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相似文献
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1.
柿AFLP银染技术体系的建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
通过对各主要影响因素的研究,建立了适于柿AFLP分析的银染技术体系:酶切体系20μL总体积中含纯化后的DNA450ng,EcoRI和MseI各3U,37℃酶切4h;酶切完成后加入连接液,37℃连接10h(或过夜),然后65℃变性10min;连接产物稀释5倍用于预扩增,预扩增体系中EcoRI和MseI引物均不含选择性碱基;预扩增产物稀释5倍用于选择性扩增,选择性扩增体系中EcoRI和MseI引物均含3个选择性碱基,选择性扩增完成后,加入10μLLoadingbuffer,95℃变性10min,立即冰浴;取6 5μL变性后的选择性扩增产物在6%变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳,电泳完毕后,对胶板进行固定、脱色、水洗、银染、冲洗、显影、定影及干燥等银染程序。  相似文献   

2.
以杞柳F1群体为试验材料,采用改良的CTAB法提取基因组DNA,经过酶切、连接、预扩增和选择性扩增,建立杞柳AFLP的反应体系,筛选EcoRI和MseI各16条选择性扩增引物组成256对引物组合。结果表明:320 ng基因组DNA采用5U EcoRI和MseI双酶切6 h,20℃连接12 h,连接产物稀释10倍进行预扩增,预扩增产物稀释15倍进行选择性扩增,选择性扩增产物采用ABI-3130检测,可获得条带清晰的指纹图;从256对引物组合中共筛选出98对多态性较高的引物组合。  相似文献   

3.
菊属部分植物的AFLP分析   总被引:26,自引:5,他引:21  
利用AFLP技术,对菊属植物12个分类群进行分析.选择EcoRI/ MseI 这一酶切组合,5个E+3/M+2引物组合及1个E+3/M+3引物组合进行选择性扩增.共得到287条条带,其中多态性条带占85.7%.利用UPGMA方法对扩增数据进行分析,结果表明:所选的两个栽培品种‘滁菊'和‘亳菊'可归并为一个品种,该品种与毛华菊、野菊、甘菊亲缘关系相对较近,紫花野菊次之,小红菊相对最远.各野生种间,野菊、甘菊和菊花脑间的亲缘关系极近,且同一分布区内的不用种间有比较频繁的种质渗入.研究表明AFLP技术是进行菊属植物亲缘关系研究极为有效的工具.  相似文献   

4.
利用AFLP技术,对菊属植物12个分类群进行分析.选择EcoRI/ MseI 这一酶切组合,5个E 3/M 2引物组合及1个E 3/M 3引物组合进行选择性扩增.共得到287条条带,其中多态性条带占85.7%.利用UPGMA方法对扩增数据进行分析,结果表明:所选的两个栽培品种‘滁菊‘和‘亳菊‘可归并为一个品种,该品种与毛华菊、野菊、甘菊亲缘关系相对较近,紫花野菊次之,小红菊相对最远.各野生种间,野菊、甘菊和菊花脑间的亲缘关系极近,且同一分布区内的不用种间有比较频繁的种质渗入.研究表明AFLP技术是进行菊属植物亲缘关系研究极为有效的工具.  相似文献   

5.
黄瓜SSAP标记技术的建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
基于黄瓜Ty1-copia类逆转座子的长末端重复序列信息,通过引物设计、选择性扩增体系筛选以及银染显色技术等,建立起了适合黄瓜的SSAP(sequence-specific amplification polymorphism)标记技术体系。通过与AFLP标记比较,确定SSAP标记具有更高的多态性检测效率。进一步将该SSAP标记系统用于不同生态型黄瓜材料间的多态性分析,发现该标记系统能有效地探测不同栽培黄瓜品种间的多态性。  相似文献   

6.
苦瓜AFLP分子标记反应体系的建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
利用AFLP分子标记技术,采用MseI/EcoRI酶切组合,从64对引物中筛选出6对带型分布均匀、多态性高且分辨能力强的引物,分别为:E1/M5、E4/M8、E6/M4、E7/M5、E7/M7、E8/M3,并确定了适用于苦瓜AFLP反应的最佳酶切-连接、预扩增和选择性扩增反应体系,从而为今后利用AFLP分子标记技术对苦瓜进行深入研究打下基础.  相似文献   

7.
基于棉花逆转座子的SSAP标记的开发   总被引:1,自引:0,他引:1  
从棉花BAC序列中鉴定了1个Tyl-copia类逆转座子,根据RNAseH-LTR连接区序列信息设计了特异引物,通过优化试验条件建立了一套经济、高效的SSAP(Sequence-specific amplification polymorphjsm)标记体系.分析棉属不同种的SSAP发现,SSAP在棉属不同种中均有丰富的扩增位点,而且棉花中SSAP多态性位点远高于AFLP(Fragment length poiymorphic markers).这一标记系统可增加棉花染色体端粒区域的标记密度,促进棉花高密度遗传图谱的构建.  相似文献   

8.
以鲤科鱼类建鲤为材料,对扩增片断长度多态性(AFLP)反应体系进行优化,建立适合于鲤鱼的AFLP反应体系.通过对AFLP常规流程中基因组DNA提取、酶切.连接、预扩、选扩及电泳-银染过程的优化,初步建立了适合鲤鱼的AFLP分析体系:采用鲤血细胞DNA提取;MseI和EcoRI 37 ℃双酶切5 h;预扩引物为E+A和M+C;选扩引物E+3与M+3浓度配比为1:8,为提高引物与模板的结合效率,选扩程序均采用touch-down程序;最后结合经典AgNO3-Na2CO3银染显色.通过优化的AFLP程序,从64对引物中筛选出8对多态性引物,为进一步的鲤鱼种质资源研究奠定基础.  相似文献   

9.
哲罗鱼AFLP技术体系建立的研究   总被引:4,自引:0,他引:4  
以哲罗鱼为材料提取DNA,采用两组限制性内切酶组合酶切基因组,并对酶量、酶切时间、扩增时稀释倍数及镁离子的浓度进行优化,结果表明200 ngDNA用4 U的EcoRI和PstI在37℃酶切4 h后,再分别用4 U的Tru9I和TaqI在65℃酶切4 h后用3 U的T4连接酶连接3 h,进行预扩增,预扩增产物稀释100倍后选择扩增效果最佳,得到了清晰稳定的扩增图谱;并对两组酶切组合的扩增结果进行了比较,结果显示EcoRI、Tru9I酶切组合扩增的条带数要多于PstI、TaqI酶切组合扩增的条带数,但后者的多态性要高于前者。本研究为采用该技术对哲罗鱼基因组的研究提供了参考。  相似文献   

10.
以唇(鱼骨)为实验材料,通过对扩增片段长度多态性(AFLP)的几个关键技术参数进行研究,建立适合于唇(鱼骨)的AFLP反应体系.结果显示-通过DNA的质量、酶的浓度、酶切时间及扩增时稀释倍数等条件的调整,EcoRI、Tru9I酶切组合和PstI、TaqI酶切组合均能够获得清晰可靠的图谱,二者的结果比较显示,EcoRI、Tru9I酶切组合扩增结果的多态性要稍差于PstI、TaqI酶切组合的扩增结果,为利用AFLP标记对唇(鱼骨)基因组进行深入研究打下基础.  相似文献   

11.
将MDVGA株BamHI基因文库中含I3片段的质粒pACYC184和K3片段的质粒pHC79扩增,用碱裂解法抽提质粒后,利用相应的限制性内切酶切出目的基因片段,连接到合适的载体上,构建了完整的MDVB抗原基因克隆载体。通过内切酶分析,地高辛(DIG)-探针原位杂交,DNA序列预测,确认克隆的B抗原基因正确。  相似文献   

12.
在综合现有DNA提取方法和试验材料本身性质的基础上,对糯玉米基因组DNA提取方法进行了优化和改进,筛选出一种适合于糯玉米特异序列扩增多态性(sequence-specific amplification polymorphisms,SSAP)分析的高纯度DNA提取方法。所得DNA的A260/280在1.8~2.0间,A260/230大于2.0,琼脂糖凝胶电泳检测结果也证明该方法获得的DNA完整、无降解现象。通过对不同酶切组合、引物组合等因素的对比试验,初步建立了适用于糯玉米SSAP分析的方法体系,得到了一组条带清晰和多态性丰富的图谱。  相似文献   

13.
A physical map of the Escherichia coli K12 genome   总被引:125,自引:0,他引:125  
A physical map of a genome is the structure of its DNA. Construction of such a map is a first step in the complete characterization of that DNA. The restriction endonuclease Not I cuts the genome of Escherichia coli K12 into 22 DNA fragments ranging from 20 kilobases (20,000 base pairs) to 1000 kilobases. These can be separated by pulsed field gel electrophoresis. The order of the fragments in the genome was determined from available E. coli genetic information and analysis of partial digest patterns. The resulting ordered set of fragments is a macrorestriction map. This map facilitates genetic and molecular studies on E. coli, and its construction serves as a model for further endeavors on larger genomes.  相似文献   

14.
猪流感病毒NP基因的克隆及杆状病毒转移载体的构建   总被引:1,自引:1,他引:0  
本研究通过RT-PCR扩增了猪流感病毒A/ Swine/ Inner Mongolia/ 547/ 01 (H3N2)的NP基因,并将其克隆入pMD 18-T载体.重组pMD 18-T经Sal I 和 EcoR I酶切后得到的NP基因插入pMelBacB载体的Sal I/EcoRI位点.PCR和限制性内切酶分析鉴定表明成功构建了pMelBacB-NP转移载体.这为开发NP诊断抗原和亚单位疫苗奠定了基础.  相似文献   

15.
根据马立克氏病病毒 (MDV)国际标准株 GA的基因序列 ,设计合成一对引物。通过 PCR技术 ,分别以弱毒疫苗株 81 4和广西分离强毒株 G2 株基因组为模板 ,扩增获得预期大小的 PCR产物 ,将 PCR产物和 p UC1 8分别经 Bam H 和 Sma 酶切后 ,连接、转化 TG1 ,筛选获得了 81 4 -g I和 G2 -g I的基因克隆 ,将所得克隆进行测序 ,并将它们与已发表的MDV其他毒株 g I的序列进行比较分析 ,获得了它们的同源性 ,绘制了系统发生树  相似文献   

16.
家蚕卵线粒体DNA限制性内切酶长度多态性研究   总被引:9,自引:0,他引:9  
利用29种限制性内切酶对34个不同品种家蚕卵mt DNA进行酶切分析,发现一化、二化品种与多化品种的HaeⅢ酶切图谱有差异,但不同的地理品种间没有出现酶切多态性现象。另外,一些家蚕品种的受精卵和非受精卵mt DNA在Bgl I和Pst I酶切焉,呈现不同的酶切带型。同时,绘制了较精确的家蚕mt DNA限制性内切酶酶切图谱。  相似文献   

17.
上海地区实验用兔线粒体DNA-RFLP分析   总被引:2,自引:1,他引:1  
提取3个品种实验用兔肝组织中的线粒体DNA,并用ApaI等21种限制性内切酶进行消化。分析上海地区实验用兔mtDNA的多态性。酶切产物经琼脂糖凝胶电泳检测,共检出8种不同的限制性单倍型,少数个体出现的差异,可能来源于几个位点发生偶然突变,但不同兔群的限制性无规律性。结果表明上海地区实验用兔群体mtDNA的遗传多样性贫乏,遗传结构单一,提示所研究的兔种可能有共同祖先,或人工饲养繁殖出现血缘杂交现象。  相似文献   

18.
细菌分子鉴定技术的研究进展   总被引:1,自引:0,他引:1  
细菌的分子鉴定方法随着分子生物学的不断发展而得到了长足的进步,建立了一系列完整而系统的鉴定方法,如DNA-DNA杂交、rDNA指纹图谱、质粒图谱、16S rDNA全序列测定、限制性核酸内切酶分析、脉冲场凝胶电泳分析等方法。介绍了在这些分子鉴定方法基础上产生的新的或有针对性的细菌分子鉴定技术及其研究进展。  相似文献   

19.
人胰岛素基因的克隆及其乳腺特异性表达载体的构建   总被引:1,自引:0,他引:1  
郑艳玲  彭树英  张涌 《安徽农业科学》2006,34(16):3901-3902,3940
从人血中提取人基因组DNA,根据GenBank登陆的人胰岛素基因序列设计引物,通过longPCR技术克隆了人胰岛素基因,并将该基因克隆入pMD18T载体构建pMI,将pMI和质粒pBEBT通过酶切连接构建成重组质粒pBEBI。结果成功扩出长为1.6kb的人胰岛素基因并构建了乳腺特异性表达载体。  相似文献   

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