丝克高粱rDNA ITS区的RFLP分析

对检疫性杂草丝克高粱及其5个同属近似种假高粱、明福1号、拟高粱、苏丹草和黑高粱的rDNA内转录间隔区(ITS)进行PCR扩增及测序,并利用限制性内切酶XceⅠ对这些近似种的PCR产物进行酶切分析.结果表明:各个种间均有XceⅠ酶切位点,其中假高粱、明福1号、拟高粱、苏丹草及黑高粱5个种的酶切图谱完全一致,而丝克高粱的酶切图谱与其5个同属近似种的酶切图谱不同.假高粱、明福1号、拟高粱、苏丹草及黑高粱的rDNA PCR扩增产物可以切出4条带,大小约为670、530、190、150 bp;而丝克高粱只能切出2条带,大小约为670、190 bp,这与其5个同属近似种在rDNA ITS区有2个XceⅠ酶切位点,而丝克高粱只有1个酶切位点的结果相一致.因此,利用XceⅠ就可以把丝克高粱与其5个近似种区分开.     

高粱DNA的提取纯化及抗丝黑穗病基因的初步分析

[目的]为快速选育抗病高粱新品种提供理论依据。[方法]采用CTAB法提取高粱基因组DNA,运用RAPD分子标记技术对高粱的抗丝黑穗病基因进行初步分析。[结果]琼脂糖凝胶电泳检测结果表明,采用CTAB法提取高粱叶片DNA有较好的提取效果。通过对70个随机引物进行筛选,获得了34个具有多态性扩增谱带的RAPD引物,确定为适宜引物。34个适宜引物共扩增出107条谱带,平均每个引物扩增出3.1条谱带,使高粱基因组呈现出1种多态性。[结论]高粱抗丝黑穗病基因的RAPD扩增谱带集中分布在600～3 000 bp。     

3个高粱品种及其F1的过氧化物酶同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)方法,对分别以栽培高粱和甜高粱为母本、以拟高粱为父本进行杂交获得的F1代及其双亲的过氧化物酶同工酶进行分析。结果表明:栽培高粱和甜高粱酶谱类型相近,仅个别酶带活性强弱存在差异,所以两者的亲缘关系可能较近,POD不能作为区分鉴别它们的依据;栽培高粱和甜高粱酶谱比拟高粱少酶带POD-1,与拟高粱的亲缘关系可能较远,酶带POD-1可在一定程度上反映出拟高粱与栽培高粱和甜高粱的区别。杂交F1代的酶谱与父本较相近,既表达出互补双亲酶带的"互补带"POD-1,又表达新的"杂合带"POD-4,但未表达出双亲共有酶带POD-6,因此,可为选育杂交新材料提供依据。     

外源DNA导入小麦变异后代的抗旱耐盐性初步鉴定及RAPD验证

通过对导人外源DNA的小麦变异后代进行抗旱性和耐盐性的鉴定，筛选到四个抗旱耐盐性较好的小麦新品系。引物S317的RAPD验证结果表明，四个变异后代均有两条异于受体的特异谱带，其分子量分别为650bp、680bp。其中分子量为650bp的谱带在四个变异后代和供体中均具有，而受体却没有。这可能是玉米基因组中的DNA片段整合到受体的基因组中，导致受体中与抗性有关的基因结构发生了改变，从而提高了受体的抗旱耐盐能力。室内考种结果表明，四个新品系的部分农艺性状优于受体。     

菜豆种质资源的ISSR分析及特异性标记的筛选

采用ISSR分子标记技术对吉林省各科研院所近年审定和主栽的36份菜豆种质的遗传多样性进行研究。从100个引物中筛选出可扩增出清晰稳定条带、重复性好的20个引物对36个菜豆品种的基因组DNA进行PCR扩增。采用NTSYSpc2.10软件计算遗传相似系数,利用UPGMA方法进行聚类分析。结果表明:20个引物共扩增出87条带,其中多态性谱带76条,多态性比率为87.36%,多态性较高。36个品种间遗传相似系数在0.65~0.89之间。利用UPGMA法可将供试菜豆分为4大类,聚类结果显示,菜豆种质资源间的亲缘关系与来源地的相关性较为紧密,20号菜豆与其他品种的遗传距离相对较远。引物840为20号品种的特异性标记,在1 100 bp处多出一条谱带;引物861为27号品种的特异性标记,在1 000 bp处有一条谱带缺失;引物846为31号品种的特异性标记,在1 050 bp处有一条谱带缺失。3个引物针对20、27、31号品种的特异性标记可将3个品种快速从所有供试的36个菜豆品种中鉴别出来。     

利用RAPD技术对满天星试管苗玻璃化发生原因的初步探讨

用200条随机引物对满天星试管正常苗和玻璃苗进行了RAPD分析研究,结果表明:200条随机引物中,有23条引物的扩增产物DNA片段表现出明显的多态性,其中每个引物对不同供试样品扩增出现的DNA谱带数少则5条,多达13条,分布在200～2 000 bp.不同引物扩增出的DNA片段谱带不同,差异较大,选出的23条引物对14个供试样品共扩增出206条DNA谱带,经聚类分析,14个供试样品可分为2类或4类,可直观准确地区分满天星试管正常苗和玻璃苗之间的差异.     

应用ISSR分析油茶无性系的遗传多样性

以23个油茶无性系叶片的DNA作为实验材料,从60个随机引物中筛选出10个最优引物,并扩增出102条谱带,其中多态性谱带70条,多态性比率为68.6%,谱带大小为200～2000bp。Shannon遗传信息指数为0.4793,平均观察等位基因数和有效等位基因数分别为2.000和1.519;遗传距离为0.1542～0.6931,油茶无性系之间具有较高多态性。运用平均聚类法分析23个油茶无性系的亲缘关系及多样性,在遗传距离为0.392时,23个油茶无性系聚为4类:湘林156、湘林210和湘林4号等18个油茶无性系为第1类;岑软2号和湘林97号为第2类;湘林34号和湘林11为第3类;湘林81号单独为1类。其中,湘林4号与湘林29的亲缘关系最近,湘林34与湘林78的亲缘关系最远。在此基础上,分析了油茶ISSR聚类结果与油茶农艺学性状的关系,从而为油茶优良无性系甄别、亲缘关系分析以及种质资源利用,在分子水平上积累了有效证据。     

辣椒种质资源的遗传多样性分析

利用RAPD分子标记技术对90份辣椒种质资源遗传多样性进行分析,从200个RAPD引物中筛选出10个引物分别对供试材料的DNA进行扩增,共扩增出70个位点,其中多态性谱带38条,多态性程度为54.3％.平均每个引物产生7条多态性谱带,每个引物可扩增出4～9条,谱带大小为100～2000 bp.对RAPD结果进行聚类分析...     

检疫性杂草假高粱与近缘植物种子的波谱鉴别方法

为便于出入境检验检疫部门正确、快速地鉴别出假高粱[Sorghum halepense(L.)Pers]及其近缘种,以石油醚作为溶剂,获取了假高粱、高粱[Sorghum bicolor(L.)Moench]、黑高粱(Sorghum almum Parodi)和苏丹草[Sorghum sudanense(Piper)Stapf]种子12份样品的浸提液,应用Unicam UV540型紫外分光光度计,将狭缝设置成1nm,扫描速率0.5s,获得了200~400nm波长范围内每种植物种子在200个紫外波段上的吸光度。借助于SPSS 16.0软件,应用单因素方差分析,过滤掉差异性小的波段,明确了假高粱与近缘植物种子间存在显著和极显著差异的63个波段。对这63个波段上的吸光度数据应用主成分分析进一步筛选出了信息负荷量大的18个波段。以这18个波段上的吸光度数据为指标,以12个样品为对象,做出了它们的紫外光谱图、聚类图和二维排序图。上述方法能较好地将假高粱与其他3种近缘杂草种子鉴别开。为比较通过单因素方差分析和主成分分析后筛选的光谱数据对鉴别假高粱与其他3种近缘植物种子的效果,直接基于200个波长上的吸光度数据,应用相同的软件和参数,也做出了假高粱、高粱、黑高粱和苏丹草12个样品的紫外光谱图、聚类图和二维排序图,说明筛选出的这些敏感波段能够更简便、有效地识别假高粱和其近缘植物种子,为今后应用紫外光谱法鉴别假高粱与同属近缘的其他3种植物种子提供了技术参数。     

福建笋子芥种质资源遗传多样性的RAPD分析

从200个随机引物中筛选出10个引物,对11份笋子芥材料进行RAPD分析,并对笋子芥遗传多样性和分类进行研究.结果表明:10个引物共扩增出93个位点,其中多态性谱带65条,多态性程度为69.9%;平均每个引物产生9.3条多态性谱带,每个引物可扩增出7-13条,谱带大小为100-2000 bp.聚类分析结果表明,遗传距离为0.38时,11份笋子芥可聚成四大类群.     

三种暖季型草坪草基因组DNA的提取方法

采用改进CTAB法分别提取狗牙根(Cynodon dactylon)、结缕草(Zoysia spp.)、假俭草(Eremorchloa ophiuroides)3种暖季型草坪草基因组DNA.得到的DNA经核酸蛋白含量测定仪测得A260/A280值处于1.74～1.98之间、A260/A230集中处于1.74～1.99,经琼脂糖凝胶电泳检测各样品具有一条明亮主带并无拖尾现象.表明改进CTAB法提取得到的DNA完整性好,纯度高,适用于分子生物学的研究.     

利用PCR和限制性酶切技术鉴别3种鳗鱼

根据日本鳗、欧洲鳗和美洲鳗3种鳗鱼的16S rRNA基因序列,设计特异性引物,进行16SrRNA基因的PCR扩增,然后对PCR产物进行ApaI酶切反应.结果显示,日本鳗和欧洲鳗的PCR产物均出现211 bp的特异性扩增条带,美洲鳗的PCR产物出现两条DNA条带;日本鳗的PCR产物经ApaI酶切产生大小为135 bp和76 bp的两条条带,而欧洲鳗的PCR产物经ApaI酶切没有变化.因此,利用该方法可鉴别出日本鳗、欧洲鳗和美洲鳗等3种鳗鱼.     

福建省12个地方解放钟枇杷的RAPD分析

采用Sangon 13个长度为10 bp的引物对福建省12个地方的解放钟枇杷进行了RAPD分析,在12个样品中共扩增出64条带,不同引物获得的扩增带1-8条,S60最少,只有1条;S80最多,有8条;平均4.85条。其中11条引物对12个地方解放钟枇杷RAPD扩增结果都相同,而引物S66、S80对12个不同地方的解放钟枇杷进行RAPD扩增,结果表明3号在850bp、9号在250 bp处缺失1条扩增带,其余62条带都相同。这在DNA水平上证实了解放钟枇杷在遗传上保持较高的稳定性,但随着时间、环境的变化也会产生一些基因变异。     

检疫口岸假高粱检出率分析及其防治

检疫杂草假高粱可随进口粮食从国外传入我国 ,并造成入侵。对 2 0 0 0～ 2 0 0 2年张家港假高粱的检疫资料进行了分析 ,结果表明 :进口粮食中夹带假高粱非常普遍 ,假高粱的检出率虽在不同的进口地区间有一定的差异 ,但是同一地区在年度间、季节间以及批次间的变化不显著。提出了目前应采取的防除措施 ,分别为人工防除、化学防除、生物防除 ;并提出对进口的夹带假高粱的粮食要实行登记监测。最后提出了提高假高粱检出率应注意的有关事项。     

志贺氏菌RAPD鉴定方法的建立

[目的]为志贺氏菌食源性疾病的流行病学溯源和疫情控制提供理论依据。[方法]利用5个随机引物对4种不同来源的志贺氏菌进行RAPD扩增,并对得到的扩增图谱进行聚类分析。[结果]5个随机引物中,引物S3、S5表现出较好的多态性。在引物S5的扩增图谱中,志贺氏菌属中各菌均有1条600 bp左右和1条1 000 bp左右的共同谱带,而利用该引物扩增其他属细菌,扩增谱带很少或没有。这说明引物S5对志贺氏菌属细菌是特异性的。根据引物5的聚类分析结果,可将8株志贺氏菌分成4个类群。除宋内氏志贺氏菌外,其他3种6株菌间的相似系数均为1.00,与传统的血清型分型结果完全一致。[结论]采用引物S5的RAPD反应可用于志贺氏菌的快速检测。     

芥菜遗传多样性的RAPD分析

随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）是一种新的分子标记技术,利用ＲＡＰＤ标记对芥菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｊｕｎｃｅａ Ｃｏｓｓａ）１６个变种的遗传多样性进行了分析,从６０个１０ｂｐ随机引５物中筛选出２７个有效的,这２７个有效引物共扩增出３３６条ＤＮＡ带,其中２７５条为多态性带,占总数的８１．８５％,平均每个引物扩增出的ＤＮＡ带数为１２．４４,不同引物扩增出各自不同的ＤＮＡ指纹图谱,大部分图谱均有特征或特     

黑麦重复家族成员pAW161(348 bp)的DNA序列分析

黑麦亚端部特异序列pAW161是黑麦350~480 bp重复家族的一个成员。通过pAW161设计的特异引物获得的PCR扩增片段,已成功用于小麦外源转移材料的鉴定。在本研究中,用该引物从供试的分属4个种共7份黑麦材料中都扩增出一条清楚明亮的特异带纹,分别对扩增片段回收、克隆、测序。结果表明,它们的长度都为348bp,该序列简称为pAW161(348 bp)。不同黑麦比较发现,该序列高度保守,同源性达到99.39%,可作为黑麦的亚端部特异序列pAW161的分子标记。该序列存在着6个SNP位点,都位于此序列的3’端的156 bp序列中,而5’端的192 bp的序列无变异;SNP变化在供试材料中不存在物种特异性。从结构上看,pAW161(348 bp)是重复家族pSc200的380 bp基本重复单元的两个头-尾串联重复序列的中间一段。     

枣疯病植原体的分子检测与同源性鉴定

【目的】采用植原体16S通用引物建立枣疯病植原体PCR检测体系。【方法】采用植原体16S rDNA通用引物R16mF1/R16mR1,对陕西和山西具有枣疯病的枣树植株总DNA进行PCR扩增,获得了相关的枣疯病植原体序列。采用DNAMAN软件分析其同源性,绘制系统进化树。运用pDRAW32软件对17种具有16S rDNA分组的典型的限制性内切酶进行计算机模拟RFLP,确定枣疯病植原体同源性关系。【结果】从陕西和山西的枣疯病的植株中,分别得到1 433 bp和1 432 bp的条带,与已报道的枣疯病植原体比较,同源性达到99%以上,而与其他植物的植原体16S rDNA同源性多低于93%,并且与16S rDNA V-B组的遗传距离最近。pDRAW32软件模拟RFLP结果表明它们和已报道的JWB的RFLP图谱相似。【结论】枣疯病植原体归属于16SrDNA V-B,为枣疯病植原体PCR检测体系提供了理论基础。RFLP分析进一步验证了枣疯病植原体属于16SrDNA V-B,具有随地域变异性较小的特性,这将有利于不同地区枣疯病检测技术的建立。     

灵武长枣采后病原菌的分离及天然抗菌物质的筛选

以宁夏灵武所产灵武长枣为材料,分离并鉴定贮藏过程中引起腐烂病害的主要病原真菌,同时采用滤纸片扩散法,用22种植物提取液对病原菌进行抑菌试验,以筛选对病原菌有抑制作用的天然物质。结果表明,从贮藏中的灵武长枣上分离、鉴定出微孢毛霉(Mucor microsporus Namysl)、粉红聚端孢(Trichoderma roseum(Pers.)Link)、青霉属(Penicillium sp.)和链格孢(Alternaria alternata(Fr.)Keissl)4种病原真菌。对微孢毛霉有抑制作用的提取液有25 g/L的连翘乙醇提取液、50 g/L的高良姜水提取液5、0 g/L的大黄水提取液和100 g/L的桑叶水提取液;对粉红聚端孢有抑制作用的有12.5 g/L丁香乙醇提取液、50 g/L高良姜水提取液和100 g/L百部乙醇提取液;对青霉属有抑制作用的有6.25 g/L丁香乙醇提取液、25 g/L连翘乙醇提取液5、0 g/L按叶乙醇提取液和100 g/L广霍香水提取液;对链格孢菌有抑制作用的有50 g/L连翘乙醇提取液和100 g/L黄连水提取液。