玉米蛋白粉替代部分鱼粉对凡纳滨对虾抗病力及非特异性免疫力的影响

[目的]研究玉米蛋白粉替代部分鱼粉对凡纳滨对虾抗病力和部分非特异性免疫力的影响。[方法]以凡纳滨对虾幼虾为试验对象,以鱼粉、豆粕、肉粉和花生粕为蛋白源配制对照饲料,用玉米蛋白粉替代部分鱼粉配制3种与对照饲料等氮、等能的试验饲料。其玉米蛋白粉用量分别为5％、10％、15％,替代鱼粉的水平分别为8．6％。17．2％和25．8％。饲养45d后,检测凡纳滨对虾溶菌酶和超氧化物歧化酶活性,采用浸泡法进行哈维氏弧菌攻毒试验,计算存活率和免疫保护率。[结果]试验表明,随着试验饲料中玉米蛋白粉用量的增加,凡纳滨对虾对哈维氏弧菌的抵抗力增强,但玉米蛋白粉代替鱼粉对凡纳滨对虾的抗病力没有显著影响（P〉0．05）;对照组凡纳滨对虾肝胰脏和肌肉中溶菌酶活性分别为3．96和2．69U／mg prot．肝胰脏和肌肉中超氧化物歧化酶活性分别为10．95和11．49NU／mgprot,玉米蛋白粉替代鱼粉对凡纳滨对虾肌肉和肝胰脏中溶菌酶和超氧化物歧化酶活性影响不显著（P〉0．05）。[结论]该试验条件下,玉米蛋白粉使用量不超过15％（替代25．8％鱼粉）．不影响凡纳滨对虾抗病力及溶菌酶、超氧化物歧化酶活性。     

凡纳滨对虾Toll受体和溶菌酶mRNA组织表达的差异研究

采用荧光定量PCR技术,检测了凡纳滨对虾不同组织(血淋巴、鳃、肌肉和肝胰腺)中Toll受体和溶菌酶mRNA的相对表达量。结果表明:凡纳滨对虾Toll受体和溶菌酶mRNA在不同组织间的表达量存在显著差异。Toll受体mRNA在各组织中的相对表达水平由高到低顺序依次为血淋巴>鳃>肌肉>肝胰腺。溶菌酶mRNA表达水平则依次为血淋巴>鳃>肌肉>肝胰腺,但血淋巴和鳃之间无显著差异。溶菌酶mRNA和Toll mRNA表达量重复测定间的变异度在血淋巴和鳃组织间无显著差异。表明鳃和血淋巴是检测凡纳滨对虾Toll受体和溶菌酶mRNA的相对表达量的理想实验材料。研究亮点:Toll受体能够将异物入侵的信号从细胞外传递到细胞内并引起胞内信号级联反应产生各种免疫效益因子,因此其表达水平一定程度上可以反映对虾对病原入侵的灵敏性。溶菌酶活性是评判对虾免疫抗菌能力的重要指标。研究Toll受体和溶菌酶基因表达的组织差异性,可以为后续开展对虾营养免疫学研究中免疫相关基因检测时实验材料的选取提供理论基础。     

pH胁迫对3种对虾存活率、离子转运酶和免疫酶活力的影响

比较研究了中国明对虾（Fenneropenaeus chinensis）、凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）和日本囊对虾（Marsupenaeus japonicus）在对照组（pH 8.2）、低pH胁迫组（pH 7.2）和高pH胁迫组（pH 9.2）养殖水体条件下的存活率、鳃离子转运酶（Na⁺-K⁺-ATPase）活力及血淋巴iNOS、PO、SOD、GSHPX、LSZ活性。结果表明：对照组3种对虾的存活率整个实验期间均为100％;低pH和高pH胁迫条件下,日本囊对虾存活率分别为96.7％和97.0％;凡纳滨对虾存活率分别为60.1％和54.6％,中国明对虾的存活率分别为58.6％和13.3％。对照组条件下,凡纳滨对虾鳃离子转运酶（Na⁺-K⁺-ATPase）活力最大,中国明对虾其次,日本囊对虾最小;在低和高pH胁迫条件下,中国明对虾鳃Na⁺-K⁺-ATPase活力变化幅度均比凡纳滨对虾大,日本囊对虾的变化幅度最小,并且3种对虾鳃Na⁺-K⁺-ATPase活力在高pH胁迫条件下变化幅度均较大。对照组条件下日本囊对虾和凡纳滨对虾血清中非特异性免疫酶活性均显著或极显著高于中国明对虾,且日本囊对虾的PO、SOD活力分别显著、极显著高于凡纳滨对虾;在低和高pH胁迫条件下,中国明对虾和凡纳滨对虾血清非特异性免疫酶的活力变化幅度均显著高于日本囊对虾。中国明对虾和凡纳滨对虾血清iNOS、SOD、GSHPX、LSZ活力在低pH条件下变化幅度较大,而PO活力在高pH条件下变化幅度较大。综合上述结果显示3种对虾相比,日本囊对虾对pH胁迫的耐受性较强,凡纳滨对虾次之,中国明对虾较弱。     

绿原酸对凡纳滨对虾抗氧化系统及抗低盐度胁迫的影响

对绿原酸调节凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)血淋巴抗氧化系统功能及抗低盐度胁迫的效果进行了评价。360尾凡纳滨对虾随机分为4组,分别投喂含有0、100、200和400 mg/kg绿原酸的饲料28 d,随后将对虾从盐度为32的天然海水直接转入至盐度为10的水中胁迫72 h。结果表明,在正常养殖条件下,绿原酸对凡纳滨对虾的成活率、血淋巴总抗氧化能力(Total antioxidative capacity, T-AOC)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)及过氧化氢酶(Catalase, CAT)活力均无明显影响,然而投喂含有绿原酸的饲料14 d,对虾血淋巴谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase, GPx)活性和血淋巴细胞GPx和CAT基因表达水平均显著高于对照组(P<0.05);低盐度胁迫24 h,绿原酸组凡纳滨对虾的存活率较对照组提高10%,但各组之间无显著性差异(P>0.05);低盐度胁迫24 h,各组凡纳滨对虾血淋巴T-AOC、SOD和GPx活性与胁迫前相比均显著增加,说明低盐度胁迫条件下机体产生了抗氧化胁迫反应,同时绿原酸组对虾血淋巴GPx、CAT活性均显著高于对照组(P<0.05);低盐度胁迫72 h,绿原酸组对虾血淋巴T-AOC、GPx和CAT活性和血淋巴细胞GPx和CAT基因表达水平均明显高于对照组。上述结果表明绿原酸可有效调节凡纳滨对虾的抗氧化系统功能,增强对虾对于低盐度胁迫下的适应能力。     

水温骤降后凡纳滨对虾血清中NO、NOS水平及对副溶血弧菌的敏感性

测定了水温骤降后(A组(25→22℃)、B组(25→19℃)、C组(25→16℃)、对照组(25℃))6、24 h凡纳滨对虾Penaeus vannam ei血清中一氧化氮(NO)的浓度、一氧化氮合成酶(n i-tric oxide synthase,NOS)的活性以及溶菌酶活力的变化,并在水温变化后24 h用副溶血弧菌Vibrioparahaem olyticus对对虾进行人工感染,以评价凡纳滨对虾对副溶血弧菌的敏感性。结果表明,水温骤降后6 h,各试验组对虾血清中NO浓度、NOS活性、溶菌酶活力均与对照组差异不显著(P>0.05)。水温骤降后24 h,B组对虾血清中NO浓度显著高于对照组(P<0.05),A、C两组与对照组差异不显著(P>0.05);B组对虾血清中NOS的活性显著高于对照组(P<0.05),C组显著低于对照组(P<0.05),A组与对照组差异不显著(P>0.05);各试验组对虾血清中的溶菌酶活力与对照组差异不显著(P>0.05);用副溶血弧菌人工感染对虾的死亡率C组为58.3%,与对照组(33.3%)存在显著差异(P<0.05)。这说明水温大幅度急剧下降后,凡纳滨对虾血清中的NOS活性、溶菌酶活力下降,因而导致凡纳滨对虾对副溶血弧菌的敏感性升高。     

祛风活血丸对实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠JAK2 mRNA和STAT3 mRNA表达的影响

目的 观察祛风活血丸对实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠视网膜JAK2及STAT3 mRNA表达的影响。方法 将80只（160眼）雄性Lewis大鼠根据随机数字表法随机抽取16只作为空白组（A）,对其余64只大鼠进行实验性自身免疫性葡萄膜炎模型制作。造模成功后,根据随机数字表法将其随机分为模型组（B）、祛风活血丸常规剂量组（C）、祛风活血丸两倍剂量组（D）、熊胆开明片组（E）。干预14 d后用qPCR法检测大鼠视网膜组织中JAK2 mRNA和STAT3 mRNA的相对表达量。结果 JAK2 mRNA：与B组比较,C组、E组表达降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,D组表达显著降低,差异具有统计学意义（P<0.01）;STAT3 mRNA：与B组比较,C、D、E组表达均降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 祛风活血丸能降低实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠JAK2、STAT3 mRNA的表达,抑制JAK2/STAT3信号通路,达到抗炎作用。     

跌打通痹膏对兔膝骨关节炎关节软骨MMP-13、Ⅱ型胶原mRNA表达的影响

目的 观察跌打通痹膏对兔膝骨性关节炎关节软骨基质金属蛋白酶-13（MMP-13）、Ⅱ型胶原mRNA（COL-Ⅱ mRNA）表达的影响。方法 选用65只新西兰兔随机分成正常对照组、假手术组、模型组、跌打通痹膏组、骨通贴组,每组13只。模型组、跌打通痹膏组、骨通贴组采用改良Hulth造模法,正常组、假手术组不予处理,模型组、跌打通痹膏组、骨痛贴组分别用肢带、跌打通痹膏、骨痛贴膏贴敷4周,观察治疗后各组实验兔关节软骨改变情况,并检测关节软骨中MMP-13、COL-Ⅱ mRNA的表达。结果 （1）组织学关节软骨评分:跌打通痹膏组评分较模型组低（P<0.05）。（2）WMP-13mRNA检测：模型组MMP-13表达较正常对照组显著提高（P<0.01）,跌打通痹膏组MMP-13 mRNA表达较模型组降低（P<0.01）。（3）COL-Ⅱ mRNA检测：跌打通痹膏组COL-Ⅱ表达较模型组升高（P<0.01）。结论 跌打通痹膏能通过降低Ⅱ型胶原降解,抑制MMP-13 mRNA表达,从而有效保护膝骨关节炎模型兔关节软骨,延缓关节软骨退变。     

酵母铬和二氢吡啶对热应激围产期奶牛生理生化指标及HSP70 mRNA表达量的影响

为确定酵母铬和二氢吡啶是否能缓解围产期奶牛热应激,将24头体质量和胎次相近的围产期荷斯坦奶牛随机分为3组,饲养于环境温湿指数（THI）高于68的热应激条件下,对照组饲喂基础日粮,酵母铬组和二氢吡啶组饲喂基础日粮的同时饲喂8 g/（头·d）铬含量为1‰的酵母铬和3 g/（头·d）的二氢吡啶,试验周期为40 d,观测酵母铬和二氢吡啶对围产期奶牛热应激反应的影响。结果显示：① 酵母铬组和二氢吡啶组奶牛与对照组奶牛在呼吸频率上无显著差异（P>0.05）。② 各组奶牛血清中血糖和胆固醇含量在产前第7天与产后第3天均无显著差异。二氢吡啶组奶牛产前第7天血清中甘油三酯含量显著降低（P<0.05）。③ 与对照组比较,酵母铬组和二氢吡啶组产前、产后血清中Na⁺、K⁺、Cl^-的浓度均无显著差异（P>0.05）,各组在产前、产后血清中碱性磷酸酶和肌酸激酶的含量也均未出现显著变化（P>0.05）。④ 酵母铬组、二氢吡啶组与对照组奶牛血清中热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）基因mRNA表达量没有明显差异（P>0.05）。以上结果表明,热应激条件下,在围产期奶牛日粮中添加8 g/（头·d）铬含量为1‰的酵母铬和3 g/（头·d）二氢吡啶对血液生化指标和HSP70 mRNA表达量均无显著影响,说明日粮中添加8 g/（头·d）铬含量为1‰的酵母铬和3 g/（头·d）二氢吡啶对缓解围产期荷斯坦奶牛热应激无明显效果。     

5种中草药对凡纳滨对虾生长及非特异性免疫功能的影响

[目的]筛选促进生长和调节凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)非特异性免疫功能的中草药免疫调节剂。[方法]分别采用质量分数为2%的鱼腥草、黄芪、大黄、甘草和黄芩的水提取物饵料连续28d饲喂凡纳滨对虾,在不同时间取样,测定血清中的酚氧化酶、溶菌酶、超氧化物歧化酶和血清蛋白含量等免疫因子的活性。[结果]结果表明:饲喂黄芪、大黄和甘草的各组增长率和相对增重率显著高于对照组(P<0.05);除个别情况外,黄芪、大黄、甘草和黄芩组的酚氧化酶活力、溶菌酶活力、超氧化物歧化酶活力和血清蛋白含量均极显著高于对照组(P<0.01);黄芪、大黄和甘草能够促进凡纳滨对虾的生长及非特异性免疫功能,鱼腥草则相反;饲养试验结束后第7天,腹腔注射鳗弧菌进行攻毒试验,在7d内,鱼腥草组累计死亡率高于对照组;黄芩组累计死亡率与对照组相同,黄芪、大黄和甘草的累计死亡率均低于对照组,免疫保护率为37%～46%。[结论]从促进生长、提高免疫功能这两方面考虑,黄芪、大黄和甘草是适合凡纳滨对虾的中草药免疫调节剂。     

饲料胆固醇含量对凡纳滨对虾免疫相关基因表达及耐低温低溶解氧胁迫能力的影响

为探究饲料中胆固醇含量对淡水养殖凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)免疫相关基因表达及耐低温低溶解氧胁迫能力的影响,在鱼粉含量为10%的基础饲料中分别添加0、1.0、2.0、3.0、4.0 g/kg的胆固醇,制成5组等氮等能饲料(C0、C1、C2、C3和C4,实测胆固醇含量依次为0.78、1.57、2.45、3.43和4.18 mg/g)投喂初始体质量为(0.14±0.03) g的凡纳滨对虾。养殖8周后检测对虾耐低温和低溶解氧胁迫的能力以及急性感染副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)后免疫相关基因(Toll受体、IMD和溶菌酶mRNA)相对表达量。结果表明:饲料胆固醇含量显著影响弧菌急性感染后对虾鳃组织Toll受体、IMD和溶菌酶mRNA相对表达量。在弧菌感染进程中,C2组对虾Toll受体和溶菌酶的mRNA表达量表现出最大的变化幅度;而IMD mRNA表达量最大变化幅度出现在C1组,其次为C2组。急性感染弧菌后各组对虾Toll受体和溶菌酶mRNA相对表达量峰值均出现在感染后24 h;C2、C3和C4组IMD mRNA表达量峰值出现在感染后24 h,而C0和C1组IMD mRNA表达量峰值出现在感染后42 h。急性程序降温胁迫下,C0和C4组对虾100%死亡的温度为15℃;而其他组对虾100%死亡的温度为14℃。急性低溶解氧胁迫下各组对虾的耗氧量和致死溶氧浓度无显著性差异。综上所述:在淡水养殖条件下,饲料中2.45 mg/g的胆固醇含量可以提高凡纳滨对虾的免疫灵敏性,而饲料中胆固醇含量为(1.57～3.43) mg/g时凡纳滨对虾表现出较好的抗低温胁迫能力。     

复方中药对断奶獭兔盲肠内环境及脾脏IFN-γ、IL-10 mRNA表达的影响

【目的】研究复方中药（cCHM）添加剂对断奶獭兔盲肠内环境及脾脏IFN-γ、IL-10 mRNA表达的影响,探讨其对机体抗病能力的调控作用及适宜用量。【方法】选用（35±2）日龄断奶、体质量相近的獭兔144只,随机分为对照组和3个试验组,每组6个重复,每重复6只幼兔。对照组饲喂添加0.1 g/kg杆菌肽锌的日粮（不含抗生素等其他药物）,试验组分别饲喂添加复方中药5 g/kg（cCHM1组）、10 g/kg（cCHM2组）、20 g/kg（cCHM3组）的日粮,60 d后,取脾脏和盲肠样品,测定盲肠微生物活力和数量,检测IFN-γ、IL-10的相对表达量。【结果】与对照组相比,cCHM2组獭兔盲肠内容物氨氮（NH₃-N）浓度降低21.62%,菌体蛋白（MCP）含量提高16.81%,差异显著（P＜0.05）。复方中药抑制大肠杆菌的效果不及抗生素,但cCHM2组、cCHM3组乳酸杆菌数量较对照组分别提高18.31%和16.50%,差异显著（P＜0.05）。复方中药提高了脾脏IFN-γ、IL-10 mRNA的相对表达量,cCHM2组和cCHM3组均极显著高于对照组（P＜0.01）。【结论】复方中药添加剂可改善断奶獭兔盲肠内环境,增强机体的免疫功能,有利于断奶獭兔的肠道健康;该试验条件下复方中药添加剂的适宜用量为10 g/kg。     

饲料中用花生粕替代鱼粉对凡纳对虾生长和氨基酸组成的影响

以饲料中鱼粉添加量为36％（质量分数）作为对照组（A组,粗蛋白质的质量分数为40％）,用花生粕分别替代饲料配方中10％、20％、30％、40％、50％的鱼粉,配成5种等氮对虾试验饲料（B～F组）,饲喂凡纳对虾Litopeaneus vannamei 56d,研究了不同饲料对凡纳对虾生长性能和虾体氨基酸组成的影响。结果表明：饲养28d时,各饲料组凡纳对虾的增重率、成活率、饲料系数、蛋白质效率均无显著差异（P〉0．05）。饲养56d时,随着用花生粕替代鱼粉比例的增加,对虾的增重率呈现下降趋势,F组对虾增重率仅为1932．4％,显著低于其他饲料组（P〈0．05）;对虾成活率也呈现降低的趋势,但组间并无显著差异;各组饲料系数亦无显著差异（P〉0．05）;当用花生粕替代鱼粉超过30％时,D、E、F组蛋白质效率均显著低于对照组（P〈0．05）;随着用花生粕替代鱼粉比例的增加,虾体的蛋氨酸呈现与饲料蛋氨酸含量同步降低,而精氨酸呈现同步增加的变化趋势。综合各项指标,说明凡纳对虾饲料中用花生粕替代20％鱼粉是完全可行的。     

高蛋白饲粮对肉鸡肾氧化损伤及黄嘌呤氧化酶基因mRNA表达量的影响

【目的】研究高蛋白饲粮对肉鸡肾氧化损伤及黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase,XOD）的影响。【方法】选取120羽20日龄健康白羽肉杂鸡,随机分为4组,每组5个重复,每个重复6羽。对照组饲喂基础饲粮（蛋白质含190 g/kg）,试验组饲喂在基础饲粮中添加豆粕使粗蛋白含量分别达到220,250,280 g/kg的饲粮。试验期为14 d。于试验第0,7和14天,分别从每组随机选取5羽鸡经翅下静脉采血,分离血清,用于肾功能（血清钙（Ca）、肌酐（CREA）、尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、血清磷（P）、镁（Mg）含量）、脂质过氧化（血清丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、羟自由基（·OH）含量和总抗氧力（T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性）及XOD活性检测。试验结束时,每组选5羽鸡进行解剖,取肾脏组织,用于检测XOD基因mRNA的表达量。【结果】1）与对照组相比,各高蛋白饲粮组肉鸡血清Ca、CREA、BUN、UA含量显著或极显著上升（P＜0.05或P＜0.01）,血清P、Mg含量变化不显著（P＞0.05）。2）与对照组相比,各高蛋白饲粮组肉鸡血清MDA、NO、·OH含量显著或极显著升高（P＜0.05或P＜0.01）,T-AOC、GSH-Px、SOD活性显著或极显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。3）与对照组相比,各高蛋白饲粮组XOD活性显著升高（P＜0.05）,肾组织XOD mRNA表达量显著增加（P＜0.05）。【结论】高蛋白饲粮可改变肉鸡肾功能与脂质过氧化,导致血清XOD活性以及肾组织XOD mRNA表达量升高,导致鸡肾脏损伤。     

青光安Ⅱ号对慢性高眼压模型大鼠视网膜GSK-3β及β-catenin mRNA表达影响

目的 观察青光安Ⅱ号方对慢性高眼压模型大鼠视网膜GSK-3β及β-catenin mRNA表达影响。方法 将40只（80眼）雄性SD大鼠随机分成6组,分别为：空白组（A）,模型组（B）、青光安Ⅱ号方低剂量组（C）、青光安Ⅱ号方中剂量组（D）、青光安Ⅱ号方高剂量组（E）、益脉康分散片组（F）。将B、C、D、E、F组大鼠采用烧灼巩膜表浅静脉法建立大鼠慢性高眼压模型。模型大鼠维持高眼压状态2月后开始干预,干预后2周、4周分别用qPCR检测大鼠视网膜GSK-3β及β-catenin mRNA的相对表达量。结果 2周后,与B组比较,各组GSK-3βmRNA表达降低而β-catenin mRNA表达升高,差异有统计学意义（P<0.05）。4周后,与F组比较,C、D、E组GSK-3βmRNA降低,β-catenin mRNA表达升高,差异有统计学意义（P<0.05）。与E组比较,C、D组GSK-3βmRNA降低而β-catenin mRNA表达升高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 青光安Ⅱ号方及益脉康分散片均能抑制GSK-3βmRNA的表达,并增加β-catenin mRNA的相对表达量,对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞有一定的保护作用;初步观察表明复方中药青光安Ⅱ号方在对慢性高眼压大鼠视神经的保护中,效果优于益脉康分散片,且以青光安Ⅱ号方高剂量最优。     

不同剂量复方中草药免疫增强剂对草鱼生长性能和免疫功能的影响

将制备好的中草药免疫增强剂（黄芪、大蒜、菊花、山楂和板蓝根五味中草药按等比的水提取物）分别按质量分数1%、2%、4%、8%的比例添加到基础饲料中,饲喂草鱼(27.84?1.57)g 30 d,研究不同剂量的复方中草药免疫增强剂对草鱼生长性能和免疫功能的影响。结果显示:与对照组相比,1%组、2%组、4%组显著提高了草鱼的增重率（WGR）和特定生长率（SGR）,且4%组显著高于1%组和2%组（P<0.05）。各试验组的吞噬细胞吞噬活力均显著高于对照组（P<0.05）。各试验组的血清溶菌酶(LSZ)活力和血清超氧化物歧化酶活力(SOD)均极显著提高(P<0.01)。经嗜水气单胞菌攻毒后,各试验组的免疫保护率均极显著提高(P<0.01),且4%组最高为70.28%?6.26%。结果表明该复方中草药免疫增强剂在饲料中适宜添加量为4%。     

微囊蛋氨酸对凡纳滨对虾生长的影响

为降低凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖的饲料成本,采用2组等量蛋白质等量能量饲料,高鱼粉组和低鱼粉+微囊蛋氨酸组,饲养初始质量为(0.54±0.02)g的凡纳滨对虾,经过56 d的生长试验,观察微囊蛋氨酸对凡纳滨对虾的增重率、成活率、机体营养组成的影响。结果表明,高鱼粉组与低鱼粉+微囊蛋氨酸组凡纳滨对虾的增重率、成活率、特定生长率、饲料系数、全虾水份、蛋白质含量都没有显著差异(P0.05);2组的饲料系数均较低,分别为1.23和1.12;高鱼粉组肝胰腺脂肪含量显著高于低鱼粉+微囊蛋氨酸组(P0.05)。     

多糖、寡糖、蛋白酶对凡纳滨对虾生长、消化酶活性及血清非特异性免疫的影响

在基础饲料(对照组)中分别添加0.2%β-葡聚糖、0.05%黄芪多糖、0.4%甘露寡糖、175 mg/kg蛋白酶PT,饲喂初始体重为(4.55±0.08)g的凡纳滨对虾(Litopnnaus vannamei)6周,考察对凡纳滨对虾生长性能、血清非特异性免疫及消化酶活性的影响。结果表明:与对照组相比,饲料中添加0.2%β-葡聚糖、0.4%甘露寡糖及175 mg/kg蛋白酶PT可分别提高凡纳滨对虾增重率16.19%、12.78%、11.25%(P<0.05),降低饲料系数0.10、0.09、0.09(P<0.05);各处理组在肌肉水分、灰分、粗脂肪和粗蛋白含量上无显著差异(P>0.05);在血清非特异性免疫方面,各多糖、寡糖和蛋白酶添加组均显著提高血清酚氧化酶活力(P<0.05),添加0.4%甘露寡糖可提高溶菌酶、碱性磷酸酶活力(P<0.05),添加0.2%β-葡聚糖、0.4%甘露寡糖可显著提高超氧化物歧化酶活力(P<0.05);在消化酶活性方面,添加175 mg/kg蛋白酶PT可显著提高肝胰脏蛋白酶、脂肪酶和肠蛋白酶活性(P<0.05),添加0.2%β-葡聚糖及0.4%甘露寡糖可显著提高胃蛋白酶和肝胰脏脂肪酶活性(P<0.05)。上述结果表明,饲料中添加0.2%β-葡聚糖、0.4%甘露寡糖、175 mg/kg蛋白酶PT可提高凡纳滨对虾生长性能、改善消化酶活性,葡聚糖和甘露寡糖还具有改善血清非特异性免疫的功能,而添加0.05%黄芪多糖对凡纳滨对虾增重率、血清非特异性免疫无显著影响。     

PCV-2感染对PK-15细胞IL mRNA转录水平的影响

【目的】观察猪圆环病毒2型（PCV-2）感染对猪肾传代细胞（PK-15细胞）炎性细胞因子白细胞介素（IL） mRNA转录水平的影响,探讨宿主与病毒之间的作用关系及细胞炎性反应机制。【方法】以未感染PCV-2的PK-15细胞为对照组,运用相对定量PCR技术,测定和分析PCV2感染PK15细胞后,PCV-2 DNA相对含量的变化,以及炎性细胞因子IL-6、IL-8、IL-12p35、IL-12p40、IL-13、IL-17、IL-18 mRNA转录水平在1,6,12,24,48,和72 h的变化。【结果】PCV-2感染后,PK-15细胞的IL-6、IL-13、IL-17、IL-18 的mRNA转录水平在12 h显著增加,24 h后mRNA转录水平下降;IL-8的mRNA转录水平在48 h时最高,为对照组的2.5倍,但72 h时恢复至与对照组水平相当;随着感染时间的延长,IL-12p35、IL-12p40 的mRNA转录水平显著下降。【结论】PCV-2感染后可引起PK-15细胞中IL-6、IL-8、IL-13、IL-17、IL-18等细胞因子mRNA转录水平增加,而IL-12 mRNA转录水平下降,提示PCV-2感染后引起的PK-15细胞炎性反应与其分泌的炎性细胞因子的改变有关。     

小肽对凡纳滨对虾幼体生长性能及非特异性免疫能力的影响

在基础饲料中分别添加0(对照组),1%,2%,3%小肽,研究小肽对凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)幼体生长和非特异性免疫力的影响。60 d后测定凡纳滨对虾的生长性能及血清抗菌活力、溶菌酶和酚氧化酶活性,并用哈维氏弧菌进行攻毒试验。结果表明,小肽能显著提高凡纳滨对虾的生长性能(P＜0.05),1%,2%和3%处理组体长增长率分别比对照组增加了17.74%,27.75%和17.46%,体重增长率分别比对照组增加了12.15%,31.16%和19.01%;饲料系数分别比对照组下降了21.57%,33.99%和25.49%;成活率分别比对照组提高了12.23%,18.89%和8.89%。小肽能显著增强凡纳滨对虾的非特异性免疫能力,1%,2%,3%处理组抗菌活力分别比对照组提高了21.05%,42.10%,10.53%;血清溶菌酶比活力分别比对照组提高了16.54%,24.56%,15.54%;酚氧化酶活力分别比对照组提高了25.70%,41.90%,24.02%。哈维氏弧菌攻毒试验结果表明,5 ｄ内对照组累计死亡率为96.7%,高于各处理组,但差异不显著;综合试验结果得知,饲料中添加小肽能显著提高凡纳滨对虾生长性能和血清非特异性免疫能力,2%为适宜添加量。     

凡纳滨对虾繁育相关基因Allatostatin-AR的克隆与表达分析

咽侧体抑制素主要抑制昆虫咽侧体保幼激素的分泌,是昆虫体内重要的神经肽,在甲壳动物体内可能参与繁殖发育的调节。本研究利用RACE PCR技术对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)A型咽侧体抑制素受体(Allatostatin-A receptor,AST-AR)基因进行克隆,获得全长为2 650 bp的cDNA,包括1 425 bp的开放阅读框,1 170 bp 5''非编码区,55 bp 3''非编码区,编码474个氨基酸,形成具有7个跨膜区的不稳定亲水性蛋白。同源性和系统发育分析结果表明凡纳滨对虾AST-AR基因与斑节对虾(Penaeus monodon)、美洲龙虾(Homarus americanus)同源性最高,亲缘关系最近。氨基酸多重序列比对结果显示AST-AR氨基酸TM7后C末端精氨酸在不同物种之间高度保守。实时荧光定量PCR结果显示,AST-AR基因在雌、雄凡纳滨对虾多个组织(眼柄、脑、胃、肝胰腺、鳃、性腺、肠、肌肉)中均有表达,除脑组织外AST-AR基因在雌性凡纳滨对虾中相对表达量高于雄性。在幼体发育中,AST-AR基因的相对表达量随发育阶段上升,同时该基因在不同群体仔虾生长对比实验中表达量差异显著。据此推测AST-AR基因参与凡纳滨对虾的繁殖、幼体发育、幼虾生长到成虾,基因表达基本贯穿凡纳滨对虾的一生。