黄瓜花叶病毒亚组研究进展

综述了黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）亚组研究的进展．根据寄主反应、血清学关系、病毒外壳蛋白肽链图谱分析、ｄｓＲＮＡ分析、核酸杂交、ＲＴ－ＰＣＲ产物酶解分析及核酸序列分析等方法,可将现有ＣＭＶ株系或分离物区分成２个亚组,尤其是利用单克隆抗体、核酸杂交、ＰＣＲ及核酸序列分析,能准确地将不同亚组的分离物区分开．从已知序列的ＣＭＶ株系分析,不同亚组株系的核苷酸序列同源率各ＲＮＡ组分仅为５８％～７５％,同亚组株系的核苷酸序列同源率则达８６％～１００％．将ＣＭＶ株系或分离物区分成２个亚组反映了它们之间的进化关系．文章最后就我国ＣＭＶ亚组的研究提出看法和建议     

微量板杂交法和斑点杂交法检测菊花矮化类病毒的比较

利用狄高辛（ＤＩＧ）标记制备菊花矮化类病毒（ＣＳＶ）特异性探针，由反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）进行ＣＳＶ ＲＮＡ的反转录和ｃＤＮＡ的扩增，然后比较２种核酸杂交方法－微量板杂交和斑点杂交检测ＣＳＶ的灵敏度。本研究结果表明，３０ｍｇ干燥样本抽提的ＣＳＶ ＲＮＡ被稀释４００倍，取４μＬ（约７５０ｐｇ样本抽提的ＲＮＡ）经ＲＴ－ＰＣＲ，其产物再用１０×ＳＳＣ稀释１００倍，采用微量板杂交仍可很容易得到     

聚合酶链反应法进行Puumala病毒RNA扩增的研究

应用ＰＣＲ技术进行Ｐｕｕｍａｌａ病毒核酸片段的特异性扩增．将为进一步研究Ｐｕｕｍａｌａ病毒和相关病毒．以及检测此类病毒感染提供更加特异、敏感、快速的方法。依据已知的Ｐｕｕｍａｌａ病毒核酸序列，从Ｍ节段选出５对寡核苷酸作为ＰＣＲ反应中的引物，以Ｐｕｕｍａｌａ病毒ＲＮＡ作为模板。做ＰＣＲ。ＰＣＲ产物分别经凝胶电泳和核酸杂交的方法进行测定，结果表明。目的核酸片段得到了很好的扩增。     

双抗TMV和CMV转基因番茄后代的遗传分析

通过对转ＴＭＶ和ＣＭＶ双价外壳蛋白基因番茄Ｔ１代群体和Ｔ２代株系进行ＰＣＲ及ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ鉴定，并分别进行温室及田间抗病毒试验，结果表明，Ｔ１代工程番茄植株中确有ＣＭＶ—ＴＭＶ双价外壳蛋白基因的遗传和分离，其遗传行为符合显性单基因的孟德尔遗传。Ｔ２代部分株系ＣＭＶ—ＴＭＶ双价ＣＰ基因已获得稳定遗传，共获得了３个遗传稳定的番茄株系。     

云南烟草花叶病毒外壳蛋白基因的分离克隆及序列分析

从云南弥勒县采集典型病株接种蔓陀萝植斑分离,经免疫电镜（ＩＥＭ）鉴定为ＴＭＶ;在烤烟品种红花大金元上以ＴＭＶ普通株作对照进行致病率测定,确定为强毒株系,以烟草花叶病毒（ＴＭＶ）云南强毒株系ＲＮＡ为模板,根据国外研究结果,自行设计,合成寡核苷酸为引物,通过ＰＴ－ＰＣＲ体外扩增,得到约５００ｂｐ的ＤＮＡ片段,将其克隆到Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５０上,并进行了序列分析。分析表明,该基因含４７７个核苷酸,编码１５     

烟草花叶病毒蚕豆分离物移动蛋白基因克隆及序列分析

根据已报道的ＴＭＶ Ｕ１株系（ＴＭＶ－Ｕ１）的序列设计了特异性引物,利用ＲＴ－ＰＣＲ技术,从烟 草花叶病毒蚕豆分离物（ＴＭＶ－Ｂ）上扩增移动蛋白（ＭＰ）基因及其邻近序列。将此ｃＤＮＡ片段克隆于 ｐＢｌｕｓｃｒｉｐｔ ＳＫ质粒上,进行测序分析。结果表明：ＭＰ基因由８０７个核苷酸组成,编码２６８个氨基酸。与 ＴＭＶ－Ｕ１的ＭＰ基因序列比较,核苷酸序列及推导出的氨基酸序列的同源性分别为９９．０１％和 ９８．８９％。与ＴＭＶ－Ｙｕ的ＭＰ基因序列比较,同源性分别为９８．１４％和９８．８９％。说明ＴＭＶ的ＭＰ基因 在不同株系中是非常保守的。     

葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ基因的克隆及序列分析

根据葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ美国分离物的ＧＬＲａＶ－３ＣＰ基因序列,设计并合成了１对该病毒的ＰＣＲ引物,利用ＩＣ－ＲＴ－ＰＣＲ成功地检查到合适大小的ＰＣＲ产物;同时将ＰＣＲ产物克隆到中间载体ＰＧＥＭ－３Ｚｆ,转化大肠杆菌ＤＨ５α菌株,筛选阳性克隆。通过双酶切以及序列分析表明,扩增样品与美国分离物的同源性为９４．１％。     

烟草花叶病毒蚕豆分离物移动蛋白基因克隆及序列分析

根据已报道的ＴＭＶＵ１株系（ＴＭＶ－Ｕ１）的序列设计了特异性引物,利用ＲＴ－ＰＣＲ技术,从烟草花叶病毒蚕豆分离物（ＴＭＶ－Ｂ）上扩增移动蛋白（ＭＰ＿基因及其邻近序列,将比ＣＤＮＡ片段克隆于ｐＢｌｕｓｃｒｉｐｔＳＫ质粒上,进行测序分析,结果表明ＭＰ基因由８０７个核苷酸组成,编码２６８个氨基酸,与ＴＭＶ－Ｕ１的ＭＰ基因序列比较,核苷酸序列及推导出的氨基酸序列的同源性的９９．０１和９８．８９％,与ＴＭＶ     

西瓜花叶病毒2号山西分离物外壳蛋白基因核苷酸序列分析

利用ＲＴ－ＰＣＲ方法，扩增获得西瓜花叶病毒２号（ＷＭＶ－２）山西分离物ＣＰ基因，并克隆到ｐＵＣ－Ｔ载体中，核苷酸序列测定结果表明，山西分离物ＣＰ基因全长为８４６个核苷酸，编码由２８１个氨基酸组成的３１．５ｋＤａ蛋白。与国外已报道的ＷＭＶ－２ＣＰ基因相比，其核苷酸序列同源性为９２．８％～９３．９％，由此推导的氨基酸序列同源性为９５．４％～９６．４％，山西分离物外壳蛋白有４个氨基酸残基明显不同于其它分     

黄瓜花叶病毒弱株系CMVP_1卫星RNA的cDNA合成、克隆及序列分析

黄瓜花叶病毒弱株系ＣＭＶＰ_１卫星ＲＮＡ的ｃＤＮＡ合成、克隆及序列分析周雪平，刘勇，薛朝阳，李德葆（浙江农业大学生物技术研究所，杭州３１００２９）ＣｌｎｉｎｇａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｓａｔｅｌｌｉｔｅＲＮＡｇｅｎｅｏｆｃｕｃｕｍｂｅ?..