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相似文献
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1.
菊属植物RAPD反应体系的建立   总被引:12,自引:0,他引:12  
在RAPD反应中,有许多因素影响结果的稳定性和准确性.该文选取了菊属6种植物,对RAPD各种反应条件进行了摸索.结果表明:菊属植物较为理想的反应体系为:20μl反应体积含10mmol/lTris-HCl(pH为8.3),50mmol/lKCl,2mmol/lMgCl2,0.001%gelatin,200μmol/ldNTP,50~200ng引物,0.75~1.0单位(U)TaqDNApolymerase,2~10ng基因组DNA.在20个核苷酸引物情况下,反应条件为:92℃、3min预变性;92℃、45s,50℃、1min,72℃、2min,循环40周;最后一次延伸为72℃、10min.应用上述反应体系进行扩增反应,反应产物在2%琼脂糖凝胶上以5V/cm电场强度电泳2~4h,获得了满意的RAPD图谱  相似文献   

2.
马铃薯RAPD分析方法优化初探   总被引:12,自引:1,他引:11  
以云南马铃薯主要栽培品种为材料,使用进口PCR仪,对马铃薯RAPD分析中的DNA模板浓度、引物浓度、dNTP浓度以及PCR扩增反应循环次数进行报研究。结果表明适用于马铃薯RAPD反应的最佳条件为:模板DNA15 ̄50mg,10-mer随机引物25 ̄50ng,dNTP200μM,扩增反应周期40 ̄45个循环。每个循环包括94℃变性1min,37℃退火1min,72℃延伸2min。使用这一RAPD程序  相似文献   

3.
不同pH时磷酸盐对黄铁矿氧化的影响   总被引:1,自引:0,他引:1  
研究了25℃下,不同pH时磷酸盐(KH2PO4)对黄铁矿(FeS2)氧化的影响。流动态中,黄铁矿氧化服从假零级反应规律。经0.1mol/L H2O2+0.01mol/L KH2PO4混合液(pH分别为3,5和7)淋洗480min后,再经相应pH的0.1mol/L H2O2溶液淋洗400min,黄铁矿剩余百分率分别从对照的94.92%,97.52%和99.38%提高到98.15%,99.52%和99  相似文献   

4.
牛卵母细胞电激活参数的研究   总被引:5,自引:0,他引:5  
分析了影响牛体外成熟卵细胞激活的主要参数,初步建立了激活的实验程序。结果表明,卵母细胞激活率随着卵龄的延长、电场强度的增加以及电脉冲次数的增多百升高,含Ca62+、Mg^2+离子的电激液显著高于非电解质液。以0.3mol/L甘露醇+100μmol/LCaCl2+100μmol/L MgCl2为电激液,施加1.6kV/cm、160μs,3次电泳冲间隔15min,激活率、裂率、囊胚发育分别为86.0%  相似文献   

5.
分析了影响牛体外成熟卵母细胞电激活的主要参数,初步建立了电激活的实验程序。结果表明,卵母细胞激活率随着卵龄的延长、电场强度的增加以及电脉冲次数的增多而升高,含Ca2+、Mg2+离子的电激液显著高于非电解质液。以0.3mol/L甘露醇+100μmol/LCaCl2+100μmol/LMgCl2为电激液,施加1.6kV/cm、160μs,3次电脉冲间隔15min,激活率、卵裂率、囊胚发育率分别为86.0%,86.5%及48.9%  相似文献   

6.
家兔RAPD分析反应体系的优化   总被引:3,自引:0,他引:3  
《山东农业科学》1999,(5):15-17
以家兔的基因组DNA 为模板,研究影响家兔RAPD 扩增的因素。实验结果表明,Taq酶、随机引物和Mg2 + 浓度及模板DNA 的纯度对RAPD 扩增影响较大。本实验建立了适于家兔RAPD 分析的反应体系:反应体积为20μl,其中含有1 ×扩增缓冲液,2 .0m mol/L MgCl2 ,0 .1m mol/LdNTP,0-2μmol/L 随机引物,1 .5UTaq 酶,90ng 模板DNA  相似文献   

7.
以‘密本’南瓜作为筛选体系的材料,通过单因素试验对南瓜20μL SRAP-PCR扩增体系的Mg^2+、dNTP、 Taq酶、引物及DNA浓度和扩增程序的退火温度与循环次数进行优化,筛选出各组分的最佳浓度、最佳的退火温度和最佳循环次数。试验结果确立南瓜最佳的20μL SRAP体系为:0.2 mmol · L ^-1 dNTP ,1.5 U Taq酶,80 ng DNA ,0.16μmol·L^ -1的单条引物,Mg^2+1.5 mmol·L^ -1,2μL 10×Buffer ;最佳扩增程序为:94℃预变性5min;94℃1 min ,35℃1 min ,72℃1 min ,5个循环;94℃1 min ,52℃1 min ,72℃1 min 35个循环;最后72℃延伸10 min。选用17个南瓜品种对确立扩增体系及扩增程序进行验证,检测结果表现为扩增产物条带清晰明亮、多态性丰富、特异性强、重复性好,表明本试验所确定的反应体系及反应程序适用于南瓜的SRAP分子标记。  相似文献   

8.
三对水稻抗白叶枯病近等基因系的RAPD分析   总被引:3,自引:0,他引:3  
以水稻抗白叶枯病3对近等基因系为材料,对近等基因系基因组DNA进行了RAPD分析,结果显示;经120个10-核苷酸随机引物对3对近等基因系基因组DNA的PCR扩增,有2个引物在IRBB3中各扩增出1-2条特异性条带;有3人引物在IRBB4中各扩增出2条特异性条带;有3个引物在IRBB5中各扩增出1-2条特异性条带因轮回中和扩增出2条特异性条带;有3个引物在IRBB5中各扩增出1-2条特异性条带;在  相似文献   

9.
以假臭草叶片为材料,对影响其随机扩增多态DNA(RAPD)反应的各因素进行优化.建立了假臭草RAPD的优化反应体系和程序,即在10μL反应体系中,5ng(/10μL)模板DNA,1.0μmol/L随机引物F15,150μmol/LdNTPs,2.0mmol/LMg^2+,1.0UTaqDNA聚合酶;扩增程序为95℃预变性4min,95℃变性40S,36℃退火40S,72℃延伸1min,10个循环,后94℃变性30s,35℃退火30s,72℃延伸1min,35个循环,72℃延伸5min,4℃保温。  相似文献   

10.
[目的]建立快速检测沙门氏菌的环介导等温扩增(LAMP)技术。[方法]以沙门氏菌的特异性基因(invA)序列为靶序列设计引物,并对该序列进行等温扩增;对Mg2+浓度、反应温度和反应时间扩增条件进行优化,并对沙门氏菌进行检测和鉴定。[结果]在Mg2+浓度为2.0mmol/L时,62℃反应40min,扩增可达最佳效果,LAMP法检测的灵敏度为7.8cfu/ml。[结论]建立了快速检测沙门氏菌的LAMP技术,该方法灵敏度高、耗时短、方法简便,便于在基层推广,为检测食源性致病菌构建了一个技术平台。  相似文献   

11.
黄麻DNA提取与RAPD反应体系的建立   总被引:6,自引:0,他引:6  
以假黄麻、假长果、越南圆果 (圆果种黄麻 )等为材料 ,研究了黄麻 DNA的提取方法以及对 RAPD分析的影响因素 ,包括模板浓度、Mg2 + 、d NTP、引物和 Taq酶等 ,建立了适于黄麻种质 RAPD分析的 PCR反应体系 .即在 2 5μL反应体积中 ,Tris- HCl(p H8.0 )、KCl、Mg Cl2 、d NTP、随机引物的浓度分别为 10 mmol· L-1、5 0mmol·L-1、2 .5 mmol· L-1、15 0 μmol· L-1、0 .2 μmol· L-1,并含有 30 - 60 ng DNA与 1.5 U Taq DNA聚合酶 .扩增程序为 :94℃预变性 5 min;然后 94℃ 30 s,37℃ 1.5 min,72℃ 1min,4 1个循环 ;最后 72℃延伸 7mi  相似文献   

12.
黄藤ISSR反应体系的条件优化   总被引:17,自引:0,他引:17  
在利用ISSR技术对黄藤进行分子生物学研究过程中,对影响PCR扩增效果的一些因素,如模板DNA浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度以及退火温度等指标进行筛选和优化,获得用于黄藤ISSR-PCR分析最适宜的PCR反应条件:20μLPCR反应体积中含有1×缓冲液,20 ng模板DNA,2 mmol.L-1MgC l2,100μmol.L-1dNTP,1.5 U TaqDNA聚合酶,0.4μmol.L-1引物,2%甲酰胺,0.5 mmol.L-1亚精胺.扩增程序为:94℃预变性5 m in;再35个循环:94℃30 s,52℃45 s和72℃1.5 m in;最后72℃延伸7 m in.  相似文献   

13.
以荷花叶片提取的基因组DNA为材料,通过对影响ISSR-PCR扩增效果的一些因素,如dNTPs浓度、Mg2+浓度、TaqDNA聚合酶用量、引物用量、模板DNA用量以及退火温度等进行筛选和优化,确立了可用于荷花ISSR-PCR分析的最适宜的PCR反应体系:20μL PCR反应体积含0.4 mmol.L-1dNTPs、3.5 mmol.L-1Mg2+、1.5 UTaqDNA聚合酶、0.4μmol.μL-1引物、3 ng模板DNA。PCR扩增程序为:94℃预变性2 min,94℃变性30 s,54.5℃退火30 s,72℃延伸1 min,45个循环,最后72℃延伸7 min,置4℃保存。应用该ISSR体系对6份荷花种质进行了扩增,证实了该体系的适用性和稳定性。  相似文献   

14.
以福建含笑叶片提取的基因组DNA为材料,对影响ISSR-PCR扩增效果的一些因素,如dNTPs浓度、Mg2+浓度、TaqDNA聚合酶用量、引物用量、模板DNA用量以及退火温度等指标进行筛选和优化,确立了可用于福建含笑ISSR-PCR分析最适宜的PCR反应条件:20μL PCR反应体积中含0.4 mmol.L-1dNTPs,2.5 mmol.L-1Mg2+,1.5 UTaqDNA聚合酶,0.6μmol.μL-1引物,30 ng模板DNA。PCR扩增程序:94℃预变性2 min,94℃变性30 s,47.3℃退火30 s,72℃延伸1 min,45个循环,72℃延伸7 min,4℃保存。应用ISSR体系对5份福建含笑种质进行了扩增,证实了该体系的适用性和稳定性。  相似文献   

15.
减蛋综合征病毒环介导等温扩增检测方法的建立   总被引:1,自引:0,他引:1  
根据GenBank登录的减蛋综合征病毒(EDSV)六邻体基因的保守区,设计了3对环介导等温基因扩增(LAMP)引物,优化反应体系,并对其灵敏性、特异性进行验证.结果表明:LAMP优化后的反应体系为外引物浓度0.1μm01·L-1,内引物浓度0.8 μmol·L-1,环引物浓度0.4μmol·L-1,Mg2+浓度8.0 ...  相似文献   

16.
濒危树种格氏栲ISSR-PCR反应体系的建立   总被引:3,自引:0,他引:3  
以濒危珍稀树种格氏栲为材料,对ISSR反应体系中的各个主要影响因子进行优化筛选.首次建立可用于格氏栲ISSR-PCR分析的反应体系:20μL PCR反应体系中包括1ng·μL-1模板DNA,0.10 mmo1·L-1dNTP,2.0μL 10×PCR buffer (缓冲液),0.2μmol·L-1引物,0.037 5...  相似文献   

17.
九节茶ISSR反应体系的建立及优化   总被引:3,自引:1,他引:2  
以九节茶叶片提取的基因组DNA为材料,对影响ISSR-PCR扩增效果的一些因素,诸如dNTPs浓度、TaqDNA聚合酶用量、引物用量、模板DNA用量、退火温度以及循环次数等指标进行筛选和优化.结果表明:20μL ISSR反应体系含10×PCR Buffer、0.4 mmol.L-1dNTPs、2 UTaqDNA聚合酶、0.6μmol.μL-1引物、5 ng模板DNA;PCR扩增程序为:94℃预变性2 min,94℃变性30 s,44.8℃退火30 s,72℃延伸1 min,35个循环,最后于72℃延伸7 min,置4℃保存.应用该ISSR体系对10份九节茶种质进行了扩增,证实了该体系的适用性和稳定性.  相似文献   

18.
甜瓜SRAP-PCR程序和反应体系的优化   总被引:1,自引:0,他引:1  
以甜瓜品种炮台红和皇后为试验材料,对影响甜瓜SRAP-PCR反应体系的各因子进行了梯度试验,并对退火温度进行了探索,得到扩增多态性高、重复性好、带型清晰的SRAP-PCR反应程序和体系。反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,35℃退火1 min,72℃延伸1 min,共5个循环;94℃变性1 min,51℃退火1 min,72℃延伸1 min,共35个循环;72℃延伸10 min;4℃保存。反应体系(共25μL):DNA 45 ng,Mg~2+2.0mmol/L,dNTPs0.15 mmoL/L,primer 0.24/μmol/L,Taq polymerase 1.5 U。结果表明,该程序和体系能够较好的满足甜瓜基因组SRAP扩增的要求。  相似文献   

19.
香榧ISSR-PCR扩增条件的优化和引物筛选   总被引:1,自引:1,他引:0  
以香榧Torreya grandis ‘Merrillii’基因组DNA为材料,对影响简单序列重复区间扩增?鄄聚合酶链式反应(ISSR-PCR)的Taq酶用量、Mg2+浓度、模板DNA用量、磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)浓度和引物浓度等进行了优化试验。优化后的香榧ISSR-PCR扩增体系为:总容积20 μL,包括30 ng模板DNA,16.67 nkat Taq酶,0.350 μmol·L -1引物,1.625 mmol·L-1 Mg2+,0.250 mmol·L-1 dNTPs,10 × PCR buffer 2 μL。PCR扩增程序:94 ℃变性5.0 min;35个循环:94 ℃变性30 s,退火45 s,退火温度视引物而定,72 ℃延伸1.5 min;最后72 ℃延伸7.0 min,4 ℃保温。在此基础上,从77个ISSR引物中筛选出34个适合香榧ISSR分析的引物,且通过梯度PCR确定了各自最适的退火温度。研究结果为香榧遗传图谱构建打下了基础。图4表1参12  相似文献   

20.
牡丹ISSR-PCR反应体系正交优化设计   总被引:12,自引:1,他引:11  
王佳  胡永红  张启翔 《安徽农业科学》2006,34(24):6465-6466,6484
以“凤丹(”Paeonia ostii)基因组DNA为模板,采用正交试验设计方法,研究牡丹ISSR反应体系的影响因素,建立了适合牡丹的ISSR反应体系及程序。10 lμ反应体系为:1×反应缓冲液,2.5 mmo1/LMg2+,0.4 mmo1/LdNTPs,1.0 UTaq聚合酶,0.75μmol/L引物,10~20 ng模板DNA。反应程序为:94℃预变性3 min;94℃变性45 s,45~60(℃不同引物退火温度各异)复性45 s,72℃延伸90 s,35个循环;72℃延伸7 min;4℃保存。通过梯度退火试验,确定不同引物的退火温度。  相似文献   

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