DRD3基因敲除鼠饲养繁殖及基因型鉴定

[目的]对于DRD3基因敲除小鼠的饲养繁殖以及鉴定方法进行分析,为进一步研究多巴胺及其受体的功能提供动物模型.[方法]引进的DRD3基因敲除小鼠均为杂合子基因型,1雌1雄同窝进行饲养繁殖,从仔鼠中提取基因组DNA,进行PCR鉴定.[结果]成功获得的子代小鼠有敲除杂合子、野生型及敲除纯合子3种基因型.DRD3敲除杂合子基因型小鼠的饲养繁殖获得成功,亦获得较多敲除纯合子基因型小鼠.[结论]正确的饲养繁殖管理及基因型鉴定方法可从DRD3基因杂合子小鼠成功获得纯合子小鼠.     

A2a基因敲除小鼠的繁育及基因型鉴定

将引进的A2a基因敲除杂合子小鼠饲养于SPF环境中,依照遗传学规则进行繁育,提取每种基因型小鼠尾部组织基因组DNA,采用PCR法鉴定小鼠的基因型。结果表明,A2a基因敲除杂合子小鼠子代中将出现野生型、杂合子和纯合子3种基因型。     

β4GalT1基因点突变为GalNAcT对小鼠生理功能的影响

[目的]本文旨在研究β-1,4-半乳糖基转移酶1基因(β4GalT1)突变为N-乙酰氨基半乳糖转移酶基因(GalNAcT)对小鼠生理功能的影响。[方法]以β4GalT1基因点突变的纯合子、杂合子和野生型小鼠为研究对象,观察、测定和记录小鼠的日常状态与繁殖情况,并采用单因素方差分析和多重比较对数据进行差异显著性分析,研究β4GalT1基因点突变为GalNAcT基因对小鼠生长发育、神经系统发育和雌小鼠繁殖能力的影响。以纯合子和野生型小鼠为研究对象,探讨β4GalT1基因点突变对小鼠肝脏中蛋白质糖基化的影响。[结果]通过对比不同周龄的纯合子和野生型小鼠的体质量和成年小鼠的主要器官质量,发现β4GalT1基因点突变对小鼠体质量和主要器官质量均无显著影响。通过对纯合子和野生型小鼠肝脏中N-链寡糖的比较可知,β4GalT1基因点突变改变了小鼠肝脏中N-链寡糖的结构。观察纯合子和野生型小鼠日常状态发现,纯合子小鼠比野生型小鼠反应迟滞,对外界刺激反应不敏感。通过悬尾试验,发现纯合子小鼠的静止时间极显著长于野生型小鼠(P0.01)。对3种基因型小鼠进行亲本自交,发现纯合子雌小鼠受孕困难,或者受孕以后不能正常分娩,雌小鼠和子代小鼠均死亡。对比杂合子和野生型小鼠自交后代,纯合子小鼠平均每胎子代小鼠的数量极显著少于杂合子和野生型小鼠(P0.01)。[结论]β4GalT1基因点突变改变了小鼠体内蛋白质糖基化修饰,且纯合子小鼠体内蛋白质N-糖基化的改变必将改变小鼠的生理机能。说明β4GalT1对小鼠生长发育、神经系统发育和雌小鼠繁殖能力等有重要的、不可替代的作用。     

大豆细菌性斑点病菌hrpZPsg12基因增强病原菌对大豆的致病性并引起烟草过敏性反应

[目的]明确hrpZPsg12基因对大豆细菌性斑点病菌致病性的影响。[方法]采用PCR方法从大豆细菌性斑点病菌中克隆hrpZPsg12基因,利用具有自杀特性的敲除质粒pKNOCK-Cm和具有功能互补作用的粘粒pUFR034,构建了hrpZPsg12基因的突变载体pKNOCK477-7和互补载体pUFR1026-68,并筛选出hrpZPsg12基因的突变体477-1及其功能互补子1026-5。进一步将野生型Psg12、突变体477-1和互补子反应斑。但是,反应斑的大小有差异,Psg12菌株接种的病斑较大,477-1的较小,互补子1026-5的接近野生型菌株Psg12。病斑中细菌繁殖量分析表明,野生型菌株Psg12繁殖量最高,突变体477-1的最低,互补子1026-5的接近野生型菌株Psg12的繁殖量。[结论]hrpZ-Psg12基因能够增强大豆细菌性斑点病菌对大豆的致病性,并且能够在烟草上产生过敏性反应。     

乙肝病毒基因在转基因小鼠中高效表达的研究

采用传统育种方法,将整合含有人类乙肝病毒(HBV)基因的转基因小鼠通过近交和远交的育种方法,获得纯合子小鼠,收集由纯合子小鼠产生的双重杂合子小鼠及后代小鼠的血清,用竞争PCR联合产物酶联杂交技术定量测定血清中的HBVDNA量。结果表明:相对于单纯杂合子小鼠,纯合子小鼠的表达量增高不明显,而双重杂合子小鼠的表达量有明显提高。将双重杂合子再进行杂交传代,其后代也有增高趋势。     

瘦素(Leptin)受体基因敲除小鼠繁育及子代小鼠基因型鉴定

将瘦素(Leptin,LP)受体基因杂合型小鼠按4种方式进行配对,从子鼠鼠尾中提取基因组DNA,用PCR方法扩增LP受体基因片段,琼脂糖凝胶电泳后观察。结果表明,LP+/+、LP+/-、LP-/-各表型小鼠互交繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,且雌、雄性LP-/-小鼠(即DB/DB小鼠)无繁殖能力。雌、雄性LP+/-小鼠交配能高效地繁殖LP-/-小鼠;PCR方法能够精确地鉴定LP-/-小鼠。     

小麦赤霉菌FGSG_03700基因敲除及功能研究

[目的]敲除小麦赤霉菌(Fusarium graminearum)FGSG_03700基因,确定其缺失突变体表型,从而分析该基因的生物学功能。[方法]应用Split Marker基因敲除技术,构建含有潮霉素抗性基因hph的基因敲除盒,通过PEG介导,进行原生质体转化,在含有潮霉素的培养基上筛选转化子。[结果]通过PCR正负筛查,得到3个确定的突变体,分别命名为ΔFGSG_03700 1-2、ΔFGSG_03700 2-2、ΔFGSG_03700 2-3。通过表型验证及孢子对番茄侵染试验发现,敲除突变体的菌落形态及生长速度没有明显变化,致病力没有减弱,但突变体的产孢量低于野生型PH-1。[结论]FGSG_03700基因可能与小麦赤霉菌分生孢子的生长能力有关。     

应用TALENs技术定向敲除烟草eIF4E-6基因

[目的]利用TALENs技术定向敲除烟草eIF4E-6基因,为提高优质烤烟品种K326的马铃薯Y病毒(PVY)抗性提供材料。[方法]构建特异靶向烟草eIF4E-基因的TALENs载体,并由农杆菌介导转化K326烟草,用PCR和克隆测序方法筛选目的基因被成功编辑的T_0代转基因烟株。[结果]构建了2个特异靶向eIF4E-6基因的TALENs载体T_3和T_4。2个载体各获得了约40和50株阳性转化的K326 T_0代烟株。T_3载体获得1株目的基因靶位点发生大片段碱基缺失的杂合突变型T_0代单株、3株靶位点发生碱基替换的杂合突变型T_0代单株。T_4载体获得5株靶位点发生碱基替换的杂合突变型T_0代单株。[结论]利用TALENs技术获得的eIF4E-6基因杂合突变型K326 T_0代单株为后续获得纯合基因敲除的K326烟草,并最终获得PVY病毒抗性改良的K326烟草材料奠定了基础。     

鱼腥藻PCC 7120 基因alr0267敲除及其功能的初步研究

【目的】敲除鱼腥藻PCC 7120的alr0267基因,并对其功能进行初步研究。【方法】克隆获得鱼腥藻PCC 7120 alr0267基因部分片段,通过构建敲除载体,使其与目的基因发生单交换同源重组,从而将鱼腥藻PCC 7120中的alr0267基因敲除,并对敲除体进行纯化和PCR鉴定,然后对alr0267敲除体和野生型固氮异形胞进行形态观察和统计,同时采用实时荧光定量PCR,在培养不同时间(0,3,8,24h和10d)检测野生型和alr0267基因敲除体中与异形胞功能相关基因all0813、all2736、alr2887的相对表达量。【结果】鱼腥藻PCC 7120 alr0267基因被成功敲除;在缺氮条件下培养6~12d,敲除体异形胞营养细胞数的均值明显少于野生型;实时定量PCR分析表明,野生型中all0813、all2736、alr2887基因表达量均在培养24h达到最大,敲除体中这3个基因最大相对表达量的出现时间均有所延迟。【结论】alr0267基因敲除导致异形胞分化频率增加,同时影响异形胞的正常发育。     

拟南芥CTSP3基因GUS载体构建及转基因植株的筛选鉴定

[目的]深入研究植物基因CTSP3的基因表达模式及其对重金属镉胁迫的响应机制,以野生型拟南芥为材料构建CTSP3-GUS重组质粒及GUS转基因植株。[方法]通过提取野生型拟南芥的DNA,克隆其启动区基因片段,将基因片段和pART27-GUS质粒双酶切后连接,转化到大肠杆菌感受态细胞中,菌落PCR和测序获得阳性单克隆。然后将CTSP3-GUS重组质粒转入农杆菌感受态GV3101,获得阳性单菌落。接着采用浸花法侵染野生型拟南芥,最后通过抗性筛选和PCR鉴定获取CTSP3-GUS转基因植株。[结果]成功克隆CTSP3启动区基因片段,构建出重组质粒,获得了CTSP3-GUS转基因植株。[结论]获得CTSP3-GUS转基因植株,为接下来进一步研究该基因在植物响应镉胁迫机制中的功能奠定了基础。     

长白山区野生宽叶杜香镇咳祛痰作用的研究

[目的]为长白山区野生宽叶杜香的临床应用、新药研发和人工扩繁提供试验依据。[方法]以雄性昆明种小鼠为试验动物，长白山区野生宽叶杜香叶为试材，通过动物试验研究宽叶杜香的镇咳祛痰作用。[结果]各试验组小鼠状态基本相同，都比较活泼，饮食量与饮水量稳定，体重增长速度基本一致。与生理盐水组相比，宽叶杜香低、中、高剂量的水蒸气蒸馏液均可以延长氨水致小鼠咳嗽的潜伏期，减少咳嗽次数，且低剂量组效果显著，中剂量组效果极显著；宽叶杜香低、中、高剂量的水蒸气蒸馏液均可以增加小鼠呼吸道的酚红排泌量，且高剂量组效果显著，中剂量组效果极显著。[结论]长白山区野生宽叶杜香叶水蒸气蒸馏液具有镇咳祛痰作用，对于治疗慢性气管类且有一定意义．     

欧洲水仙的繁殖技术研究

[目的]研究欧洲水仙的繁殖技术,为欧洲水仙的种质资源栽培提供依据。[方法]在查阅相关资料的基础上,系统介绍欧洲水仙的4种主要的繁殖方式：侧球繁殖、鳞片繁殖、双鳞片繁殖以及组织培养繁殖,并对4种繁殖方式进行简单比较。[结果]鳞片扦插方法操作较简单,但繁殖材料易污染腐烂,且扦插用材料较组织培养多,繁殖系数低。用组织培养方法进行快速繁殖,环境相对容易控制,污染率低,且所需材料少,繁殖系数高。[结论]组织培养方法极大地提高了水仙的繁殖速度。     

猫爪草块根·分株繁殖对产量与化学成分的影响

[目的]研究不同无性繁殖方式对猫爪草产量和化学成分的影响,确定合适的无性繁殖方式。[方法]以信阳野生猫爪草为繁殖材料进行分株繁殖和块根繁殖,测定其产量,采用蒽酮比色法测定总糖和多糖含量,采用差示分光光度法测定黄酮含量。[结果]分株繁殖产量比块根繁殖产量高,处理间差异达到0.05显著水平;分株繁殖总糖和多糖含量比块根繁殖含量低,分株繁殖黄酮含量高于块根繁殖,处理间总糖和黄酮含量差异达到0.05显著水平,多糖含量差异达到0.01显著水平。[结论]分株繁殖和块根繁殖对猫爪草块根外形影响不大。采用分株繁殖,并且适当在每个分株保留部分宿根的方式进行繁殖是目前猫爪草规范化栽培较为合适的方法。     

光照和温度对蓝莓组织培养快速繁殖的影响

[目的]筛选出几个主要蓝莓品种的最佳培养条件.[方法]研究了光照和温度对5个蓝莓品种快速增殖的影响.[结果]较低的温度和光强有利于蓝丰品种的快速增殖;较高的温度和光强有利于埃利奥特的快速增殖;低温和常光强有利于布里吉塔的快速增殖;常温和常光强有利于力格西的快速增殖;高温和常光强有利于密斯蒂的快速增殖.[结论]温度和光强对蓝莓组织培养快速繁殖有很大影响,不同蓝莓品种所需的最佳培养温度和光强也不尽相同,所以应根据不同品种设置不同的培养条件.     

海南肾茶3种繁殖方法的比较研究

[目的]筛选海南肾茶繁殖的最佳方法。[方法] 通过压条、分株和扦插3种方法繁殖海南肾茶，探讨这3种繁殖方法的效果。[结果] 扦插繁殖、分株繁殖和压条繁殖3种方法均能使海南肾茶成功繁殖，其中分株繁殖是保证材料安全的有效措施之一，压条繁殖可以较快地提高海南肾茶的繁殖数量，扦插繁殖是满足产业化生产育苗的最佳方法。扦插繁殖的材料为5-12个月的茎干。在保持土壤湿度和适当光照的情况下，扦插繁殖的材料存活率高，生长速度快，20d后就可以进行大田栽培，海南全年均可繁殖，但在12月份最佳。[结论]该研究为海南肾茶的繁殖及其产业化育苗奠定了基础。     

蝴蝶兰不定芽途径快繁技术研究

[目的]优化蝴蝶兰不定芽快繁技术中增殖培养基的成分及其浓度,完善蝴蝶兰快速繁殖技术。[方法]利用组织培养的手段,在增殖培养基上诱导出蝴蝶兰不定芽,研究6-BA、PVP的浓度以及不定芽大小对增殖效果的影响。[结果]培养基1/2 MS+0.2 mg/LNAA+10 mg/L 6-BA+2 g/L PVP+1 g/L水解酪蛋白+20 g/L蔗糖+8 g/L琼脂(pH 5.4)是不定芽增殖的最佳培养基,增殖系数达10;以长为1.0～1.5 cm的不定芽作为蝴蝶兰扩繁材料较为合适。[结论]结果表明该研究优化的培养基配方和快繁技术可用在蝴蝶兰种苗快繁生产中。     

高山杜鹃组培快繁技术研究

[目的]为高山杜鹃的快速繁殖提供技术指导。[方法]以高山杜鹃的侧芽为外植体,先将其在1/2MS培养基中预培养30 d,再对其进行芽增殖、芽伸长和生根培养,研究不同激素组合对其芽增殖、芽伸长和生根率的影响。[结果]当分裂素为6-BA时,每芽增殖数较少（最多为2.1个）,当分裂素为KT时,芽增殖数随KT浓度的增加而增加,当KT为0.5 mg/L时,每芽增殖数最多（4.8个）,且芽质量较好;培养基中KT/IAA为1/4时,芽最长（平均为5.1 cm）,且芽较健壮;当培养基中加入IAA时,每株平均生根数较少（最多为1.2条）,当加入NAA时,生根率随NAA浓度的增加而增加,当NAA为2.0 mg/L时,每株平均生根数最多（6.2条）。[结论]高山杜鹃组培苗增殖、芽伸长和生根的最佳培养基分别为MS＋KT 0.5 mg/L＋IAA 0.5 mg/L、MS＋KT 0.25 mg/L＋IAA 1.0 mg/L和1/2 MS＋NAA2.0 mg/L。     

烟蚜茧蜂不同繁育技术研究

[目的]筛选适宜的繁蜂技术和方法。[方法]采用烤烟漂浮苗、成株、假植苗3种方法繁殖烟蚜茧蜂,并对繁蜂效果进行分析。[结果]漂浮苗繁蜂成本较低,周期短,但是病害发生较严重;成株繁蜂量较大,但是周期长,成本也较高;假植苗繁蜂效果较好,成本较低。[结论]试验结果为毕节选择适宜的繁蜂方法提供了理论依据和技术支撑。     

百合鳞片扦插繁殖研究

[目的]提高百合繁殖系数,并快速培育健壮百合幼苗。[方法]以兰州百合为试验材料,研究百合鳞片的发育程度、鳞片分割方式和消毒药剂对百合鳞片扦插繁殖率的影响。[结果]结果表明:中层鳞片的扦插成活率较高,繁殖系数也较高,外层与内层鳞片之间的差异不明显;与完整鳞片相比,横切鳞片和纵切鳞片都会降低鳞片繁殖系数;用0.1%HgCl2处理鳞片,可有效防止鳞片腐烂,提高繁殖系数。[结论]百合鳞片扦插以不分割为好,采用百合中层鳞片,并用0.1%HgCl2处理,可显著提高扦插繁殖率。     

3种因素对山丹埋片繁殖的影响

[目的]对山丹埋片繁殖进行研究。[方法]以陕北山丹的鳞片为材料,研究了植物激素、消毒试剂和鳞片切割方式共3种因素分别对其埋片繁殖的影响。[结果]150 mg/L的吲哚丁酸(IBA)处理能显著提高鳞茎增殖率;0.1%HgCl2处理可有效防止鳞片腐烂率,但会降低鳞茎增殖率;与完整鳞片相比,切割鳞茎的腐烂率显著升高。[结论]该研究为山丹种球的商品化大规模繁育提供了理论依据。