菲律宾蛤仔酶解多肽抗前列腺癌DU-145细胞的活性研究

[目的]探讨菲律宾蛤仔酶解多肽抗人前列腺癌DU-145细胞增殖的活性。[方法]对菲律宾蛤仔内脏进行酶解,经超滤截取3 kD以下的多肽,应用MTT法、倒置显微镜观察和AO/EB染色等方法检测其体外抗DU-145细胞的活性。[结果]MTT法检测结果表明不同浓度的多肽对DU-145细胞有明显的生长抑制作用。通过倒置显微镜观察和AO/EB荧光双染观察到DU-145细胞出现细胞凋亡的形态学特征。[结论]菲律宾蛤仔3 kD以下的多肽具有抑制DU-145细胞生长,呈浓度和时间依赖性,并诱导细胞凋亡作用。     

紫贻贝酶解多肽体外抗肿瘤活性研究

确定了紫贻贝胰蛋白酶水解时的最佳条件,研究了紫贻贝酶解多肽的体外抗肿瘤活性。采用正交实验方法,以料液比、pH、加酶量、酶解温度和酶解时间为因素,以酶解液的氨基氮含量和肿瘤细胞增殖抑制率为指标进行L16（45）正交实验,MTT法检测酶解多肽对DU-145、PC-3、H1299和MGC80-3等肿瘤细胞的抑制活性;HE染色法观察酶解多肽对肿瘤细胞形态的影响;免疫组化法检测酶解多肽对细胞中Bcl-2表达的影响。结果表明：当料液比为1：4、pH为8.5、加酶量为1 000 U/g、温度为45℃、酶解时间为5 h时酶解多肽的水解度最大;当料液比为1：4、pH为8.0、加酶量为1 500 U/g、温度为40℃、酶解时间为2 h时酶解多肽的抗肿瘤活性最强,该肽可以下调肿瘤细胞中Bcl-2的表达。紫贻贝酶解多肽具有抗肿瘤活性,可能是通过诱导细胞凋亡来实现的。     

乌贼内脏酶解多肽的制备和抗氧化活性研究

[目的]探讨乌贼内脏酶解多肽的制备和抗氧化活性。[方法]以乌贼内脏为原料,用胰蛋白酶对其进行水解,采用单因素和正交试验方法研究酶解温度、酶解时间、加酶量和pH对水解度和抗氧化性的影响;通过检测羟自由基清除率、DPPH清除率和还原力评价不同分子量水解物多肽的抗氧化性。[结果]当酶解温度为35℃,时间为5 h,加酶量为5 000 U/g,pH为7.5时,水解度最大;当酶解温度为40℃、时间为7 h、加酶量为4 500 U/g,pH为8.0时,水解物对羟自由基清除率最大。超滤后不同分子量多肽对羟自由基的清除率为3～5 kD3 kD以下5～10 kD;DPPH清除率:3～5 kD3 kD以下5～10 kD;还原力:3 kD以下3～5 kD5～10 kD。[结论]乌贼内脏酶解多肽具有较好的抗氧化活性,不同分子量多肽的活性不同。     

胰蛋白酶制备乌贼缠卵腺抗氧化活性多肽的研究

[目的]探讨胰蛋白酶制备乌贼缠卵腺抗氧化活性多肽的工艺及体外抗氧化活性.[方法]以乌贼缠卵腺为原料,用胰蛋白酶进行酶解,采用单因素和正交试验优化乌贼缠卵腺抗氧化活性肽的提取工艺;将酶解液超滤分成4个分子段,通过体外检测DPPH清除率、·OH清除率和还原力评价其抗氧化活性.[结果]胰蛋白酶酶解乌贼缠卵腺在加酶量2000 U/g、pH为8.5、料液比1:3、酶解时间8 h条件下得到的酶解物对DPPH的清除率最大.酶解液经超滤得到的<3 kD分子段的多肽具有良好的DPPH清除能力、·OH清除能力和还原能力.[结论]胰蛋白酶酶解制备的乌贼缠卵腺多肽具有较好的体外抗氧化活性,可作为抗氧化肽的理想来源.     

Zeylenone对急性淋巴细胞白血病细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨Zeylenone体外抗急性淋巴细胞白血病(Acute Lymphoblastic Leukemia,ALL)效应及作用的可能机制。方法应用MTT法比较Zeylenone对肿瘤细胞、正常细胞增殖的影响;AO/EB染色观察其对ALL细胞(Reh、RS4;11)凋亡形态学的改变;流式细胞仪检测药物对细胞凋亡及细胞周期的影响。结果 Zeylenone对多种细胞呈现增殖抑制作用,且对ALL细胞株呈现更高的敏感性,而对外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)抑制作用较小,抑制Reh、RS4;11细胞增殖呈时间依赖性和剂量依赖性;Zeylenone能够诱导ALL细胞凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期。结论 Zeylenone体外具有抗ALL细胞增殖的作用,其作用与诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期相关。     

球孢白僵菌NJBb2101发酵液对Sf9细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

[目的]本文分析了对多种昆虫具有高毒力的球孢白僵菌菌株NJBb2101发酵液产物对细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,旨在为筛选球孢白僵菌杀虫成分提供理论基础。[方法]以昆虫细胞Sf9为材料,利用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒检测发酵液产物对细胞增殖的抑制作用;利用AO/EB(吖啶橙-溴化乙锭)染色和Annexin V-FITC/PI(Annexin V-fluorescein isothiocyante/propidium iodide)染色-流式细胞仪2种检测方法测定了高、低质量浓度(1.92和0.48 mg·mL~(-1))发酵液产物对细胞凋亡的诱导作用。[结果]NJBb2101发酵液产物对Sf9细胞增殖具有很强的抑制作用,测定的抑制中浓度(IC_(50))为0.907 mg·mL~(-1)(95%置信限为0.500～3.075 mg·mL~(-1))。AO/EB和Annexin V-FITC/PI染色-流式细胞仪检测发现高浓度(1.92 mg·mL~(-1))发酵液产物可以显著增强细胞凋亡率,平均凋亡率均在70%以上。[结论]球孢白僵菌发酵液中存在有效的杀虫成分,对昆虫细胞表现出增殖抑制和诱导凋亡的作用。     

菲律宾蛤仔提取物提取条件优化及其体外清除自由基的作用

[目的]研究菲律宾蛤仔全脏器提取物体外对自由基的清除作用,为其综合利用提供基础。[方法]分别采用邻二氮菲-Fe2＋氧化法、DPPH反应法和邻苯三酚自氧化法,检测菲律宾蛤仔提取物体外对羟自由基（HO.）、DPPH.和超氧阴离子自由基（O2-.）的清除作用。[结果]以0.1 mol/L NaCl溶液为浸提液,料液比为1∶8,75℃水浴浸提100 min,提取液经透析浓缩,再以70%乙醇终浓度沉淀,提取物（RPS-0）的得率达到3.30%,总糖与可溶性蛋白含量分别为42.40%和14.40%。RPS-0对HO.和DPPH.清除作用的IC50分别为3.100、3.500 mg/ml,对O 2-.的清除率可达到39.4%。[结论]菲律宾蛤仔盐提取物具有一定的体外清除自由基作用。     

木瓜蛋白酶水解制备菲律宾蛤仔肽工艺研究

利用壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂固定化的木瓜蛋白酶,水解菲律宾蛤仔。通过正交试验对pH值、酶用量、酶解时间、温度等参数进行了优化。结果表明：在pH 6.0条件下,酶解菲律宾蛤仔的最佳工艺条件为固定化木瓜蛋白酶酶加量（E/S）1.8%、酶解时间9 h以及温度60℃,所得菲律宾蛤仔肽含量为60.4 mg。     

菲律宾蛤仔提取物及生物活性的研究进展

菲律宾蛤仔是我国四大养殖贝类之一,营养丰富,蛋白含量高,具有食用和药用价值.从菲律宾蛤仔中提取的氨基多糖、糖胺聚糖、糖蛋白、活性多肽等物质,具有抗肿瘤、抗氧化、降血脂、增强免疫力及抗动脉粥样硬化等作用,本文综述这些生物活性成分的研究现状,为海洋功能食品和海洋药物的研发提供参考.     

大西洋鳕鱼皮多肽体外抗氧化活性研究

[目的]探讨大西洋鳕鱼皮多肽的体外抗氧化活性。[方法]选择胰蛋白酶酶解鳕鱼皮,分别以氨基氮滴定法和DPPH自由基清除率作为筛选指标,通过正交试验,筛选出酶解的最优条件;将超滤液分成5段,分别进行DPPH自由基清除率、ABTS自由基力及亚铁离子螯合能力的体外抗氧化活性。[结果]胰蛋白酶酶解大西洋鳕鱼皮的最优条件为料液比1∶1,加酶量2 500 U/g、酶解时间4 h、温度45℃、pH 9.0。当分子量小于5 k D时,DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除能力和Fe2+离子螯合能力最强。[结论]经胰蛋白酶酶解,获得的大西洋鳕鱼皮多肽存在较好的抗氧化活性。     

Cu2+胁迫诱导花鲢血细胞凋亡的研究

以花鲢Aristichthys nobilis（Rich）血细胞为研究对象,选用不同浓度的铜离子Cu^2＋进行不同时间的胁迫诱导,通过瑞士姬姆萨染色和AO/EB荧光染色,在光学和荧光显微镜下观察细胞形态变化,并统计凋亡率。结果表明：在Cu^2＋的胁迫作用下,花鲢血细胞呈现细胞变圆、核变圆、核边缘化、形成凋亡小体等凋亡形态特征,且凋亡细胞随着Cu^2＋浓度的增加和作用时间的延长而增加。表明Cu^2＋能诱导花鲢血细胞发生典型的凋亡,而且细胞凋亡率与Cd^2＋的浓度和处理时间成明显的剂量-效应关系。     

玉米小斑病菌C小种毒素诱导玉米离体根冠细胞凋亡的检测

将玉米同核异质体不育细胞质CB37及其正常保持系NB37的离体根冠细胞分为4组,其中3组分别用质量浓度50μg/mL、100μg/mL和150μg/mL的玉米小斑病菌C小种(HMC)毒素诱导,1组用pH6.5PBS诱导作为对照,诱导时间分别为1h、4h和7h。然后采用中性红与伊文思蓝染色、吖啶橙(AO)与溴化乙啶(EB)复染和Hoechst33258染色3种方法检测玉米根冠细胞的凋亡状况。结果表明:HMC毒素诱导玉米根冠细胞发生凋亡,并出现凋亡小体与染色体边集形态特征。中性红与伊文思蓝染色,只能检测出活细胞和死细胞,且在3种毒素浓度、3种处理时间下,CB37的根冠细胞死亡率均高于NB37;采用AO与EB复染方法,用150μg/mLHMC毒素处理7h时,CB37细胞凋亡率达到最高值70.2%,而NB37仅为36.7%;经Hoechst33258染色后,CB37用150μg/mLHMC毒素处理7h时达到最大凋亡率为74.5%,而NB37为30.7%。专效性HMC毒素对C细胞质敏感,在毒素伤害细胞致死过程中,C细胞质的细胞死亡率远高于N细胞质;在诱导细胞凋亡程序中,C细胞质的细胞凋亡率也远高于N细胞质,且其凋亡率随...     

Cu^2＋胁迫诱导花鲢血细胞凋亡的研究

以花鲢Aristichthys nobilis（Rich）血细胞为研究对象,选用不同浓度的铜离子（Cu^2＋）进行不同时间的胁迫诱导,通过瑞士姬姆萨染色和AO／EB荧光染色,在光学和荧光显微镜下观察细胞形态变化,并统计凋亡率。结果表明：在Cu^2＋的胁迫作用下。花鲢血细胞呈现细胞变圆、核变圆、核边缘化、形成凋亡小体等凋亡形态特征,且凋亡细胞随着Cu^2＋浓度的增加和作用时间的延长而增加。表明Cu^2＋能诱导花鲢血细胞发生典型的凋亡,而且细胞凋亡率与Cd^2＋的浓度和处理时间成明显的剂量一效应关系。     

五倍子鞣质对生物被膜型白假丝酵母的干预作用

[目的]研究五倍子鞣质对生物被膜型白假丝酵母的抑制作用。[方法]在生物被膜形成的早期、中期和成熟期以不同浓度药物干预48 h,采用MTT法检测药物对膜型白假丝酵母的抑制率;以不同浓度药物干预成熟生物被膜24、48、72 h,再用MTT法检测抑制率;光镜直接观察生物被膜内白假丝酵母的形态结构变化;用吖啶橙/溴化乙锭染色,通过荧光显微镜观察生物被膜内白假丝酵母的死亡方式。[结果]五倍子鞣质对生物被膜的形成具有抑制作用,对成熟期生物被膜中白假丝酵母的抑制作用具时间和剂量依赖性;鞣质导致被膜内白假丝酵母细胞变形,形态结构改变,但未见确切细胞凋亡,同时抑制细胞芽管和假菌丝形成。[结论]五倍子鞣质对白假丝酵母生物被膜的形成及成熟期生物被膜中白假丝酵母均具较强的抑制作用;可能通过非凋亡途径导致被膜内白假丝酵母的死亡。     

细胞凋亡对柔嫩艾美耳球虫入侵的影响

为了研究球虫与宿主细胞间相互关系,利用含有6%乙醇的DMEM完全培养基培养对MDBK细胞进行凋亡诱导,通过膜联蛋白V(Annexin V)/PI染色法、HE染色法和吖啶橙染色法来鉴定MDBK细胞的凋亡情况。蔗糖密度梯度离心法获得的柔嫩艾美耳球虫子孢子与诱导凋亡的细胞共培养1 h后,利用HE和吖啶橙染色法来研究子孢子入侵细胞的状况。结果显示,在诱导凋亡的细胞中,没有发现柔嫩艾美耳球虫的子孢子,对照组未诱导凋亡的细胞中有子孢子入侵。表明球虫无法入侵诱导凋亡的细胞,进一步揭示了球虫在入侵过程中可能存在的识别机制和入侵机制,为将来开发新疫苗和新药物提供了基础数据。     

基于单克隆抗体的胶体金试纸条检测水产品中甲霜灵的残留

为了建立检测水产品中抗水霉药物甲霜灵残留的快速初筛方法,采用基于单克隆抗体技术的胶体金标记检测水产品中甲霜灵残留。甲霜灵单克隆抗体为IgG1,Kappa型;重链50 ku,轻链20 ku,分子质量约为150 ku;亲和力常数为2.46×10⁹ L/mol;IC₅₀为59.57 ng/mL。利用甲霜灵单克隆抗体作为金垫,甲霜灵-牛血清白蛋白偶联物及羊抗鼠IgG作为检测线与质控线,制备了甲霜灵胶体金免疫层析试纸条。测定结果显示:胶体金试纸条在甲霜灵质量浓度为5 mg/mL时可检出,与恩诺沙星、磺胺甲恶唑、氟苯尼考、呋喃唑酮、吡喹酮、强力霉素、孔雀石绿和亚甲基蓝等8种药物均无交叉反应。利用试纸条对草鱼(Ctenopharyngodon idella)、花蛤(Ruditapes philippinarum)、凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)等水产品样品进行测试,在草鱼、凡纳滨对虾样品最低检测限可达2 mg/kg,花蛤样品最低检测限可达1 mg/kg。利用高效液相色谱法验证试纸条检测甲霜灵残留,主要数据验证结果一致。基于单克隆抗体的胶体金免疫条快速、灵敏、特异性强,适合作为水产品组织中甲霜灵残留检测的初筛方法。     

酸枣仁黄酮对糖尿病大鼠肾损伤的保护作用

[目的]为了探讨酸枣仁黄酮对糖尿病大鼠肾损伤的保护作用及机制。[方法]采用腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型,连续灌胃给予酸枣仁黄酮28 d,收集大鼠尿液、血液及组织标本,检测大鼠体重、空腹血糖及肾功能、肾皮质中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;采用原位末端标记法(TUNEL),检测肾脏细胞凋亡。[结果]酸枣仁黄酮连续干预28 d后,与糖尿病模型组相比,大鼠体重及空腹血糖无明显变化(P>0.05),但肾功能指标明显改善,肾皮质MDA含量显著下降(P<0.05),SOD活性显著升高(P<0.05);肾脏凋亡细胞数显著减少(P<0.05,P<0.01)。[结论]糖尿病可引起肾脏高水平的氧化应激和过度的细胞凋亡。酸枣仁黄酮可通过抑制肾组织氧化应激及肾细胞凋亡而发挥肾保护作用。