牡蛎抗氧化活性肽的酶解工艺研究

以木瓜蛋白酶和中性蛋白酶为工具酶,利用正交试验法确定了木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解制备牡蛎抗氧化活性肽的最佳酶解工艺。结果表明:当时间为150 min、酶用量为6%、温度为45℃、pH为7.0时,木瓜蛋白酶酶解液的抗氧化活性最强;当时间为110 min、酶用量为3%、温度为65℃、pH为6.0时,中性蛋白酶酶解液的抗氧化活性最强。用SephadexG-15葡聚糖凝胶柱层析分析的结果表明,木瓜蛋白酶酶解液中最佳抗氧化活性组分的相对分子质量为1 191和826左右,中性蛋白酶酶解液最佳抗氧化活性组分的相对分子质量为1 074和735左右,其抗氧化活性峰值与蛋白肽在280 nm下的吸收峰值分别相吻合。     

鲶鱼骨酶解物的降血压肽活性研究

以鲶鱼骨蛋白为原料制备ACE抑制肽,采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶进行酶解,通过体外检测法测定其抑制率,优选出最佳用酶。通过单因素试验和正交试验,确定了碱性蛋白酶酶用量、pH、酶解温度、酶解时间、底物浓度等因素对ACE活性抑制效果的影响。结果表明:利用碱性蛋白酶水解鲶鱼骨,酶用量为500U/g、pH值8.5、温度为60℃、底物浓度为0.33kg/L、时间6h时酶解液对ACE的抑制活性最强,抑制率为88.36%。通过比较,最佳酶解条件下得到的降血压肽的ACE抑制率要高于降血压药尼莫地平和硝苯地平的ACE抑制率。     

藜麦抗氧化肽制备工艺研究

采用酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶对藜麦蛋白提取液进行酶解制得抗氧化肽,通过单因素试验筛选出最佳蛋白酶。以DPPH自由基清除率为指标,通过响应面试验对酶解条件进行优化,并采用HPLC法对酶解液进行氨基酸种类及含量的测定。结果表明,藜麦抗氧化肽的最佳制备工艺为木瓜蛋白酶、酶解pH值6.63、加酶量2.36%、酶解温度58.44℃、酶解时间1.0 h。藜麦抗氧化肽中共含有18种氨基酸,其中丝氨酸的含量最高,为65.46%。     

藜麦抗氧化肽制备工艺的研究

采用酸性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶对藜麦蛋白提取液进行酶解制得抗氧化肽,通过单因素试验筛选出最佳蛋白酶。以DPPH自由基清除率为指标,通过响应面试验对酶解条件进行优化,并采用HPLC法对酶解液进行氨基酸种类及含量的测定。结果表明：藜麦抗氧化肽的最佳制备工艺为木瓜蛋白酶、酶解pH 6.63、加酶量2.36%、酶解温度58.44℃、酶解时间2.0 h。藜麦抗氧化肽中共含有18种氨基酸,其中丝氨酸的含量最高为65.46%。     

鲍鱼性腺小肽的制备及抗氧化活性的初步研究

以雄性皱纹盘鲍性腺为原料,建立了蛋白酶酶解制备抗氧化活性蛋白肽的工艺条件．分别对木瓜蛋白酶和中性蛋白酶进行单因素研究,并以二者的复合酶为工具酶进行响应面分析．结果显示,雄性鲍鱼性腺的最优酶解条件为木瓜蛋白酶与中性蛋白酶的比例为1：4、pH=6．6、酶解温度为53．7℃、酶解时间为70．4min．高效液相色谱（HPLC）分析结果表明,酶解液中多肽的分子质量主要分布在1ku以下．制备的酶解液具有较强的清除自由基效果,清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）的EC50值为6．8mg／mL,还原力的AC0.5值为12．87mg／mL．     

鲢头酶解物对ACE的抑制活性

通过测定鲢Hypophthalmichthys molitrix头酶解物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制率(I),确定了蛋白酶酶解鲢头制取ACE抑制肽(ACEI)的酶种及其最佳酶解工艺条件,并用Sephadex G-15凝胶柱对酶解物进行分离,测定酶解物中ACE抑制肽的相对分子质量分布。结果表明：在胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶和复合风味蛋白酶5种酶中,胃蛋白酶为酶解鲢头制备ACE抑制肽的理想蛋白酶;其最佳酶解工艺条件为温度37℃、pH2．0、酶解时间3h、酶的质量分数为1．4％、底物浓度ω(原料)：ω(水)=1：3,在该条件下得到的酶解物对ACE的抑制活性最强,其I=83．58％;在最佳酶解工艺条件下得到的酶解物经层析分离,在最大洗脱峰处得到的ACE抑制肽抑制活性最高,其I=86．72％,相对分子质量为1096。     

米糠蛋白抗氧化肽的制备及初步分离

试验以米糠蛋白为原料,制备米糠蛋白抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为指标,采用正交试验,优化碱性蛋白酶酶解米糠蛋白制备抗氧化肽的工艺条件;采用超滤、SephadesG-25柱层析分离纯化米糠蛋白抗氧化肽。试验结果表明,制备米糠蛋白抗氧化肽的最优工艺条件为：酶解温度45℃,pH9．0,时间60rain,米糠蛋白底物浓度3％,碱性蛋白酶加酶量3000U·g-1。在米糠蛋白酶解产物中,Mrs〈5KDa组分的抗氧化活性最强,其对DPPH自由基清除率为68．7％。通过SephadexG-25凝胶层析柱进一步分离得到4个混合组分,混合组分Ⅱ活性最强,其DPPH自由基清除率为75．83％。     

魁蚶加工副产物酶解工艺及酶解产物抗氧化效果研究

为高效开发利用魁蚶Scapharca broughtonii加工副产物,以水解度、氨基态氮含量和产物相对分子质量分布为指标,筛选了碱性蛋白酶、风味蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶5种蛋白酶,通过单因素和响应面试验,建立碱性蛋白酶最佳酶解工艺,并对最优工艺条件下酶解产物的抗氧化效果进行测定。结果表明:从氨基态氮含量和水解度的变化可知,碱性蛋白酶的酶解程度最高,其次为风味蛋白酶和酸性蛋白酶,中性蛋白酶和胰蛋白酶的酶解效果不佳;碱性蛋白酶酶解最佳参数条件为料液比(g∶mL)1∶4、pH 8.5、温度45℃、加酶量800 U/g、酶解时间3 h,在此条件下,水解度(DH)为35.74%;酶解产物具有明显的抗氧化效果,与十分之一用量的VC效果相当。研究表明,碱性蛋白酶是酶解魁蚶加工副产物获得较多小分子蛋白肽的良好用酶,本研究结果可为小肽型水产饲料开发提供基础数据。     

木瓜蛋白酶水解林蛙皮制备活性肽的工艺研究

[目的]以林蛙皮为原料,利用木瓜蛋白酶水解法制备活性肽。[方法]选取固液比、酶用量、pH、水解时间和水解温度为影响因素,以活性肽的水解度为考察指标,通过单因素试验和正交试验优选木瓜蛋白酶酶解林蛙皮制备活性肽的最佳工艺条件。[结果]最优工艺条件为固液比1∶4,酶用量14 000 U/g,pH 7.0,水解温度55℃,水解时间4 h。[结论]该研究为林蛙资源的综合利用提供了新的途径。     

酶解鱼鳔蛋白制备抗氧化肽的研究

[目的]探索利用鱼鳔蛋白制备抗氧化肽的最佳条件。[方法]采用胰蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶酶解海南鱼鳔,以酶解液清除DPPH的效果为评价指标,采用单因素试验和响应面试验,研究酶解的pH、温度、时间、底物浓度、酶浓度等因素对酶解效果的影响。[结果]鱼鳔的最佳酶解条件为底物浓度6.0%,酶浓度1.6%,酶解pH 6.0,酶解时间4.1 h,酶解温度63℃;该条件下制备的鱼鳔抗氧化肽对DPPH自由基的清除率达76.06%。[结论]该研究为鱼鳔蛋白的开发利用提供了科学依据。     

核桃蛋白中性蛋白酶水解物的制备及其抗氧化活性研究

[目的]研究制备核桃蛋白水解物的最佳工艺条件及水解物的抗氧化活性。[方法]以核桃蛋白为底物,采用正交试验研究制备其中性蛋白酶水解物的工艺条件,通过测定自由基清除能力研究酶水解物的抗氧化活性。[结果]制备核桃蛋白酶水解物的最优工艺条件为:温度40℃、底物浓度4%、酶浓度4 000 U/g、pH值8.0;核桃蛋白酶水解物的水解度与其对羟自由基(OH.)和超氧阴离子自由基(O2.)的清除能力有关,其水解度为24.2%时对羟自由基(OH.)和超氧阴离子自由基(O2.)的清除率分别为17.0%和52.0%。[结论]采用Sephdex G-25凝胶柱层析对水解度为24.2%的酶水解物进行分离,得到了A、B、C和D 4种肽混合物,其中,肽混合物C的自由基清除能力最大,肽混合物D最小。     

象拔蚌酶解制备抗氧化肽的工艺研究

[目的]探讨酶解象拔蚌蛤肉制备抗氧化肽的最佳工艺条件。[方法]采用复合蛋白酶对象拔蚌蛤肉进行酶解获得抗氧化肽,以羟自由基清除率及蛋白水解度为指标,通过单因素试验与响应面分析法对酶解工艺条件进行优化。[结果]象拔蚌蛤肉的最佳酶解工艺条件为料水比1∶11.11,加酶量3 000 U/g,酶解时间1.2 h,酶解温度55℃,pH 7.52;在该条件下,酶解液获得较高的蛋白水解度,同时对羟基自由基和DPPH自由基显示出很好的清除效果,其EC50值分别为11.26和37.75 mg/ml。[结论]该研究为象拔蚌保健食品的开发提供了依据。     

木瓜蛋白酶水解核桃蛋白的工艺条件优化及水解物抗氧化活性研究

[目的]研究采用木瓜蛋白酶水解核桃蛋白的工艺条件及水解物的抗氧化活性。[方法]采用正交试验法确定木瓜蛋白酶水解核桃蛋白的最适工艺条件，采用Sephadex G-25凝胶色谱分离酶水解物，通过测定羟自由基（OH·）和超氧阴离子自由基清除能力研究了酶水解物的抗氧化活性。[结果]核桃蛋白木瓜蛋白酶水解的最优奈件是温度55℃，底物浓度4％，酶浓度60000U／g，pH值8．0；在水解度达到38．4％时，其酶解产物对羟自由基（OH·）和超氧阴离子自由基（O2·）的清除率分别为22．5％和46．4％。采用Sephadex G-25凝胶柱层析对水解度38．4％的酶水解物进行分离得到了A、B、C和D4个肽片段，其中肽片段c的自由基清除能力最大。[结论]核桃蛋白木瓜蛋白酶水解物具有一定抗氧化活性。     

菲律宾蛤仔木瓜蛋白酶水解物抗氧化活性研究

以菲律宾蛤仔蛋白为原料,用木瓜蛋白酶对其进行水解,采用正交实验方法研究酶解温度、酶解时间,加酶量和pH对水解度和抗氧化性的影响;通过检测羟自由基清除率、DPPH自由基清除、超氧阴离子自由基清除率和还原力评价水解物的抗氧化性。结果表明：水解度与抗氧化性之间没有正反相关系,当温度为45℃,时间为6 h,加酶量为1 500μg/g,pH为7.0时,水解度最大;温度为45℃,时间为2 h,加酶量为2 000μg/g,pH为7.0时,水解物的抗氧化活性最强;水解物对羟自由、DPPH自由基和超氧阴离子自由基均有很好的清除作用,并呈现浓度依赖性。因此,菲律宾蛤仔蛋白的木瓜蛋白酶水解物具有很好的抗氧化性。     

猪肉蛋白酶法水解优化工艺研究

通过单因素试验和正交试验,研究了猪肉蛋白质酶水解的优化工艺,结果表明:猪肉蛋白质的较优水解酶为木瓜蛋白酶和中性蛋白酶,其中木瓜蛋白酶水解猪肉蛋白的最适条件为:酶用量2.6%,pH 7.0,55℃,水解3.5 h;中性蛋白酶水解猪肉蛋白的最适条件为:酶用量1.8%,pH 6.5,40℃,水解4.5 h.双酶水解的最适工艺参数为:木瓜蛋白酶与中性蛋白酶按1∶2混合同时水解,总用酶量1.5%,pH 8.0,50℃,水解4.0 h,水解度可达到31.95%,且制得的水解液色泽金黄,澄清透明,无异味.     

豇豆籽肽的制备及抗氧化活性研究

[目的]采用酶法制备豇豆籽蛋白肽,并探讨其抗氧化活性。[方法]先用碱提酸沉法制备豇豆籽蛋白,然后分别用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解制备豇豆籽肽,后者脱盐后进行DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子清除活性分析。[结果]碱性蛋白酶水解能力强于木瓜蛋白酶,2种酶水解后的豇豆籽肽对3种自由基均具有较好的清除活性。在相应浓度范围内,对DPPH自由基最大清除率分别为63.92%(碱性蛋白酶)和63.06%(木瓜蛋白酶),半数抑制浓度IC50分别为3.20和3.28 mg/ml;对羟基自由基最大清除率分别为87.66%(碱性蛋白酶)和85.88%(木瓜蛋白酶),相应IC50分别为4.21和4.89 mg/ml;对超氧阴离子自由基的最大清除率64.06%(碱性蛋白酶)和47.92%(木瓜蛋白酶)。[结论]研究可为豇豆籽蛋白肽的深度开发和综合利用提供一定的理论基础。     

沙蚕不同酶解产物抗氧化效果研究

海洋生物蛋白资源是海洋生物资源的重要组成部分，对其进行高值化加工利用是海洋生物技术研究的重要内容，酶解是提高海洋蛋白功能性的有效方式，但酶种类不同,其作用位点不同，可能对酶解产物的活性有一定影响。为了探究了沙蚕不同酶解产物的抗氧化性，采用6种蛋白酶（碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶）酶解沙蚕，测定了不同酶解时间下的水解度、分子量分布、3种自由基（DPPH、O-2·、·OH）的清除率等反映抗氧化水平的指标。结果表明：胰蛋白酶小分子肽得率最高，为70.47%；胃蛋白酶次之，为68.12%。酶解液浓度为5 mg·mL-1时，胃蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解4 h时，DPPH清除率效果较好，分别为90.87%和90.52%。胃蛋白酶酶解3 h时，O-2·清除率效果最佳，为89.78%；木瓜蛋白酶酶解3 h时，O-2·清除率效果次之，为57.99%。碱性蛋白酶酶解4 h和胃蛋白酶酶解2 h时，·OH清除率效果较好，分别为85.07%和83.37%。胰蛋白酶和胃蛋白酶对提高酶解液水解度和小肽生成作用明显，胃蛋白酶的酶解产物对3种自由基清除率较好，更适用于制备沙蚕抗氧化肽。     

乌贼内脏酶解多肽的制备和抗氧化活性研究

[目的]探讨乌贼内脏酶解多肽的制备和抗氧化活性。[方法]以乌贼内脏为原料,用胰蛋白酶对其进行水解,采用单因素和正交试验方法研究酶解温度、酶解时间、加酶量和pH对水解度和抗氧化性的影响;通过检测羟自由基清除率、DPPH清除率和还原力评价不同分子量水解物多肽的抗氧化性。[结果]当酶解温度为35℃,时间为5 h,加酶量为5 000 U/g,pH为7.5时,水解度最大;当酶解温度为40℃、时间为7 h、加酶量为4 500 U/g,pH为8.0时,水解物对羟自由基清除率最大。超滤后不同分子量多肽对羟自由基的清除率为3～5 kD3 kD以下5～10 kD;DPPH清除率:3～5 kD3 kD以下5～10 kD;还原力:3 kD以下3～5 kD5～10 kD。[结论]乌贼内脏酶解多肽具有较好的抗氧化活性,不同分子量多肽的活性不同。     

响应曲面法研究白果蛋白的酶解工艺

[目的]确定白果蛋白的最佳酶解条件。[方法]分别采用木瓜蛋白酶,2709碱性蛋白酶,中性蛋白酶对白果蛋白进行酶解,并对酶解效果较好的碱性蛋白酶进行单因素试验,考察各因素对酶解效果的影响;采用Designexpert软件设计试验、创建模型,采用响应曲面法分析试验结果。[结果]碱性蛋白酶对白果蛋白的水解度最大（50.50%）;酶解温度为50℃时蛋白水解度最大,酶用量为3g和酶解时间为6h时蛋白水解度达到稳定点;据模型分析,各因素对酶解效果的影响依次为：pH值〉温度〉底物浓度,最佳酶解条件为：时间6h,酶用量2g,pH值9.0,温度47℃,底物浓度2.17%。[结论]最佳酶解条件下白果蛋白的水解度可达67.75%,水解液过膜后干燥可得粗多肽1.3g（占干燥白果粉的6.51%）。