HPLC法测定不同年龄曼地亚红豆杉根中紫杉醇的含量

[目的]建立曼地亚红豆杉根中紫杉醇含量的HPLC测定方法,揭示不同年龄曼地亚红豆杉根中紫杉醇含量的动态变化。[方法]采用高效液相色谱法,Phenomenex Luna C18色谱柱（250.0mm×4.6mm,5μm）,流动相为甲醇-乙腈-水,流速为1.0ml/min,检测波长为227nm,柱温为40℃,进样量为20μl。[结果]紫杉醇在此色谱条件下分离良好,其质量浓度与峰面积在1.00～32.00mg/L（r=0.9999）呈良好的线性关系,平均加样回收率为100.3%,RSD值为1.6%。不同年龄曼地亚红豆杉根中紫杉醇含量差异较大。[结论]首次建立了高效液相色谱法测定曼地亚红豆杉根中紫杉醇含量的方法,该方法准确可靠,可用于其根中紫杉醇的含量检测。     

绿茶中咖啡因含量测定研究

[目的]建立绿茶中咖啡因含量测定的方法。[方法]采用高效液相色谱法测定绿茶中咖啡因的含量,以C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-水-冰醋酸-乙二胺四乙酸(15.0∶82.8∶2.0∶0.2)为流动相,流速1.0 ml/min,检测波长278 nm。[结果]绿茶中咖啡因在0.64～3.20μg范围内线性关系良好,平均回收率为100.49%(RSD=1.12%)。[结论]该方法简便、准确、重现性好,可作为绿茶中咖啡因含量的测定方法。     

HPLC-UV法测定黄芪干燥根中黄芪甲苷的含量

[目的]建立黄芪干根中HPLC-UV法测定黄芪甲苷的方法,同时比较蒙古黄芪、野生黄芪和膜荚黄芪3种不同来源样本的黄芪甲苷含量。[方法]采用HPLC-UV法,色谱柱为Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm),流动相为乙腈∶水(32∶68),流速1.0 ml/min,检测波长203 nm。[结果]黄芪甲苷在0.05~0.50 mg/ml范围内线性关系良好(r=0.999),平均回收率为98.216%(RSD=2.85%);不同来源黄芪甲苷含量比较结果为野生膜荚≈蒙古。[结论]建立的HPLC-UV法测定黄芪甲苷含量相对稳定,方法简便,为今后黄芪干根中黄芪甲苷含量的测定提供了方法参考。     

反相HPLC法测定重庆不同产地野生天麻和栽培天麻的天麻素含量

[目的]比较重庆不同产地野生天麻与栽培天麻的质量。[方法]天麻经超声提取后以反相高效液相色谱法测定天麻素的含量。流动相为乙腈-浓度0.05%磷酸溶液(3∶97,V/V),色谱柱为DiamonsilC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);检测波长为220 nm;流速为1ml/min,柱温为30℃。[结果]不同产地样品的天麻素含量存在较大差异;同产地的栽培天麻与野生天麻的天麻素含量也存在较大差异;野生天麻的天麻素含量普遍高于栽培天麻。其中以城口栽培的天麻药材和云阳野生药材中天麻素的含量较高;巫山栽培的天麻药材中天麻素的含量最低。[结论]重庆城口县野生和栽培天麻中天麻素的含量远远高于国家标准,因此在该地区建立符合国家GAP要求的天麻种植基地来满足市场的需求是完全可行的。     

HPLC测定甘草提取物中甘草酸的含量

[目的]建立甘草提取物中甘草酸的含量测定方法。[方法]采用高效液相色谱法测定甘草提取物中甘草酸的含量。使用C18柱,以甲醇-0.2 mol/L醋酸铵溶液-冰醋酸(61∶39∶1)为流动相,检测波长为250 nm。[结果]线性关系良好,平均回收率为99.52%,RSD为2.4%。[结论]该方法精密度高,分离度良好,可用甘草提取物的质量控制。     

红豆杉属植物中紫杉烷类物质含量比较

建立5种紫杉烷类化合物的含量检测方法,并分析研究5种红豆杉(西藏红豆杉、云南红豆杉、南方红豆杉、东北红豆杉、曼地亚红豆杉)中5种紫杉烷类化合物含量差异,为红豆杉种源选育及野生资源保护利用提供理论依据。采用两种流动相的高效液相色谱检测10-脱乙酰基巴卡亭Ⅲ(10-DAB)、7-表-10-脱乙酰基紫杉醇(10-DAT)、巴卡亭Ⅲ、三尖杉宁碱的含量和紫杉醇的含量。西藏红豆杉、云南红豆杉、南方红豆杉、东北红豆杉、曼地亚红豆杉枝叶中紫杉醇含量分别为0. 113 3、0. 522 8、0. 686 2、1. 670 6、1. 199 4 mg·g-1,10-DAB含量分别为0. 711 1、0. 821 3、0. 739 2、0. 770 9、0. 339 2 mg·g-1,10-DAT含量分别为0. 083 3、0. 290 8、0. 192 3、0. 352 6、0. 306 0 mg·g-1,巴卡亭Ⅲ含量分别为0. 190 9、0. 828 7、0. 442 5、0. 771 2、0. 289 7 mg·g-1,三尖杉宁碱含量分别为0. 186 0、0. 183 2、0. 235 3、0. 837 5、0. 530 4 mg·g-1。紫杉醇和三尖杉宁碱含量以东北红豆杉最高,曼地亚红豆杉次之; 10-DAB含量以曼地亚红豆杉最低,不到其他品种的一半;巴卡亭Ⅲ含量以云南红豆杉最高,东北红豆杉略低; 10-DAT含量普遍较低。5种紫杉烷类化合物总含量以东北红豆杉最高,曼地亚红豆杉、云南红豆杉和南方红豆杉含量相近,西藏红豆杉最低。     

河南地区红豆杉中紫杉烷类化合物含量分析

采用高效液相色谱法测定河南地区红豆杉不同产地、品种、部位紫杉烷类化合物含量,为河南省红豆杉人工林培育奠定基础。结果表明:信阳与开封栽植的加拿大曼地亚红豆杉中,紫杉醇含量无显著差异;10-DAB在信阳加拿大曼地亚红豆杉针叶中含量较高,为170.37μg/g;巴卡亭Ⅲ在信阳加拿大曼地亚红豆杉枝中含量较高,为60.95μg/g。开封种植的5种红豆杉中,东北红豆杉紫杉烷类化合物总含量较高,针叶中为456.61μg/g,枝中为165.43μg/g。可在信阳推广栽培加拿大曼地亚红豆杉,在开封建立东北红豆杉枝叶药用采集基地,综合利用可再生资源。     

紫杉醇提取方法和曼地亚红豆杉HPLC指纹图谱的研究

为考察不同提取方法和HPLC检测方法对紫杉醇HPLC检测图谱的影响,采用4种不同提取方法对曼地亚红豆杉枝叶中的紫杉醇进行粗提,并通过3种不同的HPLC检测方法对粗提物进行了检测。通过HPLC检测图谱的比较,确立了曼地亚红豆杉枝叶中紫杉醇的粗提方法和HPLC检测方法。色谱条件：色谱柱为Curosil－PFP分析柱（250 mm ×4．6 mm,5μm）;检测波长为227 nm;流动相为乙腈－水溶液梯度洗脱;流速2．6 mL／min;分析时间70 min;柱温为30℃。     

高效液相色谱法测定润燥止痒胶囊中苦参碱的含量

[目的]建立高效液相色谱法测定润燥止痒胶囊中苦参碱的含量。[方法]采用Diamonsil钻石C18柱(250.0mm×4.6mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸溶液洗脱(甲醇∶水=50∶50),流速1ml/min,检测波长220nm。[结果]样品中苦参碱平均回收率为98.72%;线性范围:0.2～1.0μg;r=0.9996。[结论]该方法准确,回收率和重现性好,可用于润燥止痒胶囊的质量控制。     

RP-HPLC法测定颈复康颗粒中葛根素的含量

[目的]采用反相高效液相色谱法测定颈复康颗粒中葛根素的含量。[方法]色谱柱为Kromasil 100-5C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为无水甲醇-水-磷酸(20∶80∶0.2,V/V/V),流速为1.0 ml/min;检测波长为250 nm。[结果]阴性对照无干扰;计算回归方程为Y=4 233 801X-34 587,R为0.999 9(n=6)。结果表明,在0.063～1.254μg/ml浓度范围内,葛根素浓度与峰面积呈良好的线性关系,R=0.999 9;加样回收率为101.8%,RSD为1.09%(n=9)。[结论]该方法简便、准确、专属性强,可用于颈复康颗粒中葛根素的含量测定。     

东北红豆杉RAPD反应体系的优化（摘要）（英文）

[目的]研究东北红豆杉RAPD反应体系的优化条件。[方法]以东北红豆杉叶片为材料,用改进CTAB法提取DNA,分别从模板DNA浓度（10、20、30、40、50 ng）、引物浓度（5、10、15、20、25 pmol/μl）、dNTP浓度（0.1、0.15、0.2、0.25、0.3 mmol/L）,TaqDNA聚合酶量（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 U）及镁离子浓度（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mmol/L）5个方面对东北红豆杉RAPD扩增效果的影响进行分析。[结果]用改良的CTAB法提取红豆杉基因组DNA,所得DNA质量较好,无杂质存在,条带整齐一致,而且能够取得比较理想的RAPD扩增效果。通过各因子的比较分析,建立了东北红豆杉RAPD优化体系：20μl PCR反应总体积中含模板DNA10 ng,Mg2 ＋2.0 mmol/L,引物15pmol/μl,dNTP0.2 mmol/L,TaqDNA聚合酶1.0 U,10×buffer缓冲液2μl,以双蒸水补充至20μl。[结论]为进一步探索与东北红豆杉性别鉴定相关的研究提供技术支持。     

基于高紫杉醇质量分数的东北红豆杉优良种源选育

从东北红豆杉(Taxus cuspidata Sieb.et Zucc)国内主要分布区选取8个种源,分别在3个地点开展了种源试验,测定了12年生东北红豆杉根皮紫杉醇质量分数。结果表明,东北红豆杉不同种源间紫杉醇质量分数差异极显著(P<0.01),大兴沟种源紫杉醇质量分数最高(22.767μg/g),是最低种源(和龙)的1.69倍,因此选育出高紫杉醇质量分数的东北红豆杉优良种源——大兴沟种源。各种源紫杉醇质量分数与地点间存在显著的交互作用(P<0.01),说明某一种源紫杉醇质量分数会因立地条件和气候不同而变化。东北红豆杉优良种源适宜在吉林省中东部地区种植,在空气湿润、pH值小于7.0的沙壤土上生长良好。可采用播种和扦插方式繁殖苗木,营林方式以林下造林较好,以3～5株/穴块状造林方式最佳。     

东北红豆杉RAPD反应体系的优化

[目的]研究东北红豆杉RAPD反应体系的优化条件。[方法]以东北红豆杉叶片为材料,用改进CTAB法提取DNA,分别从模板DNA浓度、引物浓度、dNTP浓度,Taq DNA聚合酶量及镁离子浓度5个方面对东北红豆杉RAPD扩增效果的影响进行分析。[结果]通过各因子的比较分析,建立了东北红豆杉RAPD优化体系：20μl PCR反应总体积中含模板DNA 10 ng,Mg^2＋2.0 mmol/L,引物15pmolμ/l,dNTPs 0.2 mmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U,10×buffer缓冲液2μl,以双蒸水补充至20μl。[结论]为进一步探索与东北红豆杉性别鉴定相关的研究提供技术支持。     

日本产红豆杉化学成分及细胞毒活性研究

[目的]对日本产红豆杉枝叶中的化学成分进行研究,对分离得到的化合物进行毒活性测试。[方法]采用硅胶柱层析及高压液相色谱技术进行分离纯化,利用理化常数和波谱数据鉴定化学结构。[结果]从红豆杉枝叶的氯仿层萃取物中分离并鉴定了4个化合物,分别为7-epi-taxol、7-epi-cepharomannine、decinnam oyltaxinine J、2-deacetoxydecinnam oyltaxinine J,前2个化合物显示出较强的抗癌活性。[结论]4个化合物均为首次从日本产红豆杉中分离得到。     

中国境内东北红豆杉天然群体紫杉醇含量变异规律

利用高效液相色谱仪（HPLC）检测了中国境内东北红豆杉天然群体和同一群体内不同单株的紫杉醇含量,以及不同树龄或不同季节的紫杉醇含量变化。 结果表明,不同群体之间紫杉醇含量存在显著差异,群体间差异高达2.7倍; 群体内个体间紫杉醇含量的变异与群体间相当,同一群体（汪清）内不同单株之间紫杉醇含量差异高达4.3倍. 说明紫杉醇含量变异来自于群体间和群体内,其变异组成是群体间为84.6%,个体间为15.0%, 并且东北红豆杉紫杉醇含量的广义遗传力(H[[sup]]2[[/sup]])为82%。 因此,群体选择或单株选择可望获得较大的遗传增益。 同时,紫杉醇含量随着树龄的增大而升高;在生长旺季植株内紫杉醇含量较低,进入休眠期含量较高。 紫杉醇含量与生长量、积温、无霜期、降雨呈负相关（－0.646 8、－0.479 6、－0.240 5、－0.119 2）,与针叶长度显著正相关（0.717 7）,与经度和纬度正相关（0.277 8和0.332 1）。 随着纬度升高,生长量降低,紫杉醇含量呈现增加的趋势。      

IBA处理对东北红豆杉嫩枝扦插的影响

[目的]开展东北红豆杉扦插繁育试验,为实现其人工栽培提供技术支持。[方法]以清水处理为对照,研究IBA对东北红豆杉嫩枝扦插生根的影响。[结果]经过IBA处理的插穗生根效果均高于对照,其中以IBA浓度为150mg／L处理16h效果最好,生根率达到72％,生根效果指数为2．245。[结论]在吲哚丁酸作用卞,东北红豆杉生根率明显改善。采用生根效果指数指标能综合反映扦插苗的质量。     

一株产巴卡亭Ⅲ红豆杉内生真菌的分离与鉴定

[目的]分离鉴定产巴卡亭Ⅲ红豆杉内生真菌。[方法]采用常规分离方法,从东北红豆杉（TaxuscuspidataSieb.etZucc.）树皮中分离并筛选内生真菌35株;通过高效液相色谱（HPLC）技术对菌株发酵物进行检测,并结合选择性离子质谱（MS）进行确认,从中获得1株能产紫杉醇前体物质巴卡亭Ⅲ的菌株Z-1;利用ITSrDNA通用引物对产紫杉烷类物质的内生真菌进行分子生物学鉴定,并结合菌落特征、孢子与分生孢子梗的形态特征进行分类鉴定。[结果]在未经诱导的情况下,Z-1产巴卡亭Ⅲ的量约为39μg/L;形态和分子鉴定分析判定Z-1属于木霉属（Trichoderma sp.）真菌。[结论]该研究可为植物内生真菌产紫杉烷类化合物的种类多样性和产紫杉烷类内生真菌的生物多样性提供依据。     

东北矮紫杉细胞悬浮培养中褐化问题的研究(英文)

[目的]研究东北矮紫杉悬浮培养细胞褐化现象,为紫衫细胞悬浮培养提供指导方法。[方法]以东北矮紫杉愈伤组织为试验材料,探讨不同培养基、N/P 比、pH、培养转速、光照及强度等因素对矮紫杉细胞悬浮培养褐化的影响。[结果]将无褐化的愈伤组织转接到pH7.0的2MB5培养基中,于22℃、1500lx光强、90r/min 转速的条件下光照培养24h,细胞褐化现象能得到明显抑制。[结论]该研究结果为紫衫细胞悬浮培养奠定了基础,对于大规模工业化生产紫杉醇具有重要意义。     

高效液相色谱法测定双黄连栓中金银花的绿原酸含量

[目的]建立双黄连栓中绿原酸含量的HPLC测定方法。[方法]色谱柱为DiamonsilC18 5μm（250mm×4．6mm）色谱柱，流动相为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（15．0：85．0：1．0：0．3），检测波长为324nm，流速为1．2ml／min，进样量为20μl，柱温25℃，在该条件下测定双黄连栓中金银花的绿原酸含量。[结果]试验条件下，绿原酸在0．2～0．6μg范围内线性关系良好，r=0．9987；样品在5h内稳定；平均回收率99．6％，RSD=0．8％（n=6）。[结论]该方法简便、快速、准确，可用于双黄连栓的含量测定及质量控制。