高效产褐藻胶裂解酶菌株产酶条件优化及降解寡糖结构分析

为筛选高效产褐藻胶裂解酶菌株,以褐藻胶作为唯一碳源,在海星Asteroidea sp.内脏中筛选出一株产胞外褐藻胶裂解酶的菌株AlgX2,并进行了菌株鉴定、产酶条件优化及降解寡糖结构分析。结果表明:经过菌株形态、生理生化及16S rRNA基因鉴定,该菌株属于盐单胞菌属,命名为Cobetia AlgX2;以3,5-二硝基水杨酸法(DNS)测定的菌株酶活性为指标,对褐藻胶裂解酶菌株产酶活性进行正交试验显示,产褐藻胶裂解酶的菌株最适产酶培养基成分为褐藻胶14 g/L、硫酸铵4 g/L、NaCl 30 g/L、初始pH 6.0,优化产酶培养条件为培养温度22℃、接种量2%、装液量50 mL/250 mL、转速150 r/min;在最优产酶培养条件下进行10 L发酵罐产酶试验显示,发酵液酶活力最高为0.176 U/mL;利用粗酶液酶解制备褐藻胶寡糖,并对寡糖进行HPLC色谱检测显示,样品的聚合度为dp2～dp5。研究表明,Cobetia AlgX2菌株可用于扩大发酵生产,产酶效率高且褐藻胶裂解效果显著。     

高效产褐藻胶裂解酶菌株产酶条件优化及降解寡糖结构分析

为筛选高效产褐藻胶裂解酶菌株,以褐藻胶作为唯一碳源,在海星Asteroidea sp.内脏中筛选出一株产胞外褐藻胶裂解酶的菌株AlgX2,并进行了菌株鉴定、产酶条件优化及降解寡糖结构分析。结果表明:经过菌株形态、生理生化及16S rRNA基因鉴定,该菌株属于盐单胞菌属,命名为Cobetia AlgX2;以3,5-二硝基水杨酸法(DNS)测定的菌株酶活性为指标,对褐藻胶裂解酶菌株产酶活性进行正交试验显示,产褐藻胶裂解酶的菌株最适产酶培养基成分为褐藻胶14 g/L、硫酸铵4 g/L、NaCl 30 g/L、初始pH 6.0,优化产酶培养条件为培养温度22℃、接种量2%、装液量50 mL/250 mL、转速150 r/min;在最优产酶培养条件下进行10 L发酵罐产酶试验显示,发酵液酶活力最高为0.176 U/mL;利用粗酶液酶解制备褐藻胶寡糖,并对寡糖进行HPLC色谱检测显示,样品的聚合度为dp2～dp5。研究表明,Cobetia AlgX2菌株可用于扩大发酵生产,产酶效率高且褐藻胶裂解效果显著。     

重组褐藻胶裂解酶基因工程菌超声波破碎条件研究

褐藻胶裂解酶是制备褐藻胶寡糖的重要工具酶,利用工程菌进行褐藻胶裂解酶基因的克隆与高效表达是提高酶活的主要途径之一。工程酶位于胞内,需采取有效破碎手段获取。对重组褐藻胶裂解酶基因工程菌E.coli TOP10采用超声波破碎,分析了超声波破碎强度、总工作时间、NaCl浓度对菌体破碎程度及酶活力的影响。通过单因素试验和正交试验得出重组大肠杆菌的最佳破碎条件为:菌液浓度40 mg/mL,菌液体积50 mL,超声波工作时间4 s,间歇时间8 s,超声波破碎强度50%,总工作时间6min,NaCl浓度为0.15 mol/L。在该条件下获得褐藻胶裂解酶粗酶液的酶活为21 U/mL。     

解淀粉芽孢杆菌产褐藻胶裂解酶的发酵条件优化

用响应面法对解淀粉芽孢杆菌发酵生产褐藻胶裂解酶的培养条件进行了优化.用单因数实验逼近各因素的最大响应区域,利用Plackett-Burman试验设计筛选出影响酶活的3个主要因素,即装液量、pH和蛋白胨浓度.并在此基础上利用BoxBehnken试验设计及响应面方法进行回归分析.通过求解回归方程得到优化发酵条件:当装液量65.28 mL,pH 7.35和蛋白胨浓度0.44% 时,液体发酵液中褐藻胶裂解酶酶活达到理论最大值6.48 U/mL.经3批培养验证,预测值与验证试验平均值接近.     

海刺猬消化腺褐藻胶裂解酶的制备及其酶学性质的研究

以海刺猬Glyptocidaris crenularis为原料,利用丙酮沉淀法制备褐藻胶裂解酶,并对其酶学性质进行分析。结果表明:最佳提取条件为原酶液与丙酮体积比为1∶1.4;酶反应的最适温度和pH为30℃和8.5。酶促反应结果表明:此酶的热稳定性及耐酸碱性较强,受多种金属离子的影响;EDTA对酶活力的影响较小。酶促动力学曲线表明,vm ax=5.928 U/mL,Km=9.001 mg/mL。     

海刺猬消化腺褐藻胶裂解酶的制备及其酶学性质的研究

以海刺猬Glyptocidaris crenularis为原料,利用丙酮沉淀法制备褐藻胶裂解酶,并对其酶学性质进行分析。结果表明:最佳提取条件为原酶液与丙酮体积比为1∶1.4;酶反应的最适温度和pH为30℃和8.5。酶促反应结果表明:此酶的热稳定性及耐酸碱性较强,受多种金属离子的影响;EDTA对酶活力的影响较小。酶促动力学曲线表明,vm ax=5.928 U/mL,Km=9.001 mg/mL。     

产几丁质酶链霉菌SO1菌株的筛选及培养条件

从土样中分离获得的链霉菌ＳＯ１菌株在产酶培养基中，２８℃振荡培养７天，其胞外几丁质酶活力可达１８０９ｕ／ｍｌ。实验表明，不同碳、氮源及诱导物对ＳＯ１菌株产几丁质酶有不同的影响，以酵母粉对产酶的促进作用最为明显，比对照提高了７５．２％。部分脱乙酰几丁质、胶体几丁质及几丁质均可作为ＳＯ１菌株产几丁质酶的诱导物，其中以几丁质诱导产酶的效果最好。     

南昌链霉菌发酵条件的研究

通过单因子及正交实验对南昌链霉菌“116-5.8-64”菌株的发酵条件进行研究。结果表明,比较理想的发酵条件为起始pH8.0,培养温度30℃,装液量30 mL/250 mL锥形瓶,培养时间为8 d。在此条件下,南昌链霉菌“116-5.8-64”的产素单位比原始发酵条件下提高了25.32%。     

1株产褐藻胶裂解酶海洋细菌的分离鉴定及其酶学性质

利用以褐藻胶为唯一碳源的培养基分离纯化产褐藻胶裂解酶的海洋细菌,通过形态特征、生理生化和16SrRNA基因鉴定菌株,用紫外法分析纯化酶液的pH、温度作用范围及稳定性等酶学性质.结果表明:从青岛近海分离到1株产褐藻胶裂解酶的菌株QZ-4,革兰阴性杆菌,适宜生长温度和NaCl质量浓度范围分别为15～25℃和15～60g/L;16SrRNA基因序列分析显示,该菌与交替假单胞菌(Pseudoalteromonas tetraodonis)相似性为97%,GenBank登录号为HM130919;该酶具有同时降解高古罗糖醛酸聚合物和高甘露糖醛酸聚合物的能力,其最适作用pH和温度分别为7.5和40℃,Mg2+、Na+、Fe3+、Mn2+等对酶活力有促进作用,Zn2+有抑制作用,1.0mol/L乙二胺四乙酸可完全抑制其活性;由Lineweaver-Burk(L-B)作图法求得该酶的最大反应速度(Vmax)为0.541U/mL,米氏常数(Km)为0.051mg/mL.     

耐热链霉菌B221产生角蛋白酶的液体发酵条件研究

以羽毛粉为底物,采用链霉菌(Streptomycessp.)B221液体发酵生产角蛋白酶,考察了温度、pH值、氮源、碳源以及接种菌量对角蛋白酶生成的影响。结果表明,该菌能够分解羽毛角蛋白,产生角蛋白酶,且在40℃、pH值为9.0、接种量为5%时酶活力最强。与培养基中只含有羽毛的发酵过程相比,添加蔗糖更有利于提高角蛋白酶的活性,而葡萄糖和可溶性淀粉对酶的活性则有不同程度的抑制作用;添加NH4C l和KNO3对角蛋白酶活性均有一定的促进作用,而尿素和蛋白胨则对角蛋白酶活性有抑制作用。本试验研究结果为进一步利用微生物技术手段开发羽毛角蛋白资源奠定了基础。     

海藻酸钠裂解酶产生菌的筛选及酶活性研究

[目的]筛选海藻酸钠高效降解菌并研究其产酶活性。[方法]以海藻酸钠为唯一碳源,通过驯化培养、初筛、复筛得到一株优势菌,并对该菌的最适生长条件、最适产酶条件及酶的性质作了初步研究。[结果]优选出1株海藻酸钠高效降解菌8号菌株,为革兰氏阴性菌,形态为杆状。该菌在30℃培养72h产酶量最高。海藻酸钠裂解酶作用的最适底物质量分数为1．00％～2．00％,最适pH值为7．o,最适反应温度为4JD℃,温度继续升高,酶活力急剧下降。[结论]为海藻酸钠的有效降解提供了科学依据。     

番茄褐斑病菌产毒培养条件的研究

对番茄褐斑病菌产毒培养条件研究结果表明,不同培养方式、pH值、温度、光照条件、培养天数所制备的毒素毒力差异达显著,但不同培养基所制备的毒素毒力差异不显著。病菌最佳产毒条件为室温25℃,连续振荡,光照12 h,pH值为6,振荡培养15 d。     

培养条件对奶牛金葡菌5型荚膜多糖产量的影响

[目的]研究不同培养条件对牛源金葡菌5型荚膜多糖产量的影响,以便于CP5的生产制备,从而为开展奶牛金葡菌新型多糖疫苗的研究奠定基础。[方法]从患隐性乳腺炎奶牛乳样中分离金葡菌,鉴定荚膜多糖血清型,对5型荚膜多糖菌株,采用BHI,哥伦比亚固体培养基,mod110三种培养基,每种培养基分别采用固体培养,碳源为葡萄糖的液体培养和碳源为乳糖的液体培养三种方式,共组成9种不同培养条件进行培养,研究培养条件对金葡菌荚膜多糖产量的影响。[结果]不同培养结果表明,与常用哥伦比亚培养基比较,BHI培养基能降低荚膜多糖产量,而mod110培养基能提高荚膜多糖产量;同种培养基,固体培养方式比液体培养方式有更高的荚膜多糖产量,同时乳糖作为碳源可提高荚膜多糖产量。     

培养条件对奶牛金葡菌5型荚膜多糖产量的影响（英文）

[Objective] The effect of different culture conditions on type 5 capsular polysaccharide production of Staphylococcus aureus from diary cattle was studied to provide simple way for CP production and preparation and laid foundation for carrying out new polysaccharide vaccine research.[Method] Staphylococcus aureus was isolated from milk sample of sick dairy cattle and capsular polysaccharide serotypes were identified.Type 5 capsular polysaccharide was cultured on BHI,solid columbia and mod110 culture media.Glucose and lactose were taken as carbon sources for every culture media in solid and liquid state.Therefore 9 different culture conditions were taken to study the effect of culture conditions on capsular polysaccharide production.[Result]Different culture conditions indicated that compared with columbia culture media,BHI culture media could decline capsular polysaccharide production and mod110 culture media could increase capsular polysaccharide production.While for same culture media,solid culture media was better for capsular polysaccharide production,meanwhile,taken lactose as carbon source could increase capsular polysaccharide production.     

培养条件对奶牛金葡菌5型荚膜多糖产量的影响

奶牛乳腺炎是奶牛生产上的重要疾病,不仅影响奶牛的产奶量、降低牛奶品质,而且严重威胁消费者健康,已成为制约奶牛业发展的主要原因之一。据国内外相关资料显示,50％以上的奶牛乳腺炎是由金葡菌（Staphylococcus aureus,S.aureus）所引起的。研究发现,94％～100％的从患乳腺炎奶牛乳汁中分离到的金葡菌菌株表面带有多糖物质构成的保护性荚膜荚膜具有11种血清型,     

海水养殖废水氨氮降解菌的筛选及培养条件研究

[目的]探讨海水养殖废水氨氮降解菌的筛选及其最佳培养条件。[方法]通过亚硝化细菌筛选和反硝化细菌筛选方法,从海水养殖废水中分离筛选出亚硝化细菌和反硝化细菌各1株,命名为ZW38和ZL5,并对其最佳培养条件进行了研究。[结果]经鉴定,菌株ZW38属于亚硝化单胞菌属,菌株ZL5属于副球菌属。两菌株在37℃条件均获得最大生物量,但菌株ZW38生长缓慢,最适生长pH值是6.0～8.0;而菌株ZL5的稳定期较长,到38 h时达到最大生物量,最适生长pH值是6.0～7.5。当摇床转速为130 r/m in时,菌株ZW38在装液量为40 m l/250 m l时生长最好;菌株ZL5在装液量为20 m l/250 m l～80 m l/250 m l的生长情况无显著差异。[结论]将ZW38和ZL5联合应用可以有效地将海水养殖废水中的氨态氮降解成为对环境无毒无害的气态氮。     

球孢白僵菌营养需求及培养条件研究

用含不同营养的培养基对球孢白僵菌Bb13菌株进行培养产孢。以不同的培养温度、pH值及培养基中所添加的不同的碳、氮源,微量元素进行正交实验,以所产孢子的含孢量和萌发率为主要指标,筛选确定了适合球孢白僵菌Bb13孢子生长的最佳碳源是葡萄糖,最佳氮源是蛋白胨,微量元素铜和锌,对产孢和孢子萌发有明显的促进作用,最适pH值为6￣7,最适培养温度是20￣25℃。     

纤维素降解菌K7-2产纤维素酶培养条件的优化

对新筛选出的产纤维素酶菌株K7—2进行了产酶培养条件的优化。结果表明．菌株K7—2的最优产酶条件为培养液初始pH值7．0、培养温度34℃、摇瓶转速150r·min^-1、培养时间60h、接种量3．5％：最适碳源是麸皮,最适氮源是黄豆粉。为进一步改造、构建更适合生产纤维素酶的工程菌株开辟了新的途径。     

不同培养条件对白芨种子萌发效应的研究

[目的]探索白芨种子萌发的适宜培养条件。[方法]以MS为基本培养基,分别考察灭菌剂浓度、基本培养基种类、光照周期、蔗糖浓度、活性炭浓度对白芨种子萌发的影响。[结果]白芨种子萌发的适宜培养条件为：采用1%的次氯酸钠灭菌,1/2MS培养基,2%蔗糖,0.1%活性炭,光周期10-12 h/d,在该培养条件下7 d后白芨种子萌发率可达80%以上。[结论]为白芨组织培养快速繁殖体系建立提供理论依据。     

白僵菌有关培养条件及其与毒力关系的研究

以麦麸、米糠、黄豆粉、蛋白胨、牛肉膏、蚕蛹粉作供试氮源,在３种动物性氮源的培养基上,白僵菌的产孢量及毒力均高于植物性氖源,其中以蚕蛹粉最优;在１６种不同碳氮比的培养基上,以碳氦比２（４０／２０）和１．５（３０／２０）产孢量和毒力为高;在８种不同ｐＨ值的培养基上,以ｐＨ５．５～６．５最适于产孢,ｐＨ６．３、７．０时,白僵菌的毒力明显较强。研究结果显示,菌落生长量和产孢量往往不一致,而产孢量与毒力则明显相关。