促冻杀虫基因工程菌的构建

 利用转座酶基因位于转座单位以外的微转座子载体,将冰核基因iceA置于转座单位里,构建了携带iceA的自杀性工程质粒pTnice1, 并进一步利用该质粒的接合转移特性和Tn5转座功能,将iceA整合到阴沟肠杆菌染色体DNA上,成功地构建了在无选择压力下冰核基因仍稳定存在并有效表达冰核活性的促冻杀虫基因工程菌Enc1.2022ina。经应用试验证明,用该工程菌饲喂玉米螟幼虫,在饲菌后9 d内,虫体的过冷却点比不饲菌的对照提高10℃左右;在饲菌后第6天,于-5℃和-7℃低温下处理12 h,工程菌处理过的幼虫冻死率     

L-赖氨酸高产基因工程菌的构建

赖氨酸的高产菌株已通过经典的诱变法获得,但要再提高这些诱变株的产量就很困难.赖氨酸的生物合成很有规律,它不仅依赖于赖氨酸合成途径中的酶,而且依赖于驱动合成赖氨酸的碳源代谢的酶.为了提高赖氨酸产率,就要求改变碳源的供应,从而控制中间物向赖氨酸合成的转化.二氨基庚二酸合酶基因(dapA)和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(ppc)是菌体在赖氨酸合成代谢途径中,控制表达二氨基庚二酸合酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的关键基因.我们首先分别克隆这两个基因,并使之处于一定启动子控制下.然后将dapA和ppc重组克隆到同一个载体,并转化赖氨酸发酵菌,从而提高菌体内的酶活,进一步提高赖氨酸发酵产率.     

土壤环境污染及其生物修复工程

随着生物技术的发展,越来越多的人开始关注生物领域,开始认识到生物技术在保护生态环境及农业生产中的重要作用。生物技术不仅关系到农业的可持续发展,也关系到人类的生存环境和粮食安全。人类的长寿     

脂肪酶基因工程菌NJY-1-69产脂肪酶在制备生物柴油中的应用

主要考察了水的添加量、催化剂用量、醇油摩尔比、有机溶剂的添加、反应时间、反应温度、甲醇流加方式对生物柴油转化率的影响.结果表明,脂肪酶基因工程菌NJY-1-69产脂肪酶制备生物柴油的最佳工艺条件：水的添加量为0.15％,醇油摩尔比为3∶1,催化剂用量14％,反应温度30 ℃,反应时间36 h,甲醇流加方式是分3次加入,获得的生物柴油最高转化率为89％.     

植物内生细菌在生物修复方面的研究进展

内生细菌存在于每个植物体中,他们定殖于宿主植物的内部组织。内生细菌具有降解土壤污染物的潜能,从而增强植物的生物修复功能。本文主要论述植物内生细菌在植物修复和农业可持续发展方面的潜能。     

影响土壤中异噁草酮生物修复效果的因子研究

以玉米为指示植物,在设置不同的土壤湿度、添加不同的肥料和采用不同的接菌方式等条件下,通过作物的形态和生理指标系统地评价了(X、Y1、W2)3种微生物降解土壤中异噁草酮的效果。结果表明,当土壤湿度为田间持水量50%时,3个菌株对异噁草酮的降解效果均最好;在处理90d内,随着降解时间的延长,加入降解菌的处理对土壤的修复效果明显好于对照;添加肥料能够显著提高降解菌对土壤的修复作用,其中添加无机肥的降解效果明显好于有机肥。咽恶咽恶     

降解菌J3对茄科作物二氯喹啉酸药害的修复作用

为了明确二氯喹啉酸降解菌J3对茄科作物二氯喹啉酸药害的修复作用,在湖南农业大学教学实习基地进行了田间试验。结果表明:经降解菌J3处理后,茄子的叶长、叶宽、株高分别恢复到了空白对照的93.98%、91.88%、95.55%,而药害对照组茄子的叶长、叶宽、株高仅为空白对照的55.23%、49.71%、75.76%;降解菌处理后,烟草的叶长、叶宽及株高分别恢复到了空白对照组的90.95%、92.37%、91.91%,而药害对照组烟草的叶长、叶宽及株高仅为空白对照组72.81%、37.55%、68.45%。由此表明,二氯喹啉酸降解菌J3对茄科作物茄子、烟草的药害可以起到良好的修复效果,可以广泛用于田间作物二氯喹啉酸药害的生物修复。     

生物修复法及其在改善养殖水体中的应用

概述了生物修复法在改善养殖水体中的作用原理 ;介绍了具有生物修复作用的高效降解菌的种类及使用方法 ;并以华东师范大学用投菌法进行的养殖水体净化水质试验研究为例 ,介绍了该技术在生产实践中推广应用的可行性     

土壤中农药生物修复技术研究

利用人工投加菌对土壤中农药残留进行生物降解与修复的试验,分别探讨了外加菌在土壤中降解性能、在土壤中移动与存活时间、菌剂用量和最佳修复条件等。结果表明,本试验用的DUL-1菌对土壤中农药具有较强的降解能力,投加降解菌在土壤中的作用深度约0～6cm。在试验条件下,最适菌剂用量约30kg·hm^-2,对土壤中农药降解去除率达80％以上。本试验结果为开发农药污染土壤的生物修复技术提供了实验依据。     

基因工程菌的高密度发酵研究

就基因工程菌高密度发酵工艺的几个主要影响因素,包括重组菌构建、培养条件、生长抑制因子以及它们的控制技术等因素进行了综述;分析了这些因素对目的蛋白表达的影响;介绍了基因工程菌高密度发酵领域的一些研究进展.     

全球转基因作物的产量和销量

从1994年到现在,全世界转基因作物的种植生产和消费已经超过20年。转基因作物刚开始出现便立即被农民所接受。单单在2013年,全世界范围内包括棉花、玉米、大豆、油菜、甜菜和苜蓿在内的转基因作物种植面积已高达1.75亿hm2,有14个国家的转基因作物种植面积超过50万hm2。绝大多数转基因作物的两个典型优点是抗除草剂和抗虫。主要生产国的转基因作物普及率已经达到90%。如今,转基因作物在发达国家的种植面积比发展中国家更大。截至目前,还没有关于人类消费转基因作物以及含转基因成分食品的数据统计,绝大部分(约90%)的主要转基因作物被用作动物饲料,少数转基因作物,如木瓜、南瓜及甜玉米则被直接消费,油、淀粉、高果糖甜味剂、蔗糖和卵磷脂等来源于转基因作物的原料普遍被应用于食品产业。在美国超市,高达70%的产品中含有转基因成分,很多其他国家的人们也在消费这样的产品,尤其是那些没有要求转基因标识的国家和地区。在许多国家,一些非政府组织经常散布关于转基因食物的谣言,以达到阻挠公众接受转基因食物和转基因作物商业化的目的。遗憾的是,政府决策者的决定常常基于政治考虑,而非出于转基因作物的重要科学意义。     

除草剂污染地下水的生物治理模拟实验研究

利用从农药厂阿特拉津生产车间排污口污泥中分离出的菌种AT菌,进行了农药阿特拉津污染地下水微生物治理的模拟实验研究,在实验条件(10℃,pH7.5)与野外含水层的条件基本一致情况下,难于生物降解的污染质阿特拉津的一次投菌降解率达到31.08%;另外,设计了细菌的投放方式以模拟野外条件下的菌种投加条件。由于AT菌的作用会造成被治理含水层的渗透性能降低,实验后含水层的渗透系数下降60.54%,经清水冲洗10 d的渗透性恢复率为48.96%,说明清水渗透恢复的方法效果明显。     

基因工程菌漆酶降解2-氯苯酚的研究

利用基因工程菌甲醇毕赤酵母(PMAD16/pMET(A-Lcc1)培养产生的重组漆酶,研究了重组漆酶对降解2-氯苯酚的影响。结果表明:重组漆酶对2-氯苯酚降解的最佳pH值为6.0,温度为50℃,当溶液中漆酶活力为1.2 U/mL时,在最适脱色条件下作用6 h,粗漆酶和纯化漆酶对2-氯苯酚(250 mg/L)的降解率分别为91.3%和88.2%,重组漆酶可有效地降解2-氯苯酚。     

农田土壤中六溴环十二烷的污染过程以及生物修复方法研究进展

六溴环十二烷(Hexabromocyclododecane,HBCD)是一种广泛使用的添加型阻燃剂,其具有持久性、生物积累性、生物毒性以及可远距离迁移性等特点。HBCD不会直接施用于农田土壤,但会随着一系列的环境行为进入其中并被土壤有机质吸附,使土壤成为HBCD的"汇"。土壤中的微生物和植物等生物活动会使HBCD进入生物链并对人类健康造成威胁。土壤生物修复方法具有修复成本低、操作简单、高效安全等特性,符合农田土壤绿色发展的目标导向,越来越多地被应用到土壤修复当中。本文重点阐述了农田土壤中HBCD的污染过程,包括污染源、环境行为,并对HBCD的生物修复方法进行了总结分析,以期为农田土壤中HBCD的高效阻控以及污染土壤的绿色修复提供有益参考。     

除草剂阿特拉津污染地下水的生物治理研究

利用从农药厂阿特拉津生产车间排污口污泥中分离出的菌种AT菌，进行了农药阿特拉津污染地下水的微生物治理模拟实验研究。结果表明，在实验条件(t=10℃，pH＝7．5)与野外含水层的条件基本一致的情况下，难于生物降解的污染物质阿特拉津的一次投菌降解率达到26．29％；同时环境因素也随着AT菌作用的变化而变化，其中，DO、Eh、pH随AT菌作用的加强而其值减小。另外，设计了细菌的投放方式以模拟野外条件下的菌种投加条件。模拟实验为野外的原位治理提供了理论和方法依据。     

产L-精氨酸基因工程菌发酵培养基优化

以基因工程菌Escherichia.coli LGE35 (Thr-,Met-, Kan+)为实验菌株,利用SAS软件中的Plackett- Burman设计法,对影响菌株发酵生产L-精氨酸的八个因素进行了筛选,确定了蔗糖、硫酸铵和酵母粉为影响摇瓶发酵生产L-精氨酸的主要因素.利用响应曲面分析法对这三个主要因素的最佳水平及其交互作用进行了研究,建立了二次回归方程:Y=14.397+1.177 812 X1+0.701 125 X2-1.058 062 X3-1.067 688 X1X1+0.100 5 X1X2-1.244 813 X2X2+0.469 375 X1X3+1.296 25 X2X3-1.873 437 X3X3,并最终确定了发酵培养基为:蔗糖 71 g/L,硫酸铵31 g/L,酵母粉14 g/L,硫酸镁1 g/L,磷酸氢二钾3 g/L,L-蛋氨酸150 mg/L,L-苏氨酸100 mg/L,卡那霉素50 mg/L,VB1 100 mg/L.与对照相比,在此条件下L-精氨酸产量提高了19.26;,残糖降低了33.04;.     

第一、二代转cp4-epsps基因大豆鉴定方法的建立

[目的]建立一种广谱性鉴定第一、二代转cp4-epsp基因大豆的检测方法,为准确鉴定第一、二代转cp4-epsps基因大豆及其产品提供技术支持.[方法]根据第一、二代转基因大豆的cp4-epsp基因保守序列设计一对能同时鉴定两代转基因大豆外源基因cp4-epsps的引物和探针,建立一种广谱性鉴定第一、二代转cp4-epsps基因大豆的方法,并从准确性、特异性、灵敏性及重复性4个方面对该方法进行评估.[结果]设计的引物/探针对鉴定第一、二代转cp4-epsps基因大豆及其产品具有广谱性;建立的检测方法能检测到反应体系中低至5×100拷贝的cp4-epsps基因,Ct为38.88,且能同时检测出两代转基因大豆.准确性和特异性评估结果显示仅两代转cp4-epsp基因的大豆能被检测到;40次重复试验结果显示,反应体系中5×100拷贝的cp4-epsps基因片段的检出率为100%.[结论]建立的第一、二代转cp4-epsps基因大豆鉴定方法具有特异强、灵敏度高、重复性好、准确性高等特点,可用于转cp4-epsp基因大豆及其产品的监测.     

华南地区猪场环境中蔬菜细菌携带耐药基因情况调查

【目的】了解华南地区猪场环境中蔬菜样品附生细菌和内生细菌的耐药基因携带情况.【方法】采用PCR结合测序的方法检测氨基糖苷类、四环素类、β-内酰胺类、喹诺酮类、大环内酯类和林可霉素类耐药基因的携带情况.【结果和结论】四环素类耐药基因的分布范围比较广,附生细菌和内生细菌中此类耐药基因的场区检出率均为90%(9/10);蔬菜样品附生细菌和内生细菌所含的耐药基因是有差别的,而且附生细菌中的耐药基因比内生细菌的丰富,A、B、C、D、E、F、G、H、I和J样品附生细菌耐药基因的检出率分别是77.78%(21/27)、92.59%(25/27)、92.59%(25/27)、51.85%(14/27)、33.33%(9/27)、92.59%(25/27)、77.78%(21/27)、7.41%(2/27)、81.48%(22/27)和77.78%(21/27),内生细菌耐药基因的检出率分别是0(0/27)、11.11%(3/27)、11.11%(3/27)、11.11%(3/27)、29.63%(8/27)、48.15%(13/27)、29.63%(8/27)、33.33%(9/27)、25.93%(7/27)和22.22%(6/27).表明蔬菜中细菌的耐药情况,尤其是附生细菌的耐药情况可能已经非常严重,长此以往甚至会抑制作物生长,并且通过食物链危及动物和人体健康,应引起足够的重视.