土壤中产碱性蛋白酶菌株的筛选及产酶条件的研究

[目的]从土壤中筛选产碱性蛋白酶菌株,并优化产酶条件。[方法]采用平板分离方法从土壤样品中分离出8株产碱性蛋白酶菌株,采用滤纸片法和Folin-酚法测定8个菌株的产酶能力。将具有较强产酶能力的菌株作为目的菌株,研究该菌株产酶能力的影响因素,并采用正交试验法优化产酶条件。[结果]经过初筛和复筛,从土壤中得到一个碱性蛋白酶高产菌株（5号）,作为目的菌株,其产酶能力为6.00 U/ml,为地衣芽孢杆菌的134.1%,该菌株为革兰氏阳性芽孢梭菌。正交试验表明,在pH为11的初始发酵培养基中添加0.3%蔗糖和0.8%蛋白胨,并以105个/ml的接种量接种,目的菌株可得到较好的产酶效果,且蛋白胨对该菌株产酶能力具有显著影响。[结论]该研究为产碱性蛋白酶菌株的筛选提供了理论参考。     

弹性蛋白酶产生菌的诱变选育及其发酵条件初步研究

以弹性蛋白酶产生菌芽孢杆菌Bacillussp.EA9为出发菌株,经离子注入和紫外线复合诱变,筛选到弹性蛋白酶高产菌株,编号为EA9314。用单因子条件试验、Plackett-Burman试验及正交试验对该菌株进行培养基组成及培养条件的初步研究,结果表明:其最佳培养基组成是:2%葡萄糖,1.5%酵母粉,0.1%豆饼粉,0.1%K2HPO4,0.01%MgSO4;最佳培养条件是:起始pH 6.5~7.0,250 ml三角瓶装液量20 ml,接种量6%。在此发酵条件下,该菌产酶水平为274.7 U/ml。     

海洋细菌GM-1-1产芽孢发酵培养基和摇瓶发酵条件优化

[目的]优化海洋解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)GM-1-1的产芽孢发酵培养基和摇瓶发酵条件,为该菌株的开发和应用提供理论依据.[方法]以GM-1-1菌株发酵液中的细菌总数和芽孢产率为检测指标,采用单因素和正交试验对该菌株产芽孢发酵培养基和摇瓶发酵条件进行优化;GM-1-1菌株发酵完成后喷雾干燥制成菌粉,加入不同助剂制成有效含量为1010 CFU/g的可湿性粉剂用于水稻纹枯病田间防治试验.[结果]GM-1-1菌株产芽孢最佳发酵培养基配方为麦麸0.75%、花生饼粉2.5%、CaCO30.05%;最佳发酵条件为pH 7,温度30℃,250 mL三角瓶装液量60 mL,接种量8%,转速200 r/min,培养时间54 h.优化后GM-1-1菌株发酵培养基的细菌总数和芽孢产率分别达7.40×109个/mL和89.42%.田间防治试验结果表明,GM-1-1可湿性粉剂对水稻纹枯病的防治效果最高可达82.06%.[结论]优化后的培养基和发酵条件可有效提高GM-1-1菌株的细菌总数和芽孢产率,且培养基成本低、来源广泛.GM-1-1可湿性粉剂对水稻纹枯病有较好的防治效果,可用于生产菌剂并推广应用.     

饲用枯草芽孢杆菌发酵工艺的优化及菌剂制备

[目的]为饲用枯草芽孢杆菌的大规模生产奠定基础.[方法]通过单因素试验和正交试验,对发酵培养基配方及其发酵条件进行优化.[结果]饲用枯草芽孢杆菌的最佳培养基为:葡萄糖3％、酵母浸膏1.5％、磷酸氢二钠0.2％、磷酸二氢钠0.1％、硫酸镁0.1％、酵母浸粉0.5％.饲用枯草芽孢杆菌的的最适发酵条件为:温度38℃,初始pH7.0 ～7.2,摇床转速180 r/min,接种量7％.选择木屑质量与发酵液体积(m/V)的混合比为3∶5,继续高温发酵16 h,芽饱产量可达到5.18×1010CFU/g.[结论]该研究可为饲用枯草芽孢杆菌的工业化生产提供了数据支持.     

番茄枯萎病拮抗细菌S13产芽孢发酵培养基及发酵条件优化

[目的]提高番茄枯萎病菌拮抗细菌解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliauefaciens)S13的芽孢数量和芽孢产率.[方法]采用单因素和正交试验,研究不同的氮源、碳源、pH、温度、培养时间对解淀粉芽孢杆菌形成芽孢的影响.[结果]确定解淀粉芽孢杆菌产芽孢培养基的最佳组分为(g/L):玉米粉0.4,酵母膏0.1,玉米浆1.25,KH2P040.1,K2 HP04 0.1,MgS04.7H20 0.05.对发酵条件进行了研究,产芽孢最适pH为7.0,最适温度为35℃,最适时间为26 h.[结论]通过优化培养基组分和培养基条件,1 000 L罐发酵液中芽孢数达到4.9×109cfu/mL,芽孢产率为90;,为进一步该菌株在复合生物肥中的应用打下基础.     

一株从片烟中分离的纤维素酶产生菌B.Pumilus培养条件优化研究

[目的]优化短小芽孢杆菌(B.Pumilus)菌株TX3产纤维素酶条件,为其降解片烟中所含纤维素提供理论依据.[方法]应用单因子试验考察碳源种类、烟梗粉末添加量、硫酸铵浓度和pH对菌株TX3发酵产纤维素酶的影响,在此基础上选取烟梗粉末添加量、硫酸铵浓度、pH作为显著因子,采用响应面分析法对此3种显著因子进行优化和分析.[结果]菌株TX3最适产酶条件为发酵初始pH6.93,烟梗粉末添加量1.24％,硫酸铵浓度0.35％,以此条件进行摇瓶发酵72 h,其纤维素酶活力达到9.91 U/ml,比优化前高了31.4％.[结论]烟梗粉末添加量、硫酸铵浓度、pH对菌株TX3产纤维素酶单个及交互影响均显著.     

产纤维素酶芽孢杆菌的选育研究

试验选用10株芽孢杆菌,根据其分泌胞外纤维素酶的活力对菌株进行了初选和复选,初选均采用平板培养、染色法;复选采用分光光度计比色法测定芽孢杆菌发酵培养液酶活力。筛选出胞外酶活性较高且连续发酵酶活力相对稳定的枯草芽孢杆菌菌株,菌株编号为Pab02,其单位生物量纤维素酶活力为1582．854U。并进一步对其发酵培养基的初始pH、发酵温度及时间进行了优化,结果显示该菌株在pH值7．5、温度37℃、时间48h条件下单位生物量酶液酶活达到2200．925U,是优化前酶活的1．39倍。     

鸡腿菇液体发酵工艺的优化

[目的]对鸡腿菇液体发酵培养基和培养条件进行筛选及优化。[方法]以鸡腿菇为供试材料,胞外多糖和菌丝体生物量为指标,通过单因素试验和正交试验对鸡腿菇液体发酵培养基配方及培养条件进行筛选及优化。[结果]鸡腿菇液体发酵产胞外多糖的最佳培养基组合为：葡萄糖2．0％,酵母膏0．75％,CaCl0．2％;鸡腿菇液体发酵产菌丝体的最佳发酵培养基组合为：葡萄糖2％,酵母膏0．75％,KH2PO4 0．2％;鸡腿菇液体发酵产胞外多糖和菌丝体的最佳发酵条件均为：起始pH值7．0,接种量20．0％,装液量120ml,培养天数6d;[结论]该研究为鸡腿菇的进一步开发提供了科学依据。     

产β-半乳糖苷酶芽孢杆菌的筛选及产酶条件的优化

[目的]筛选产β-半乳糖苷酶的芽孢杆菌并对其产酶条件进行优化。[方法]从土壤中筛选出一株具有β-半乳糖苷酶活性的菌株,对其进行鉴定并对其发酵产酶条件进行优化。[结果]该菌株被初步鉴定为巨大芽孢杆菌。该菌株的最佳碳源是乳糖,最佳氮源是牛肉膏和蛋白胨,Na+对产酶有明显的促进作用。当乳糖含量为1.20%,牛肉膏含量为0.63%,蛋白胨含量为1.04%时,该菌株所产β-半乳糖苷酶酶活可达3.68 U/ml。初始pH值为8.0,培养温度为45℃,接种量为2%,振荡培养17 h,该菌株所产β-半乳糖苷酶的酶活最高,为5.49 U/ml。[结论]该菌株在高温条件下生长旺盛,适宜生长pH值范围广,在生产实践中具有一定的应用价值。     

链霉菌XP产耐热木聚糖酶的发酵条件优化及酶解产物鉴定

[目的]对1株产胞外耐热木聚糖酶的链霉菌XP的产酶条件进行优化,并对其降解木聚糖的产物进行鉴定。[方法]分别对该菌摇瓶发酵产酶的培养基组成、培养基初始pH值、发酵温度、发酵时间、装液量进行了优化,并以燕麦木聚糖为底物,采用薄层层析法考察了粗酶对底物的水解产物组成。[结果]该链霉菌的液体发酵产酶的最佳培养基为：稻草3.0%,NaOH0.2%,KH2PO40.5%,（NH4）2SO40.5%,培养基起始pH值为7.5,发酵温度37℃,发酵时间72h,摇床转速190r/min,250ml的三角瓶装液量为60ml。用该菌产生的胞外粗木聚糖酶酶液酶解燕麦木聚糖,降解产物主要为木二糖和木三糖,没有产生单木糖。[结论]该研究为木聚糖酶生产菌株的研发提供了一定的技术参考,酶解产物表明该酶在低聚木糖的制备中有很大的应用价值。     

三褶虾脊兰无菌播种陕繁技术研究

【目的】建立三褶虾脊兰（Calanthe triplieata）无菌播种快繁技术体系。【方法】以三褶虾脊兰种子为外植体,采用种子→原球茎→完整植株途径,探讨不同组合（0．5mg／L6-BA、0．1mg／LNAA和1．0g／LAC）、附加物[椰汁（CM）、土豆泥、香蕉泥]及基本培养基（花宝1号、1／2花宝1号、MS和1／2MS）对三褶虾脊兰种子萌发、原球茎诱导、增殖、分化、生根的效果,筛选适宜的培养基。【结果】成熟种子在1／2花宝1号＋0．5mg／L 6-BA＋0．1mg／L NAA＋200ml/L CM＋1．0g／L AC＋20．0g／L蔗糖培养基中培养150d左右可形成原球茎,萌发率超过80％以上;诱导原球茎在1／2MS＋100mL／LCM＋2．0mg／L6-BA＋0．1mg／LNAA＋1．0g／LAC＋20．0g／L蔗糖培养基上的增殖效果最好,增殖率为4．5;原球茎接种于花宝1号＋0．1mg／L6-BA＋0．1mg／LNAA＋100．0g／L土豆泥＋1．0g／LAC＋20．0g／L蔗糖培养基上分化培养40d后,再转入花宝1号＋0．1mg／LNAA＋100．0g／L土豆泥＋2．0g／LAC＋20．0g／L蔗糖培养基上培养40d,可诱导形成完整植株。在花宝1号培养基中添加NAA和土豆泥或香蕉泥,原球茎生根率均达100．0％,但土豆泥的成本最低。【结论】建立了比较完善的王褶虾脊兰无菌播种和快繁技术体系,为其种质资源保护、种苗繁育以及产业开发提供技术支持。     

花叶玉簪的组培技术的研究

[目的]研究花叶玉簪的组培技术。[方法]以花叶玉簪为研究对象,采用浓度75％的酒精进行消毒,并以MS为基本培养基,添加不同浓度植物生长调节剂6-BA和NAA进行增殖培养和生根培养,观察生长状况。[结果]MS＋4．0mg／L6-BA＋0．1mg／LNAA增殖效果最好,苗生长健壮。最佳生根培养基为：1／2MS＋0．1mg／LNAA＋0．3％活性炭;20d后平均根长可达3cm,且根系比较粗壮,移栽后易成活。幼苗移栽时以蛭石：珍珠岩（5：1,W/W）、泥炭土：珍珠岩：蛭石（3：1：1,W／W／W）或腐叶土：蛭石（3：1,W／W）的成活率较高,小苗生长健壮。[结论]采用组培方法繁殖花叶玉簪,虽然具有繁殖系数高,时间短等优点。     

黑木耳液体发酵产胞外多糖条件的研究

[目的]研究黑木耳液体发酵产胞外多糖的条件。[方法]利用单因素试验,研究碳源、氮源、无机盐、培养温度、初始pH、接种量、发酵时间等对黑木耳液体发酵产胞外多糖产量的影响。[结果]适宜的发酵培养基为:葡萄糖4%、豆饼粉0.7%、KH2PO40.4%、MgSO4·7H2O 0.5%、CaCO30.3%、棉籽壳粉1%;适宜的发酵条件为:培养基初始pH 6.0、温度28℃、接种量10%(V/V)、装液量90 ml(250 ml三角瓶)、发酵时间6 d,在此条件下胞外多糖产量可达4.835 g/L。[结论]该研究为黑木耳胞外多糖的工业化生产提供了必要的理论基础。     

中华被毛孢的液体培养条件优化

[目的]优化中华被毛孢的液体培养条件。[方法]通过18srDNA及系统进化树对中华被毛孢进行鉴定分析,然后以中华被毛孢菌丝体生物量为指标,采用单因素试验和正交试验研究菌丝体液深层发酵的培养条件。[结果]单因素试验表明,最佳的氮源为蛋白胨,其次为牛肉膏;最佳碳源为葡萄糖,其次为蔗糖和麦芽糖。正交设计试验表明,菌株的液体发酵的最佳配方:浓度1%葡萄糖+浓度0.5%蛋白胨+浓度0.1%酵母粉+浓度0.01%维生素B1+浓度0.05%KH2PO4+浓度0.05%MgSO4;在该浓度培养下,菌丝体生物量可达到20.8 g/L。[结论]该方法优化了中华被毛孢的液体培养条件,为中华被毛孢的的开发利用提供依据。     

红曲霉液体深层发酵生产红曲色素条件的研究

[目的]确定红曲霉产生红曲色素最适宜的培养基配方和培养条件.[方法]采用改变单一变量的方法,测定红色素色价的变化规律,确定红曲霉产生红色素最适宜的培养基配方和培养条件.[结果]试验确定了红曲霉产生红色素最适宜的培养基配方为：葡萄糖5％,酵母粉2％,CaCO30.2％,NaCl0.1％,MgSO4·7H2O 0.1％,KH2PO40.2％,吐温200.05％;最适宜的培养条件为：pH 6.0,装液量为60 ml/250 ml三角瓶中接种10％ （1/6）种龄为72 h的液体种子,30 ℃恒温摇床上振荡培养,转速为180 r/min,发酵6d,红曲色素色价可达19.2 U/ml.[结论]该试验可为工业上大规模生产红曲红色素提供理论依据.     

菊花茎段组织快繁体系的建立

通过对菊花茎段采用不同的消毒处理,然后进行诱导、增殖和生根试验,建立了菊花离体快繁体系：消毒灭菌处理以70％酒精浸泡10s后,在0.1％升汞溶液中浸泡3min为最佳;带腋芽茎段诱导的最适宜培养基是MS＋6-BA2.0 mg·L-1＋ NAA0.1mg·L-1;腋芽增殖的最适宜培养基为MS＋6-BA2.0 ～3.0 mg·L-1＋NAA0.1mg·L-1;利用不带腋芽的茎段诱导愈伤组织的最适宜培养基是MS＋6-BA0.5mg·L-1＋ NAA0.5mg·L-1;愈伤组织再分化成丛生芽的最适宜培养基是MS＋6-BA2.0 mg·L-1＋ NAA0.1mg·L-1;诱导生根的适宜培养基为1/2MS＋ NAA0.5 mg·L-1;生根率为100％;试管苗移栽到疏松透气的蛭石＋珍珠岩＋园土（1：1：1）混合基质中,成活率可达98％.     

黄色马蹄莲组培快繁体系研究

[目的]研究黄色马蹄莲的组培快繁体系。[方法]以黄色马蹄莲(Zantedeschia elliotiana Engler)块茎为外植体,系统研究黄色马蹄莲离体再生体系。[结果]块茎最佳消毒方法为0.1%升汞处理20 min后接入附加抗生素的培养基培养,无菌率高达93.33%;侧芽萌发与愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+蔗糖30 g/L,侧芽萌发的数量多且产生的愈伤组织质量好;最佳继代培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L,增殖系数达4.73,且产生的芽苗生长健壮;最佳生根培养基为1/2MS+IBA 0.4 mg/L+蔗糖20 g/L,根系生长快而健壮,生根率达100%;最佳移栽基质为腐质土∶椰糠∶珍珠岩=1∶1∶2(V/V/V),移栽成活率达98%,移栽苗长势良好。[结论]该研究为黄色马蹄莲组培快繁最佳培养条件和培养方法的确定提供了理论和试验依据。     

红花白千层茎段离体培养研究

【目的】对红花白千层进行离体培养,为红花白千层的工厂化育苗提供技术支持。【方法】以红花白千层茎段为外植体,探讨不同激素组合对不定芽诱导、丛生芽增殖、生根诱导的影响。【结果】带茎段的萌发腋芽进行增殖培养,可直接诱导形成不定芽,并可形成丛生芽。在MS培养基中添加6．BA0．1～2．0mg／L＋NAA0．01mg／L和6．BA0．1-1．0mg／L＋IBA0．01mg／L组合,芽增殖系数均呈先升高后降低的趋势;培养基MS＋6．BA0．5mg／L＋IBA0．01mg／L最适宜芽增殖,增殖系数达2．2倍。在1／2MS培养基中添加0．1-0．5mg／L的NAA或IBA后,芽苗生根率明显提高,分别为100．0％和56．0％-90．0％,平均生根数为12．6～14．8和3．1-4．8条,以NAA的生根效果明显优于IBA。适宜的生根培养基为1／2MS＋NAA0．1～0.3mg／L。在培养基中添加300mg／L活性炭均不利于芽增殖和生根诱导。以泥炭为栽培基质,采用常规管理的试管苗移植成活率可达99．0％。【结论】茎段离体培养是红花白千层快速繁殖的有效途径。     

甜叶菊组培快繁技术研究

[目的]研究甜叶菊的组培快繁技术。[方法]以甜叶菊茎段为外植体,筛选其最佳外植体消毒条件、最佳不定芽增殖及壮苗生根培养基。[结果]甜叶菊外植体材料的灭菌最佳条件为75%酒精20 s,0.1%升汞5～8 min;最佳不定芽增殖培养基为MS+1.0 mg/L6-BA+0.1 mg/L NAA,此时不定芽增殖率达80%;最佳壮苗生根培养基为1/2MS+0.1 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.2 mg/L IBA。[结论]该研究为甜叶菊的工厂化规模生产提供了科学依据。     

大花萱草‘盛夏红酒’组织培养技术研究

[目的]研究大花萱草‘盛夏红酒’的组织培养技术。[方法]以‘盛夏红酒’的健壮花梗为外植体,研究不同激素配比及浓度对外植体愈伤组织诱导和生根的影响。[结果]0.1%升汞消毒10 min为最佳外植体消毒时间,成活率达82.22%;愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA;最佳增殖培养基为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA,繁殖系数达4.9;最佳生根培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA,生根率达92.5%;最适移栽基质为蛭石∶草炭(V/V)=1∶1,苗成活率可达95%。[结论]该研究为‘盛夏红酒’的工厂化育苗提供了理论依据。