鸡原始生殖细胞迁移和聚集规律的研究

研究表明 :鸡的原始生殖细胞 ( PGCs)起源于孵化前胚盘的明区 ,而后逐渐迁移至胚体的头前侧部的生殖新月区 ,并于孵化约 2 2 h时 ,大量聚集于此 ( 3 1～ 3 8个 )。随着鸡胚内、外血管的发育 ,PGCs则进入血管中 ,并顺着血管于孵化约 3 6h ( 1 0期 )时首次迁移到胚体上。孵化至 4 4～ 52 h ( 1 1～ 1 3期 )时聚集 (约 1 0 5个 )于胚体的心脏、大血管及头部间充质中。最后 ,PGCs于孵化 62 h( 1 7期 )时大量迁移至胚体后端生殖嵴处 ,迁移过程一直可持续到孵育第 4天。孵化 5d时 ,迁移入生殖嵴的 PGCs与生殖嵴一起共同组成了未分化的性腺     

第28期鸡胚原始生殖细胞的分离培养

[目的]进一步优化生殖细胞（PGCs）细胞体外培养条件。[方法]从第28期（5．5d）鸡胚生殖嵴分离PGCs，将PGCs与性腺基质细胞共培养进行原代培养，比较2种培养温度和3种培养浓度对PGCs原代培养的影响，以及2种饲养层细胞对PGCs传代培养的影响，并通过倒置显微镜下形态学观察、碱性磷酸酶（AKP）和过碘酸希夫反应（PAS）染色方法鉴定PGCs。[结果]培养浓度为2．5×10^5个／ml和培养温度为37℃时PGCs增殖较多，不易分化，存活能力较强，以第2代鸡胚成纤维细胞作饲养层时传代培养效果较好，获得了PGCs增殖的未分化集落，为后期的细胞标记及移植研究提供了较多数量和较高活力的PGCs。[结论]获得了PGCs原代与传代培养较好的培芥体系，为禽类EG细胞系的建立和转基因研究奠定了基础。     

鸡原生殖细胞(PGCs)的提纯及其超低温保存

利用密度梯度离心从孵化51～56h的鸡胚血液中提纯PGCs，通过形态鉴别和过碘酸－希夫试剂染色方法判定提纯的PGCs的纯度在80％左右。将提取到的PGCs放入到含有10％二甲基亚砜的TCM－199中，在液氮中进行保存。将超低温冷冻保存了1个月、6个月和12个月的PGCs（各3管）分别复苏后，用台盼蓝染色，通过红细胞计数板计数鉴定冷冻保存了不同时间的PGCs的平均存活率分别为91．7％、92．6％和91．9％。结果表明所采用的冷冻保存的方法是可行的。所采用的超低温冷冻保存方法简单易行，为今后以PGCs为目的细胞进行超低温冷冻，而后制作种系嵌合体进行保种的研究提供有利的实践基础。     

鸡原始生殖细胞迁移和聚集规律的研究

研究表明：鸡的原始生殖细胞（ＰＧＣｓ）起源于孵化前胚盘的明区,而后逐渐迁移至胚体的头前侧部的生殖新月区,并于孵化约２２ｈ时,大量聚集于此（３１￣３８个）,随着鸡胚内,外血管的发育,ＰＧＣｓ则进入血管中,并顺着血管于孵化约３６ｈ（１０期）时首次迁移到胚体上。孵化至４４￣５２ｈ（１１￣１３期）时聚集（约１０５个）于胚体的心脏、大血管及头部间充质中。最后,ＰＧＣｓ于孵化６２ｈ（１７期）时大量迁移至胚体后     

鸡胚胎胸腺、胰腺、性腺的组织发生

在孵化的第4d,鸡胚胸腺的原基发生于第Ⅲ、Ⅵ咽囊的背壁上皮。到第9d,胸腺被间充质分叶。胸腺小体发生于第13d。在第15d,胸腺的皮质与髓质开始分化。到20～21d,在封闭的微血管周围,由数层网状细胞形成典型的胸腺小体。背侧胰芽及腹侧胰芽发生于孵化的第3～4d。到第15d,外分泌部由初期的复管状腺变成复管泡状腺。胰岛细胞团在第11d发生。随着鸡胚的发育,胰岛的数目逐渐增多。生殖嵴在第3d发生。到第4d,从卵黄囊内胚层来的原性细胞,便向雌性左侧的性腺转移。初级性索仲入髓质形成间质细胞。次级性索形成卵泡细胞。第5d时,雄性的初级性索,仲入间充质内形成曲细精管及间质细胞群的原基。第8d以后,性腺的性别可以区分。     

H2A变体在小鼠不同时期雄性生殖细胞核质区的分布

【目的】了解小鼠雄性生殖细胞中macro H2A、H2A.Z和H2A.X 3种组蛋白变体变化与其发育特征间的联系,为揭示原始生殖细胞（PGCs）的发育机理及其分子调控机制奠定基础。【方法】以C57BL/6J小鼠胚胎的中肾和生殖嵴为试验材料,通过免疫荧光染色技术检测11.5dpc、12.5dpc和13.5dpc不同发育时期含有PGCs的组织石蜡切片及单细胞中macro H2A、H2A.X和H2A.Z变体的分布情况。【结果】macro H2A变体在11.5dpc胚胎时主要存在于细胞质中,12.5dpc时在细胞质中的表达增强,但进入生殖嵴后（13.5dpc）表达消失;H2A.X变体在11.5dpc和12.5dpc时存在于PGCs的核质区,13.5dpc时主要存于细胞质,且呈聚集分布;H2A.Z变体在11.5dpc时在PGCs的核质区均有存在,12.5dpc和13.5dpc时主要分布在细胞核,且表达明显增强。【结论】随着PGCs的不断迁移、增殖与分化,macro H2A、H2A.X和H2A.Z 3种组蛋白H2A变体在细胞核质区的分布及表达情况也发生变化,即H2A变体分布特征与PGCs的性别分化及其有丝分裂停止相关。     

清水江鲤性腺的早期发育及Foxl2基因功能初步分析

为清水江鲤的人工选育提供理论基础，通过组织学切片观察不同时期清水江鲤性腺，并通过RACE及RT-PCR克隆清水江鲤Foxl2基因，对Foxl2的功能进行初步分析，以了解清水江鲤早期性腺发育及性腺发育过程中相关基因的表达。结果表明：清水江鲤性腺发育至孵化后90d的组织学切片仍不能明显分辨性别，孵化后120d的性腺出现初级精母细胞，孵化后150d的性腺出现初级卵母细胞，孵化后240d出现精细胞。清水江鲤存在2个Foxl2同源基因（Foxl2a与Foxl2b），表达模式表明Foxl2a和Foxl2b在清水江鲤雌性性腺的发育中能起到重要作用。     

低氧环境对良种鸡蛋孵化率的影响

西藏高原由于海拔高，氧分压低，使低海拔地区良种鸡种蛋在西藏地区的孵化率较低，仅为30％－35％。对伊莎褐鸡和拉萨白鸡的孵化率，蛋形指数，胚胎和雏鸡的血液生理指标进行了对比试验分析。结果表明，伊莎褐鸡胚和拉萨白鸡胚在同一孵化阶段的耗氧量、血液中血红蛋白含量、红细胞数等血液生理指标都有极显著差异（P＜0．01）；伊莎褐鸡的蛋壳较厚，壳膜的气体交换能力差，胚胎死亡主要集中在孵化早期（入孵后前5d)和晚期（入孵15d后），分别于这两个阶段输氧，在氧浓度达体积分数24％左右时可提高良种鸡蛋的孵化率30％以上。试验证明，缺氧是导致西藏高原良种鸡种蛋孵化率低的主要原因之一。     

鸡促性腺激素释放激素对鸡卵泡颗粒细胞孕酮分泌的影响

用不同剂量鸡促性腺激素释放激素（ｃＧｎＲＨ－Ｉ和ｃＧｎＲＨ－Ⅱ）单独或与鸡ＬＨ（ｃＬＨ）协同处理短期（３ｈ）培养的鸡卵泡颗粒细胞，以观察鸡ＧｎＲＨ对颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果表明：随着卵泡的成熟，孕酮分泌量逐渐增加，到Ｆ１卵泡时增加最明显；在本实验所用细胞孕酮分泌都有明显促进作用，ＧｎＲＨ－Ⅱ使Ｆ２至Ｆ４卵泡颗粒细胞孕酮分泌量有增加，而对Ｆ３卵泡颗粒细胞作用量明显，用鸡ＧｎＲＨ－Ⅱ的促进作用更明     

塞北乌骨鸡和罗曼鸡种蛋孵化性能的比较研究

目的比较研究塞北乌骨鸡和罗曼鸡种蛋的孵化性能，为塞北乌骨鸡系统化选育提供可借鉴的方向．方法分别选取塞北乌骨鸡种蛋和罗曼鸡种蛋5000枚，按种蛋保存的不同时间（3d、6d、9d、12d、15d），各分为五组，研究两个品种鸡种蛋在孵化过程中的失重率以及不同保存时间对失重率和孵化率的影响．结果塞北乌骨鸡胚蛋在孵化过程中失重率均大于罗曼鸡（p〈0．05）；塞北乌骨鸡不同保存时间（3d、6d、9d、12d、15d）种蛋失重率、18龄胚胎失重率、孵化率均大于罗曼鸡（p〈0．05）；塞北乌骨鸡种蛋保存时间15d，出雏时间推迟，罗曼鸡种蛋保存时间12d，出雏时间推迟；种蛋不同保存时间对雏鸡重无影响．结论塞北乌骨鸡种蛋保存时间比罗曼鸡长，但种蛋失重率、胚胎失重率、受精蛋孵化率相对较低，在以后的选育过程中需加强失重率和孵化率方面的选育．     

法国番鸭不同孵化阶段蛋壳内钙·磷含量的变化研究

[目的]为了了解法国番鸭胚胎发育期间钙、磷的吸收利用规律。[方法]通过对不同孵化时期法国番鸭蛋壳内钙、磷含量及比例进行测定,研究了不同孵化阶段蛋壳内钙、磷含量的变化。[结果]随着孵化时间的延长,蛋壳内钙、磷含量呈现逐渐降低的规律性。0～20胚龄,蛋壳内钙变化相对较小,20胚龄时钙含量突然降低,并持续至35d出雏;磷含量变化从8胚龄开始,28胚龄达最大,0～8和28～35胚龄蛋壳中吸收磷较少。孵化期间,8～28胚龄钙磷吸收比例呈逐渐上升趋势。[结论]孵化前期,钙的吸收较低,中后期较高,出雏前4d钙吸收最多。磷孵化前期变化不明显,中期较为明显,后期趋于稳定。该研究符合禽类胚胎发育规律。     

营养强化和控光控温对大菱鲆亲鱼性腺发育及卵子质量的影响

【目的】总结出一套有效的大菱鲆亲鱼培育技术,为大菱鲆育苗育种工作提供参考。【方法】通过人工控光控温,并投喂冰鲜杂鱼和强化饵料,研究大菱鲆亲鱼培育期间的控光控温和营养强化效果及其对亲鱼性腺发育、卵子质量的影响。【结果】经控光控温和营养强化后,大菱鲆亲鱼性腺开始发育提前67d,性腺发育时间缩短9d,产卵持续时间缩短18d,亲鱼平均产卵量867mL,受精卵活率高达80.1%,受精率67.3%,孵化率61.9%。进一步比较分析,发现控光控温能够使性腺发育时间提前60d,且能在一定程度上缩短性腺发育时间和产卵期;经营养强化后亲鱼产卵量、上浮卵量、上浮率及受精卵活率、孵化率均有显著提高。亲鱼产卵量与体重呈正相关,受精卵活率与孵化率也呈正相关。【结论】大菱鲆亲鱼经营养强化和控光控温后,卵子质量显著提高,性腺发育时间显著提前,实现了反季节产卵。     

营养强化和控光控温对大菱鲆亲鱼性腺发育及卵子质量的影响

【目的】总结出一套有效的大菱鲆亲鱼培育技术,为大菱鲆育苗育种工作提供参考。【方法】通过人工控光控温,并投喂冰鲜杂鱼和强化饵料,研究大菱鲆亲鱼培育期间的控光控温和营养强化效果及其对亲鱼性腺发育、卵子质量的影响。【结果】经控光控温和营养强化后,大菱鲆亲鱼性腺开始发育提前67 d,性腺发育时间缩短9 d,产卵持续时间缩短18 d,亲鱼平均产卵量867 mL,受精卵活率高达80.1%,受精率67.3%,孵化率61.9%。进一步比较分析,发现控光控温能够使性腺发育时间提前60 d,且能在一定程度上缩短性腺发育时间和产卵期;经营养强化后亲鱼产卵量、上浮卵量、上浮率及受精卵活率、孵化率均有显著提高。亲鱼产卵量与体重呈正相关,受精卵活率与孵化率也呈正相关。【结论】大菱鲆亲鱼经营养强化和控光控温后,卵子质量显著提高,性腺发育时间显著提前,实现了反季节产卵。     

丙酸睾酮对鸡胚性腺发育和成活率的影响

研究丙酸睾酮的剂量与注射时间对早期鸡胚性腺发育和成活率的影响。选择320枚种蛋(蛋重60.00 g±0.10 g),在入孵的0、3、6、9 d分别向蛋清内注射0.00、0.05、0.10和0.20 mL丙酸睾酮,共16个处理水平,孵化18 d后,形态学观察鸡胚性腺发育,统计其成活率及胚重。结果表明,丙酸睾酮对鸡胚性腺发育有显著影响(P<0.05),公鸡左侧睾丸或母鸡右侧卵巢发育均受到不同程度的影响。鸡胚性腺异常占总数的19.88%,其中公鸡占性腺异常总数的6.02%,母鸡占性腺异常总数的13.86%,且存在0.60%间性。随处理剂量的上升,鸡胚成活率及平均胚重不断下降,且随处理时间的延长,鸡胚成活率及胚重受到的影响程度逐渐降低。     

野鸭不同孵化阶段蛋壳内钙·磷·钾含量的变化研究

对不同孵化时期野鸭蛋壳内钙、磷、钾含量进行测定,结果表明:随着孵化时间不断延长,蛋壳内钙、磷、钾含量呈现一定的规律性。0～16胚龄,蛋壳内钙、磷变化相对较小,从16胚龄,钙含量突然降低,并持续至28胚龄,磷含量变化从8胚龄开始,16胚龄达最大,随后降低,22～28胚龄基本保持不变,同时各胚龄蛋壳中钙、磷比例也呈规律性变化;钾含量变化呈逐渐下降趋势。     

巴旦杏雌蕊形态及早期胚胎发生的研究

①巴旦杏雌蕊形态结构为：湿型柱头,花柱实心,子房１室,基生胎座,横生胚珠,双珠被,厚珠心,有珠孔塞。②巴旦杏存在明显的雌雄蕊异熟现象：花粉授粉后２ｈ左右便可萌发,而雌蕊胚囊在开花时仍处在４核期。观察的材料中,绝大部分胚囊在授粉第３天逐渐进入８核早期,第９天发育为成熟胚囊,胚囊为蓼型。③珠孔授精,花粉管最早在授粉第９天进入珠孔,第１０～１１天进入胚囊完成双受精。胚乳在授粉第１１天后出现,受精卵休眠１～２ｄ于授粉第１２天前后进行第一次分裂,胚胎发生为紫菀型。此外,本研究还对巴旦杏早期胚胎发生中胚珠的多糖和单宁物质动态进行了观察。     

鸡胚胸腺的组织发育

连续观察孵化至１４～２１日龄的鸡胚胸腺,详细描述了早日龄鸡胚胸腺的组织学分化发育过程。结果显示,胸腺完整组织结构的形成约在１８日龄。２１日龄出现的非炎性异嗜性细胞在胸腺组织分化发育过程中所起的作用值得注意。     

秦川牛胚胎冷冻保存效果

为探明秦川牛胚胎冷冻保存技术的可行性,将48头秦川牛母牛进行多次超数排卵处理、人工授精,并于授精后第7天非手术法获得胚胎,把获得的A级胚用不同浓度甘油(1.0~5.0 mol/L)和乙二醇(1.0~5.0mol/L)进行处理,并采用常规冷冻法和快速冷冻法进行冷冻,解冻后进行体外培养和不同发育阶段胚胎(桑椹胚、囊胚和扩张囊胚)移植,统计其存活率、孵化率和妊娠率等。结果表明:秦川牛7日龄胚胎能耐受甘油的浓度为2.0~4.0mol/L,乙二醇为1.0~3.0mol/L;常规冷冻法解冻后胚胎的存活率和孵化率显著(P0.05)高于快速冷冻法,胚胎移植妊娠率和产犊率差异不显著(P0.05);常规冷冻桑椹胚的冻后存活率、孵化率极显著(P0.01)低于囊胚和扩张囊胚,移植妊娠率和产犊率显著(P0.05)低于囊胚和扩张囊胚。