水溶性蜂王浆.     

不同浓度金属离子对酸性蛋白酶活性的影响

[目的]探寻不同浓度金属离子对黑根霉产酸性蛋白酶活性的影响,为酸性蛋白酶的应用提供理论依据。[方法]以黑根霉作为研究菌株,研究了Cu2＋,Mn2＋,K＋,Ca2＋,Li＋,Zn2＋,Fe2＋和Na＋对酸性蛋白酶活性的影响。[结果]Cu2＋,Mn2＋,K＋,Ca2＋和Na＋5种离子在一定浓度范围内对酸性蛋白酶活性起激活作用;Li＋,Zn2＋和Fe2＋3种离子对酸性蛋白酶活性起抑制作用。[结论]不同浓度金属离子对酸性蛋白酶活性影响不同,可优先选择激活作用强的金属离子来促进酸性蛋白酶活性。     

蛋白酶K的突变及其性质研究

首先获得了野生型的蛋白酶K表达菌株,然后通过软件预测得到了对其热稳定性具有潜在影响的3个氨基酸残基位点,对其进行了点突变,分别在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中进行了分泌表达,通过筛选获得了1个热稳定性提高了30%,比活性提高约50%的蛋白酶K突变体pPicZαA-PK108。这对蛋白酶K在工业上的应用起到了一定的促进作用,可以减少蛋白酶K在洗涤剂、食品加工中的用量,降低生产成本;此外,也可提高污水中病毒的灭活效率,减少环境污染。     

不同冷冻-解冻精子浓度对猪卵母细胞体外受精的影响

[目的]探讨体外受精时不同精子浓度对精子穿入成熟卵母细胞及后续发育的影响。[方法]以冷冻-解冻精子为材料,以1×106、1×107个/ml 2种精子浓度进行体外受精,研究不同冷冻-解冻精子浓度对猪卵母细胞体外受精的影响。[结果]当精子浓度为1×106、1×107个/ml时,精子穿入率分别为83.18%、88.23%,单精入卵率分别为40.55%、9.02%,多精入卵率分别为59.45%、90.98%,平均每个卵母细胞中的精子数分别为2.03、3.26个,雄原核形成率分别为84.10%、86.40%,单精入卵率、多精入卵率有显著差异(P<0.05),其他指标无显著差异(P>0.05)。[结论]该研究为应用冷冻-解冻精子建立猪卵母细胞的体外生产系统提供了依据。     

热应激对奶牛生理性能的影响

综述了奶牛热应激的产生机制和热应激参数,以及热应激对奶牛生理活动、内分泌、血清中电解质和无机离子的影响。     

不同水平瘤胃保护赖氨酸对奶牛产奶性能的影响

选用32头泌乳奶牛配对分为4组,对照组饲喂基础日粮,试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组在基础日粮中分别添加瘤胃保护赖氨酸(RPLys)10、20、30 g/头.d。研究结果表明:相对于对照组,饲喂RPLys组的产奶量与乳蛋白质率都有所提高,其中试验Ⅲ组的产奶量增幅最大,试验Ⅲ组与对照组的乳蛋白质率差异显著(P0.05);添加RPLys对乳脂率、乳糖、非脂总固形物含量没有显著影响(P0.05)。     

菌落原位杂交技术在环境微生物检测中的应用

微生物技术在处理环境污染物等方面具有成本低、无二次污染、反应条件温和等优点。为从根本上解决环境问题,就环境中微生物的检测为主题,介绍了菌落原位杂交的原理以及在环境微生物检测中的应用。     

奶牛蹄病与矿物元素相关性研究

[目的]探究奶牛体内矿物元素含量与蹄病的关系。[方法]从某大型集约化奶牛场随机抽取8头患蹄病的奶牛和8头健康奶牛,采用原子吸收分光光度法检测患蹄病奶牛与健康奶牛血清中一些矿物元素(K、Fe、Cu、Mg、Mn、Na、Zn、Ca)的含量,分析了矿物元素的代谢与奶牛蹄病之间的关系。[结果]与对照组相比,试验组奶牛血清中Zn和Mn含量差异极显著(P0.01),试验组Ca和Mg含量差异显著(P0.05),试验组K、Fe、Cu和Na含量差异不显著(P0.05)。[结论]患蹄病奶牛内矿物元素代谢异常,特别是与骨骼生长发育有关的元素代谢紊乱,容易导致蹄病的发生。     

大豆黄酮对泌乳后期奶牛相关乳成分的影响

选用14头产奶水平相近的泌乳后期黑白花奶牛,随机分为对照组、试验组。试验组日粮添加10mg/kg的大豆黄酮,持续30d。结果发现:与对照组相比,试验组奶牛乳蛋白有所升高,乳脂率有所下降。试验第15d乳中GH的含量显著升高(P<0.05),E2、T3和T4的含量均有升高的趋势。提示大豆黄酮可能通过调节内源性激素水平而间接地影响奶牛乳成分。     

基因组原位杂交技术及其在植物中的应用

基因组原位杂交技术作为植物分子细胞遗传学研究的重要手段,以其安全、精确、直观、信息丰富的特点,被广泛地应用于杂种染色体分析,物种的起源、进化和亲缘关系探索,染色体行为考察等方面。文中就基因组原位杂交技术在植物中的应用、局限性以及发展前景等作了较为系统的综述。     

奶牛子宫内膜炎疾病综合防治体系的构建

根据当前奶牛养殖中繁殖疾病防治存在的问题,从奶牛饲养管理、饲料配制、人为因素等方面阐述了奶牛子宫内膜炎的防治措施,旨为降低奶牛子宫内膜炎发病率提供参考。     

大豆黄酮对奶牛泌乳性能及血浆中激素水平的影响

为了研究大豆黄酮对奶牛泌乳性能的影响及其可能的作用机制,选用14头产奶水平相近的泌乳后期奶牛,随机分为对照组、试验组。试验组日粮添加10mg/kg的大豆黄酮,持续30d。结果发现:大豆黄酮能缓解泌乳后期奶牛产奶量下降的趋势,并在一定程度上提高产奶量。与对照组相比,乳蛋白有所升高,乳脂率有所下降。试验30d时血浆中GH(P<0.05)和PRL(P<0.01)的含量显著升高,E2、T3和T4的含量均有升高的趋势。提示大豆黄酮可能通过调节内源性激素水平而间接地影响奶牛泌乳量和乳成分。     

花生自身基因组原位杂交分析

利用自身基因组荧光原位杂交技术,对花生(Arachis hypogaea L.)进行自身基因组原位杂交分析.结果显示,杂交信号沿所有染色体的全长分布,染色体着丝粒区、近着丝粒区和部分DAPI深染的区域存在强烈的杂交信号,染色体远端的杂交信号偏弱,染色体上存在少数未观察到杂交信号的DAPI深染区域.花生自身基因组原位杂交存在明显的非均匀染色体杂交带型,这说明基因区成簇分布在小的染色体区域并被重复序列间隔开.     

奶牛场胎衣不下原因分析及其对繁殖性能的影响

[目的]为产后采取合理的管理措施和提高其生产和繁殖性能,从而提高奶牛养殖的经济效益提供科学依据.[方法]收集了江苏省某大型奶牛场2013 ～2014年产犊记录,分析了不同产犊季节、月份及胎次对奶牛胎衣不下发生率的影响.[结果]该牛场胎衣不下总发生率为11.25％.不同胎次间胎衣不下发生率无显著差异.产犊季节和产犊月份对胎衣不下发生率有显著影响.夏季产犊的奶牛胎衣不下发生率最高（15.78％）,秋季其次（11.81％）,春季最低（3.93％）;7月产犊时奶牛胎衣不下发生率最高（18.75％）,其次为11月和8月,而5月最低.[结论]合理调整配种和产犊季节能在一定降低胎衣不下的发生率.