影响大白菜游离小孢子培养若干因素的研究

以太原地区大白菜主栽品种的F1"科萌夏秋王"、"科萌78"、"德阳01"等30个品种为试验材料,采用游离小孢子培养方法,研究了基因型、蔗糖、活性炭、细胞分裂素6-BA、生长素NAA、高温热激、氨基酸对小孢子胚胎发生的影响,培养基对子叶期胚分化的影响。研究结果表明:30个品种大白菜在植物组织培养基NLN-13液体培养基中有15个诱导出胚;添加不同浓度蔗糖以NLN-13培养效果最好;合适的活性炭浓度可明显提高小孢子的出胚率;NLN液体培养基中添加NAA和6-BA对小孢子出胚率影响不大,浓度超过一定剂量时出胚率反而降低;高温热激在12~48 h范围内小孢子出胚率差异不大,在此范围以外小孢子出胚率明显降低;添加一定量的氨基酸可提高小孢子出胚率;1 L B5+0.2 mg 6-BA+20 g蔗糖+12 g琼脂培养基有利于小孢子子叶期胚长成再生植株。     

菜心游离小孢子培养高频胚诱导培养基优化

【目的】对菜心小孢子培养的诱导培养基进行优化,以提高胚胎诱导率,创制优良DH系应用于育种实践。【方法】设置不同蔗糖浓度和激素(6-BA和NAA)浓度组合的NLN诱导培养基,以10份不同基因型的菜心为试材,进行小孢子培养及出胚率分析,筛选最佳诱导培养基。【结果】7份材料诱导出胚状体,不同基因型间的胚胎诱导率差异显著,说明基因型是影响小孢子形成的主要因素;在无激素处理中,100 g/L蔗糖浓度NLN(NLN-10)小孢子胚诱导率最高,出胚材料诱导率在3.45～30.46胚/皿;NLN含量减半的1/2 NLN-10培养基处理出胚率约为NLN-10处理的2/3;130 g/L蔗糖浓度NLN处理出胚率显著降低,最高仅为14胚/皿,蔗糖浓度为160 g/L的NLN(NLN-16)处理未出现胚状体;在NLN-10中分别添加0.1 mg/L 6-BA和NAA,促进出胚效果最佳,出胚率最高的 Rt19006达46.93胚/皿,是不添加激素处理的1.5倍;当NLN-10 中6-BA和NAA浓度均达到0.2 mg/L时,胚胎生长发育受到抑制。【结论】筛选出可有效促进菜心小孢子出胚的诱导培养基配方,即100 g/L蔗糖浓度的NLN+6-BA 0.10 mg/L +NAA 0.10 mg/L。     

耐寒结球甘蓝小孢子培养及其发育过程

以6份耐寒结球甘蓝杂交F1为试验材料,研究其胚胎发生过程及胚胎发生的诱导条件,为耐寒甘蓝材料的小孢子培养,以及其他芸薹属小孢子胚胎体系的建立及优化提供理论依据。采用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色方法对小孢子体内和体外的发育及胚胎发生过程、特征进行观察;NLN-13培养基中添加阿拉伯半乳聚糖(Arabinogalactan,AG)和阿拉伯半乳糖蛋白(Arabinogalactan-protein,AGP)对小孢子培养胚胎发生率的影响进行统计分析;小孢子体内正常发育方向是单核小孢子经历2次不对称核分裂后发育成三核成熟花粉,小孢子单核晚期对应的花蕾长度主要集中在3.5~4.5mm;体外培养中,热激胁迫(32.5℃)诱导小孢子从配子体发育途径向胚胎发生途径转换,只有少数胚性细胞最终发育成为胚状体;供试材料中有5份材料获得胚状体,材料间出胚量差异较大,其中‘寒玉37’出胚量最高,为每蕾22.5个;在NLN-13培养基中添加10mg/L AG或10mg/L AGP,可以促进耐寒甘蓝胚状体发生。32.5℃热激胁迫1d可有效诱导耐寒甘蓝小孢子培养中的胚胎发生,10mg/L AG或10mg/L AGP促进胚胎诱导。     

培养基成分对黔白大白菜杂交种小孢子胚诱导的影响

以2个黔白大白菜杂交组合为材料,进行游离小孢子培养,探讨了培养基成分对小孢子成胚率的影响。结果表明:NLN培养基添加13%蔗糖的培养效果最好;添加0.05 mg/L 6-BA和0.10 mg/L NAA的培养基显著提高了小孢子胚的诱导率和成熟胚的比例;NLN-13液体培养基中添加适量活性碳可明显促进小孢子胚状体的形成,对胚胎发育的同步性也有很好的作用。     

甘蓝型油菜NER游离小孢子培养优化体系的建立(摘要)(英文)

[目的]建立甘蓝型油菜NER游离小孢子培养优化体系。[方法]对甘蓝型油菜新胞质不育恢复系(NER)进行游离小孢子培养,并对小孢子培养的影响因素作了初步研究。将所取材料接种在NLN-13诱导培养基上培养,并统计总胚产量和子叶胚产量,比较不同基因型间胚状体诱导效果将诱导培养基NLN-13中添加0.05mg/L6-BA、0.05mg/LNAA及二者混用,分别统计平均总胚产量和平均子叶胚产量。研究液体单层悬浮培养和固液双层培养2种培养方式对培养方式对小孢子胚产量的影响;在诱导培养基中加入不同浓度的秋水仙碱,对平均胚产量作调查。[结果]不同遗传背景下的甘蓝型油菜NEA不育胞质恢复系(NER)胚产量差异显著,说明在相同试验条件下基因型的差异是造成胚产量差异的重要原因。提高小孢子胚发生能力试验表明,在诱导培养基上添加适当的6-BA和NAA有利于小孢子胚的发生;固液双层培养优于液体单层培养;在诱导培养基中添加秋水仙碱加倍处理小孢子胚产量与对照差异不明显。在诱导直接成苗前对子叶型胚进行12h/12h弱光照1～2d、在生根培养基中添加一定浓度的NAA等处理能提高小孢子胚成苗率。[结论]建立了一套新胞质不育材料的小孢子培养优化体系,为加速新型胞质不育恢复系材料NER转育后代基因型纯合奠定了基础。     

微型大白菜“娃娃菜”优异双单倍体的创制与评价

以7个"娃娃菜"优良杂交种为试材进行小孢子培养,通过优化培养条件建立高效培养体系。结果表明,不同基因型间的小孢子胚诱导能力差异极显著,33℃条件热击48 h,胚诱导率达最大值;NLN-13+0.05 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA为适宜的诱胚培养基,MS+3%蔗糖+0.75%琼脂+0.1 g/L活性炭是小孢子植株继代和壮苗的适宜培养基,MS+3%蔗糖+0.7%琼脂+0.1 mg/L NAA是小孢子植株适宜的生根培养基。通过游离小孢子培养,获得大量的小孢子胚状体和再生植株195株,筛选获得2个优异的双单倍体(DH系)植株。     

结球甘蓝游离小孢子培养胚发生能力的研究

试验对20个基因型的结球甘蓝材料进行游离小孢子培养,探讨基因型、蔗糖浓度、激素配比与浓度、活性炭等因素对结球甘蓝小孢子胚发生能力的影响。实验结果表明:基因型、蔗糖浓度对胚发生能力影响最大,除个别基因型对蔗糖浓度有较高的要求外,蔗糖浓度在13%、激素组合NAA(0.05 mg/mL) BA(0.1 mg/mL)的培养基适合较多基因型的小孢子胚发生。在培养基中滴加活性碳(10 mg/L)每皿1~2滴,诱导效果明显优于不加活性炭。实验中共有11个基因型的甘蓝材料获得了胚状体,并成功筛选出基因型G 8小孢子胚高频发生的最佳蔗糖与激素浓度配比。     

结球甘蓝游离小孢子培养胚发生能力的研究

试验对20个基因型的结球甘蓝材料进行游离小孢子培养,探讨基因型、蔗糖浓度、激素配比与浓度、活性炭等因素对结球甘蓝小孢子胚发生能力的影响.实验结果表明:基因型、蔗糖浓度对胚发生能力影响最大,除个别基因型对蔗糖浓度有较高的要求外,蔗糖浓度在13%、激素组合NAA(0.05 mg/mL)+BA(0.1 mg/mL)的培养基适合较多基因型的小孢子胚发生.在培养基中滴加活性碳(10 mg/L)每皿1～2滴,诱导效果明显优于不加活性炭.实验中共有11个基因型的甘蓝材料获得了胚状体,并成功筛选出基因型G 8小孢子胚高频发生的最佳蔗糖与激素浓度配比.     

叶用芥菜小孢子离体培养条件

以5个叶用芥菜Brassica juncea var. foliosa品种为试材, 研究了游离小孢子培养过程中基因型、低温预处理、高温热激、更新及加液和秋水仙碱等对小孢子胚状体发生的影响。结果表明:有4个品种获得胚状体, 各品种间胚状体产量存在显著差异, ‘特选九心芥’胚产量最高;4℃低温预处理24~48 h及33~34℃高温热激处理24~48 h对诱导胚状体发生和发育有促进作用;更新和添加培养基处理也可促进胚状体发生, 以质量浓度为170.0 g·L-1的蔗糖起始培养48 h后添加等质量浓度90.0 g·L-1蔗糖培养基处理效果最佳;1~10 mg·L-1秋水仙碱24~48 h处理可提高小孢子培养反应, 增加供试材料胚产量。     

影响大白菜游离小孢子培养胚胎发生因素的研究

本研究以福山包头系列大白菜品种为试材,对影响小孢子培养中胚胎发育的重要因素进行了研究。结果表明,基因型对小孢子胚产量影响较大,平均每个花蕾产胚在1.28~38.25个之间;花蕾长度为2.1~3.0 mm时,小孢子胚诱导率最高,超过3.0 mm或者低于2.0 mm胚胎诱导率极低;NLN-13培养基为小孢子培养最佳培养基,培养基中添加激素并未提高小孢子胚胎产量,但添加0.1~0.3 g/L活性炭能明显提高小孢子胚胎产量。     

影响青花菜游离小孢子培养的若干因素

10个青花菜杂种游离小孢子培养有 6个诱导出胚状体,诱导率达 60%,其中绿洲 808产胚量可达 13. 6个·蕾 -1;小孢子处于单核晚期到双核期适宜小孢子培养;在 1 /2NLN培养基中添加适量的蔗糖、活性炭、6 BA、AgNO3、2, 4 D有利于胚胎发生; 32℃热激处理 1d有利于小孢子产生胚状体;采蕾前 2-5d的温度在 15-25℃适合小孢子发育.     

甘蓝型油菜DH系培养技术优化

[目的]研究消毒处理方式、培养基成分和胚状体培养方法对油菜游离小孢子培养的影响。[方法]以B5培养基为基础培养基,添加不同浓度的蔗糖、琼脂及不同激素组合进行试验,对油菜DH系的组培技术进行优化。[结果]含2%Cl-的NaClO消毒15 min与0.1%HgCl2消毒10 min培养效果较好,都能达到良好的消毒和产胚效果;在游离小孢子提取的过程中,B5液体培养基中蔗糖浓度为2%时能达到较好的产胚效果;小孢子培养首先在32℃暗培养5~7 d,然后25℃暗培养12~15 d,最后25℃振荡暗培养3~7 d胚状体就可完全成熟;1/2 MS培养基(附加1.2%琼脂+0.02%NAA+2.0 mg/L6-BA+3.4 mg/LAgNO3+2%蔗糖)有利于胚的分化和苗的形成,其褐化程度小,玻璃化程度低。[结论]该研究结果有助于甘蓝型油菜DH系的规模化生产及高效转化体系的建立。     

甘蓝型油菜DH系培养技术优化(英文)

[Objective] The aim of this study is to reveal the disinfectants and disinfection methods,medium components,and embryoid culture method on dissociative microspore culture.[Method] B5 as basic medium appended with different concentrations of sucrose,agar and different hormone combinations was used to optimize the culture technique for DH line in Brassica napus L.[Result] Both the 15 min disinfection of NaClO containing 5% Cl-and 10 min disinfection of 0.1% HgCl2 performed well in disinfection and subsequent embryo production;in the extraction process of dissociative microspores,B5 medium containing 2% sucrose could achieve a good embryo production effect;under dark condition microspores were firstly incubated at 32 ℃ 5-7 d,then at 25 ℃ 12-15 d,and finally transferred to 25 ℃ oscillator(60-65 r/min)for 3-7d,when the embryoid would become full ripeness;1/2MS medium appended with 1.2% agar,0.02% NAA,2.0 mg/L 6-BA,3.4 mg/L AgNO3 and 2% sucrose was helpful for embryoid differentiation and plantlet generation,presenting low degree of browning and slight vitrification.[Conclusion] The results may facilitate DH Line in rape production in large scale and high efficient transformation system.     

甘蓝型油菜DH系培养技术优化(英文)

[Objective] The aim of this study is to reveal the disinfectants and disinfection methods,medium components,and embryoid culture method on dissociative microspore culture.[Method] B5 as basic medium appended with different concentrations of sucrose,agar and different hormone combinations was used to optimize the culture technique for DH line in Brassica napus L.[Result] Both the 15 min disinfection of NaClO containing 5% Cl-and 10 min disinfection of 0.1% HgCl2 performed well in disinfection and subsequent embryo production;in the extraction process of dissociative microspores,B5 medium containing 2% sucrose could achieve a good embryo production effect;under dark condition microspores were firstly incubated at 32 ℃ 5-7 d,then at 25 ℃ 12-15 d,and finally transferred to 25 ℃ oscillator(60-65 r/min)for 3-7d,when the embryoid would become full ripeness;1/2MS medium appended with 1.2% agar,0.02% NAA,2.0 mg/L 6-BA,3.4 mg/L AgNO3 and 2% sucrose was helpful for embryoid differentiation and plantlet generation,presenting low degree of browning and slight vitrification.[Conclusion] The results may facilitate DH Line in rape production in large scale and high efficient transformation system.     

黄花芥蓝游离小孢子培养和植株再生

以黄花芥蓝自交品系ZBo-1和ZBo-6为供体材料,研究了培养基添加激素、热激时间、取材时期以及供体植株生长条件对小孢子胚状体产量的影响.结果表明,在32℃热激1 d小孢子胚产量最高,培养基中添加NAA 0.1 mg/L、IAA 0.1mg/L和6-BA 0.1mg/L能促进芥蓝小孢子胚状体的形成.不同时间取材,胚状体产量存在明显差异,胚状体诱导成功率在60%～80%.2个材料在人工春化温室栽培和自然春化温室栽培2种生长条件下都有子叶形胚和鱼雷形胚形成的 能力;ZBo-6在自然春化温室栽培条件下胚产量显著高于人工春化条件下的胚产量,而ZBo-1的胚产量以人工春化条件下较高.试验获得了黄花芥蓝的小孢子再生植株.     

甘蓝型油菜小孢子再生体系的优化研究*

 以甘蓝型油菜花油3号、湘油15号为材料，优化了甘蓝型油菜小孢子再生胚状体的条件，建立起甘蓝型油菜小孢子的高效再生体系。在主花序第一朵花开后第4d从主花序上取4.0～4.5mm花蕾，每毫升NLN培养基接种1个花蕾的小孢子，在32℃起始热激培养36h，胚状体再生频率最高，花油3号达24.80个胚状体/花蕾，湘油15号达16.50个胚状体/花蕾。胚状体再生植株的频率为80.25%。     

萝卜游离小孢子培养及胚再生植株研究

[目的]探讨在自然生长条件下若干因素对萝卜（RaphanussativusL．）小孢子胚诱导及胚再生植株的影响。[方法]首先探讨不同萝卜品种的出胚能力,然后分析热激、低温预处理和培养基对小孢子培养的影响,最后研究胚状体再生成苗与植株继代培养情况。[结果]对22份萝卜材料进行游离小孢子培养,12份获得胚状体,3份获得再生植株,出胚材料中90％以上为杂种一代。4℃低温预处理0～3d小孢子出胚率无明显差异;培养基中加入1～2滴0．5％活性炭和一定浓度6-BA可显著促进小孢子诱导产生胚;不同萝卜品种适宜的热激温度和时间有所不同;发育正常的子叶型胚成苗率为100％;胚萌发分化早期适宜培养基为B5＋2％蔗糖＋1．2％琼脂,后期可逐渐将琼脂浓度降低;FCM测定小孢子植株自然加倍率为30％,单倍体占少数,四倍体与嵌合体（二、四倍）均为30％;秋水仙素处理单倍体植株,人工加倍率达60％。[结论]该研究完善了萝卜游离小孢子培养技术,可提高单倍体获得频率,加快这一技术在育种实践中的应用步伐。