肉牛传染性牛支原体肺炎流行的初步诊断

自2008年以来,湖北省多个地区肉牛养殖场(户)发生以肺肉变及坏死为特征的呼吸道传染病,病牛咳嗽,消瘦,有的继发关节炎.常规抗生素治疗效果差,犊牛及体弱牛病死率高.为此,本研究组采集病牛样本(血液和肺等内脏器官),对该病开展了流行病学与病原学研究.实验室检测项目包括:1)支原体培养鉴定,PCR扩增与基因测序鉴定;2)细菌分离鉴定;3)牛结核诊断,包括牛结核菌素皮内变态反应、牛结核菌抗酸染色、牛结核菌培养鉴定,与牛血清结核抗体ELISA检测;4)泰勒虫血涂片检测与PCR检测等.     

牛支原体、牛多杀性巴氏杆菌和牛结核分枝杆菌三重PCR快速检测方法的建立

为建立快速、准确的检测牛呼吸道主要病原菌牛支原体(Mycoplasma bovis)、牛多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)及牛结核分枝杆菌(M.tuberculosis)的方法,对牛支原体oppD基因序列、牛多杀性巴氏杆菌Pm-kmt基因序列、牛结核分枝杆菌IS6110基因序列分别设计特异性引物,对单一PCR检测方法进行优化后建立三重PCR检测方法。结果表明:三重PCR的最佳扩增条件为94℃预变性10min;94℃1min,60℃50s,72℃1min,循环30次;72℃延伸10min。建立的三重PCR方法能对同一样本中的3种病原菌进行扩增,特异性强。牛支原体、牛多杀性巴氏杆菌和牛结核分枝杆菌的最低检测DNA浓度分别为5.306×10~(-3)ng/μL、3.075×10~(-2)ng/μL和1.605×10~(-4)ng/μL。建立的三重PCR方法临床检测牛支原体肺炎鼻拭子、牛结核分枝杆菌、结核菌素与单一PCR检测方法的阳性符合率为100%。三重PCR检测方法可用于牛支原体、牛多杀性巴氏杆菌、牛结核分枝杆菌的单一和混合感染鉴别诊断,具有快速、准确、简便的特点。     

牛环形泰勒虫病PCR诊断方法的建立及其应用研究

【目的】建立快速检测牛环形泰勒病的PCR诊断方法。【方法】根据牛环形泰勒虫裂殖子的表面抗原(Tams1)基因,设计一对特异性引物,以地方阳性病例提取的DNA为模板,用PCR扩增出目的条带,经克隆、测序分析后,通过优化反应体系,建立牛环形泰勒虫病的PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性进行验证试验。【结果】测序结果表明,扩增的目的片段与已知基因序列相似性为99%;该方法检测与牛的其他血液原虫无交叉反应,其最低检出限量为1.6×10²copies/μL。应用所建立的PCR检测方法对新疆吐鲁番市周边疑似地区419份牛全血进行了检测,结果阳性率为52.3%(219/419),而血液涂片检出率为43.7%(183/419)。【结论】建立的牛环形泰勒虫PCR快速诊断方法具有有一定的特异性和敏感性,可用于牛环形泰勒虫病的分子诊断和流行病学调查。     

广西奶水牛结核病三种检测方法的比较

应用牛结核变态反应、PCR和分离培养3种方法,对奶水牛进行牛结核病检测,比较3种检测方法的符合率。结果表明,1850头奶水牛中有78头奶水牛的皮内变态反应结果为阳性,而对变态反应阳性的牛样品进行PCR检测和分离鉴定,分别鉴定出4份和2份牛分枝杆菌。阳性检出率以变态反应为最高(4.22%),PCR和分离鉴定的较低,分别为0.21%和0.11%。变态反应与PCR检测、分离鉴定的符合率较差,而PCR检测与分离鉴定的符合率相对较接近。因此建议,在对奶水牛群进行结核病检测时,应先以变态反应检疫牛群,再结合PCR检测进行综合诊断,更有利于奶水牛结核病的检测与净化。     

牛结核病的屠宰鉴定和处理

牛结核病主要是由牛型结核分枝杆菌（M.bovis）引起的一种人畜共患的慢性传染病。其特征是病畜逐渐消瘦,在组织器官内形成结核结节和干酪样坏死。在屠宰检查过程中,笔者对最常见的牛结核病做了检查,通过病原学,病理变化、症状进行了鉴定并及时处理病牛。此次检查进入屠宰场的1820头牛,检出4例感染结核病的牛,检出率为0.29%。     

牛环形泰勒虫巢式PCR诊断方法的建立

根据GenBank上发表的环形泰勒虫Tams1基因序列设计2对巢式引物,成功建立了环形泰勒虫病的巢式PCR快速检测方法.验证试验结果表明,PCR扩增产物测序结果与GenBank收录的Tams1序列同源性在92%～99%,对环形泰勒虫检测具有良好的特异性、重复性以及灵敏度.对新疆焦虫病疫区牛群血样检测发现,巢式PCR检出率为62.2%(61/98),高于常规PCR检出率(58.2%,57/98)和血涂片镜检检出率(35.7%,35/98),提示该巢式PCR方法可用于大规模的环形泰勒虫病的流行病学调查.     

1株感染肉牛的鲍氏不动杆菌的分离与鉴定

[目的]从疑似患有支原体肺炎肉牛中分离出致病菌,并对其进行鉴定。[方法]从爆发牛支原体肺炎的某牛场病牛肺组织中分离致病菌,并对其进行致病性检测和药敏试验。通过16S rDNA序列测定与系统进化分析,进行病原菌的鉴定。[结果]除分离到牛支原体外,还分离到1株致病性细菌FC-1。该菌革兰氏染色为阴性,球杆状,对大环内酯类药物具有耐药性,对氨基糖苷类及喹诺酮类抗生素敏感。16S rDNA序列测定结果表明该菌为1株鲍氏不动杆菌。[结论]导致牛支原体肺炎的病原除牛支原体外,还可能存在其他病原的混合感染。     

牛支原体肺炎病的防治措施

传染性牛支原体肺炎（俗称烂肺病）,是由牛支原体引起的以坏死性肺炎为主要特征的肉牛呼吸道传染病.     

新疆巴州地区绵羊肺炎流行病学调查

为了解巴州地区绵羊肺炎病原的流行情况,抽检240只患肺炎羊的脏器、血清、眼结膜拭子、鼻腔拭子样品,对脏器和鼻腔拭子进行细菌的分离培养鉴定,采用ELISA方法检测血清中支原体抗体、呼吸道合胞体病毒抗体、副流感病毒抗体、结核分枝杆菌抗体,采用荧光PCR方法对眼结膜拭子进行小反刍兽疫病毒核酸检测。结果发现,溶血性曼氏杆菌检出率27.1%,链球菌检出率21.6%,多杀性巴氏杆菌检出率17.9%,支原体抗体检出率16.7%,呼吸道合胞体病毒抗体检出率40.0%,副流感病毒抗体检出率18.8%。溶血性曼氏杆菌检出率显著高于多杀性巴氏杆菌、支原体、结核分枝杆菌检出率,呼吸道合胞体病毒抗体检出率显著高于副流感3型病毒抗体检出率。表明巴州地区绵羊肺炎为多种细菌、病毒混合感染,呼吸道合胞体病毒、溶血性曼氏杆菌为其主要致病源。     

牛支原体肺炎临床防治探析

<正>病原牛支原体是感染牛的一种重要的致病性病原体,是健康牛和肺炎牛上、下呼吸道的常见寄生微生物,主要寄生在鼻腔,其次在乳腺,其分离物可直接从感染牛的肺病灶中获得,也可从感染牛的淋巴结组织中获得。由于缺乏细胞壁,故对外界环境的抵抗力与细菌等其他原核细胞型微生物有较大的区别,对热的抵抗力与细菌相似,对高温敏感,随着温度的升高存活力下降。在无阳光情     

绵羊、肉牛不同组织酶化学定位的研究

选用屠宰绵羊与肉牛各10头的新鲜回肠,肝、肾、肺、脾和淋巴结作5种酶在组织中的位置与活性的比较研究.结果表明:在回肠与肾脏.以碱性与酸性磷酸酶活性最强,主要分布于肠绒毛上皮细胞与肾皮质近曲及远曲小管;在肝脏,酶主要位于实质细胞内,其中酸性磷酸酶活性明显;在肺脏,细支气管呼吸上皮内非特异性酯酶的活性最强;脾脏的红、白髓处相应为酸性与碱性磷酸酶最强活性部位;在淋巴结,以碱性磷酸酶与琥珀酸脱氢酶最为活跃,主要集中于皮质部的淋巴滤泡内。     

安格斯牛UCP2和UCP3基因组织表达规律研究

为了研究UCP2基因和UCP3基因在安格斯牛不同组织中的表达规律,运用实时荧光定量PCR技术检测UCP2和UCP3基因在安格斯牛心、肝、脾、肺、肾、大肠、小肠、背最长肌和皮下脂9种组织中的相对表达情况.结果 表明:UCP2和UCP3在所检测的组织中均有表达,且UCP2在肺脏中的相对表达量最高,极显著高于其他组织(P＜0.01),其次为脾脏和肾脏,其表达量极显著高于除肺脏外的其他组织(P＜0.01),其余组织的表达量虽有差异,差异不显著(P＞0.05);UCP3基因在皮下脂中的表达量极显著高于其他各组织(P＜0.01),其次为肾脏和肺脏,背最长肌的相对表达量极显著高于大肠、小肠、心脏、肝脏和脾脏组织(P＜0.01),其余各组织的相对表达量较低.通过对UCP2和㈣基因在安格斯牛不同组织中的表达情况进行分析,揭示这两个基因在安格斯牛不同组织中的表达差异,为进一步拓展UCP2和UCP3基因在不同组织中的功能研究提供理论支持,在某种程度上为安格斯牛的育种提供一些基础资料.     

应用协同凝集试验诊断家兔和牛霉形体感染

以兔抗牛肺疫 C88004株血清制备5%协同凝集试验诊断液并用之于检测兔和牛霉形体感染,结果表明:4只人工感染 C88004株兔肺与气管浸出液阳性检出率分别为75%(3/4)和100%(4/4),20只教学用兔分别为20%(4/20)和0%,6只兔病毒性出血症病毒感染兔皆为阴性.采自牛肺疫疫区14例牛肺浸出液和胸水的阳性检出率分别为78.6%(11/14)和21.4%(3/14)。协同凝集试验用于检测牛肺疫病原,特异性强,重复性高,简便易行,值得推广。     

牛多杀性巴氏杆菌未知型的分离鉴定及防治

以病死牛病变肺脏组织为研究对象，通过革兰氏染色和PCR鉴定确定多杀性巴氏杆菌分离株的血清型，进行分离菌株的小鼠致病性试验和药敏试验。结果表明：该分离菌株为未知型多杀性巴氏杆菌，对硫酸阿米卡星、左氧氟沙星、硫酸庆大霉素、乳酸环丙沙星高度敏感；小鼠多杀性巴氏杆菌最小致死量为1.2×10⁸CFU/m L。     

67例下叶基底段肺结核误诊原因分析

目的探讨下叶基底段肺结核误诊的原因，以提高诊断水平，减少误诊率．方法对珠海地区2005年1月～2008年12月登记管理的下叶基底段肺结核67例误诊病例进行回顾性分析．结果误诊为肺炎16例，支气管肺炎31例，肺脓疡8例，肺癌9例，支气管扩张并感染3例．结论下叶基底段肺结核的临床症状、X线表现均不典型，易误诊，应提高对下叶基底段肺结核的认识．全面收集临床资料，充分利用各种检查手段，寻求病原和组织学诊断依据是减少误诊的关键．     

牛源鲍曼不动杆菌的分离鉴定

牛源鲍曼不动杆菌属于机会性致病细菌，不仅感染动物，还可通过接触传播感染人，引起严重的医源性感染。为了预防人畜感染鲍曼不动杆菌，并为治疗提供理论依据，本实验鉴定了海南省东方市某牛场病死牛致病菌，深入探究该牛场牛病死具体原因，对该患病牛肺脏组织进行采集，分离纯化致病菌株，通过16S rDNA及生化鉴定等方法确定致病菌遗传背景，同时测定该致病菌对6周龄昆明小鼠的半数致死量及其药物敏感性。实验结果表明:该致病菌株与鲍曼不动杆菌的同源性高达99.8%；对实验小鼠体致病力强，对半数致死量为8.89×107 CFU·mL?1；药物敏感试验表明，该菌株对羧苄青霉素、氧氟沙星、环丙沙星敏感。     

牛开胸术的研究

对11头健康蒙古牛,用新手术方法施行开胸术。牛站立保定,采取以静松灵为主的配合麻醉。利用一般手术器械,切开第6肋间和第7肋骨与肋软骨结合处的腹外斜肌,横断该肋骨与肋软骨结合处,即可打开胸腔,並能从切口下部伸入手臂,探查心、肺、纵隔和横隔。术后未见异常,手术切口均为一期愈合。     

猪弓形虫病兽医卫生检验的试验研究

屠宰猪弓形虫病多呈隐性或慢性感染,宰前检疫的重点应放在血清学检查上。用ELISA或IHAT试验能有效地检出本病,且前者比后者具有抗体检出早、持续时间长、阳性检出率高的优点。宰后检验应着重检查肺、肝、淋巴结的病变。支气管肺炎、灶性坏死性肝炎、出血性坏死性淋巴结炎、非化脓性脑炎是急性感染期的特征性病变。转为慢性感染的病猪,由于急性病损的修复,而代之以淋巴网状内皮系统细胞的明显增生。其淋巴结的肿大和“髓样变”是比较特征的。病猪肉的无害化处理,采用高温煮沸2.5小时或-25℃冷冻10天,均可取得良好的效果。     

关岭牛MEF2A和MEF2B基因克隆及其组织表达特征分析

【目的】探究肌细胞增强因子-2(MEF2A和MEF2B)的生物学信息特征及其在关岭牛不同发育阶段各器官组织中的表达情况,为揭示MEF2A和MEF2B基因在关岭牛生长发育过程中的作用机制及挖掘地方种质资源提供理论参考。【方法】通过RT-PCR克隆MEF2A(NM_001083638.2)和MEF2B(NM_001145793.1)基因编码区(CDS)序列,利用ProtScal、NetPhs 3.1、SOPMA、ProtParam、PSORT II Preadict、SWISS-MODEL等在线软件进行生物信息学分析,同时采用实时荧光定量PCR检测MEF2A和MEF2B基因在关岭牛不同发育阶段(犊牛、青年牛和成年牛)各器官组织中的表达水平。【结果】关岭牛MEF2A和MEF2B基因CDS序列分别编码492和368个氨基酸残基;MEF2A和MEF2B蛋白相对分子量分别为52和39 k D,对应的理论等电点(p I)为9.07和9.35,均属于碱性不稳定蛋白。关岭牛MEF2A和MEF2B蛋白以无规则卷曲和α-螺旋为主,主要定位于细胞核(分别占60.9%和52.2%)。关岭牛MEF2A基因与与挪威鼠和绵羊的MEF2A基因遗传距离较近,关岭牛MEF2B基因则与牦牛和绵羊的MEF2B基因遗传距离较近。实时荧光定量PCR检测结果显示,MEF2A和MEF2B基因在关岭牛不同发育阶段的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、里脊和脂肪等7个组织中均有表达,且受生长发育阶段的影响。其中,MEF2A基因在犊牛各器官组织中的相对表达量极显著高于在青年牛和成年牛(P<0.01,下同),随着年龄的增长,MEF2A基因在关岭牛心脏中的相对表达量极显著高于其他组织;MEF2B基因在青年牛和成年牛的相对表达量极显著高于犊牛,且在关岭牛心脏、肝脏和脾脏中的表达量与年龄呈正相关。【结论】MEF2A基因在关岭牛不同发育阶段心脏中高表达,而MEF2B基因在关岭牛不同发育阶段肺脏和脾脏中高表达,但在里脊中的表达相对较低。可见,MEF2A和MEF2B基因在关岭牛的生长发育过程中发挥重要作用。