日粮添加豆油和胡麻油对肉牛瘤胃发酵及主要微生物数量的影响

 【目的】评价日粮添加植物油对瘤胃发酵和瘤胃微生物区系的影响。【方法】采用3×3拉丁方设计，用3头装有永久性瘤胃瘘管的杂交肉牛研究不添加油脂（对照组）、添加4％豆油（豆油组）或4％胡麻油（胡麻油组）对瘤胃pH值、NH3-N浓度、VFA以及瘤胃细菌和原虫的影响。3组日粮精粗比均为35﹕65，每期试验为21d，共3期。【结果】添加油脂对瘤胃内pH值没有影响(P＞0.05)；对照组和胡麻油组瘤胃NH3-N浓度显著高于豆油组(P＜0.05)；与对照组相比，豆油组和胡麻油组显著降低了瘤胃乙酸、丙酸、丁酸、总挥发性酸浓度以及总细菌、蛋白分解菌、纤维分解菌及原虫的数量(P＜0.05)，但对乙酸与丙酸比例以及淀粉分解菌数量两个指标组间无显著差异(P＞0.05)。对照组、豆油组和胡麻油组纤维分解菌和原虫的数量依次分别为6.79×108、5.71×108、5.92×108；10.67×104、7.11×104、9.56×104 CFU•ml-1；两个加油组显著降低了瘤胃纤维分解菌和原虫数(P＜0.05)。【结论】日粮添加4％豆油和胡麻油对瘤胃发酵及主要微生物都有一定的抑制效应，但二者抑制效应大小无显著差异。     

青蒿素对山羊瘤胃发酵和微生物氮素微循环的影响

【目的】青蒿素是天然青蒿属植物的提取物,它很早就在中国传统中药中被用作抗疟疾、抗肿瘤和驱虫等药物。为探讨青蒿素对反刍动物瘤胃发酵、瘤胃内环境及其瘤胃微生物蛋白质循环的影响,确定青蒿素的对瘤胃发酵调控的效果和适宜添加量,为青蒿素作为一种新的瘤胃调控剂在反刍动物生产中应用提供依据。【方法】采用4只带有瘤胃瘘管的徐淮白山羊为试验动物,饲喂以玉米、豆粕和羊草为主组成的基础日粮,在基础日粮中分别添加占日粮干物质0,0.2%,0.4%和0.6%的青蒿素,进行4×4拉丁方设计试验,研究对山羊瘤胃发酵参数、瘤胃微生物种群变化;采用DTAF荧光染料标记细菌（FLB）的一种新方法测定瘤胃原虫吞噬细菌速率和吞噬量的影响。【结果】山羊瘤胃液中pH值平均值的范围在6.85-7.16,在瘤胃的正常范围内;青蒿素能够降低NH₃-N浓度,其中0.4%和0.6%两个处理组的瘤胃液中NH₃-N浓度与对照组差异显著。青蒿素能够提高乙酸、丙酸及、总挥发性脂肪酸（TVFA）的摩尔浓度及丙酸的摩尔浓度百分比,能降低乙酸/丙酸比,各添加组的乙酸/丙酸比显著或极显著低于对照组(P＜0.05);随着青蒿素添加量的增加,细菌蛋白产量增加,其中,以0.6%添加组最高,与对照组差异极显著(P＜0.01);0.4%和0.6%添加组的原虫蛋白产量极显著低于对照组(P＜0.01);青蒿素对瘤胃液肽浓度的均值没有显著影响。同时,添加青蒿素后,瘤胃中细菌总数增加而原虫总数减少,使瘤胃原虫种属结构变化。添加青蒿素能显著影响原虫对细菌的吞噬速率,对照组和添加0.2%,0.4%和0.6%青蒿素处理组的吞噬速率分别为：320.11cells/（cell h）、313.94cells/（cell h）、305.00cells/（cell h）、278.14cells/（cell h）。【结论】添加青蒿素能显著影响瘤胃发酵类型,具有降低瘤胃中氨态氮浓度的趋势;同时可显著降低瘤胃中原虫密度,增加了细菌密度,改变瘤胃中原虫的种属构成比例;使瘤胃内毛虫比例显著降低,使双毛虫和等毛虫比例显著提高。添加0.6%青蒿素能显著降低山羊瘤胃内菌体蛋白的微循环,使山羊瘤胃原虫吞噬速率和微生物氮循环量减少而提高饲料蛋白质的潜在利用效率。     

硫胺素和硫水平对山羊人工瘤胃代谢和微生物菌群的影响

【目的】探讨在不同硫水平条件下,添加硫胺素（维生素B1）对人工瘤胃内营养物质消化代谢的影响。【方法】按2×2因子试验设计,因子一为不同的氮硫比（高硫水平,即N﹕S=5﹕1;低硫水平即N﹕S=15﹕1）,因子二为不添加和添加硫胺素（0和60 mg•kg-1）进行人工瘤胃培养试验。【结果】 添加硫胺素对pH和NH3-N浓度的影响不显著;高硫水平能够抑制细菌蛋白的合成,显著提高了瘤胃培养液中原虫和细菌蛋白质的比值（P/WB）（P＜0.05）;在低硫水平下,添加硫胺素处理组TVFA的摩尔浓度和丁酸百分含量均高于不添加硫胺素组（P＜0.05）,而乙酸低于不添加硫胺素组。在高硫水平下,添加硫胺素处理组与不添加组之间总挥发性脂肪酸和单一脂肪酸的摩尔浓度无显著差异（P＞0.05）。高硫水平能够降低培养液中硫胺素的总量,而添加的硫胺素则增加了培养液中硫胺素的总量;高硫水平可以降低乳酸的浓度;同一氮硫水平下,添加硫胺素处理组的牛链球菌的相对数量比非添加组分别降低了5.90%（P＜0.05）和2.05%（P＜0.01）;添加不同水平的硫和硫胺素对溶纤维丁酸弧菌的相对数量的影响不显著（P＞0.05）。【结论】人工瘤胃中硫水平对瘤胃发酵有一定影响,高硫水平可显著降低培养液中的乳酸浓度,提高原虫蛋白质的合成量,而抑制细菌蛋白质的合成;无机硫和硫胺素在降低瘤胃内乳酸浓度和缓解瘤胃酸中毒中起重要作用,并且二者对乳酸浓度的影响存在互作效应。添加不同水平的硫和硫胺素能够降低瘤胃液中牛链球菌的相对数量,对瘤胃液中溶纤维丁酸弧菌的相对数量的影响不显著（P＜0.05）。     

日粮精粗比对山羊瘤胃内微生物蛋白微循环的影响

 【目的】以4只装有瘤胃瘘管的山羊为试验动物,研究不同精粗比日粮对山羊瘤胃微生态中原虫和细菌区系以及微生物蛋白微循环的影响规律。【方法】试验设精（玉米-豆饼）粗（稻草）比分别为10﹕90、30﹕70、50﹕50和70﹕30的4种日粮（A、B、C、D）,采用4×4拉丁方设计进行饲喂试验,采用荧光染色细菌技术测定瘤胃原虫对细菌的吞噬速率。【结果】日粮精粗比显著影响微生物细胞的密度。原虫密度C组最高;细菌和原虫的密度A组最低;日粮精粗比显著影响原虫吞噬的速率,A、B、C、D 4组的吞噬速率分别为：429.5、366.74、389.48、402.2 cells?cell-1?h-1,换算为对细菌N的吞噬速率分别为：2.319、1.98、2.103、2.172 pg N?cell-1?h-1。【结论】每天每头羊由于原虫的吞噬而造成的细菌N的循环损失估算分别为：136.49;369.02;485.99;440.56 mgN/（d?头）,即菌体蛋白损失为0.853、2.306、3.370和2.754 g/（d?头）,其中以C组菌体蛋白循环损失量最大,细菌周转率最高（3.07%）。     

人工瘤胃评价屎肠球菌对瘤胃发酵的影响

【目的】探讨屎肠球菌对瘤胃发酵的影响,以此评价屎肠球菌能否作为直接饲用微生物用于反刍动物的生产。【方法】利用持续动态人工瘤胃装置,采用完全随机试验设计,以不添加屎肠球菌发酵液为对照,研究了添加1.25×106和6.25×106mL-1屎肠球菌发酵液对瘤胃液pH、微生物蛋白(MCP)、氨态氮(NH3-N)、乙酸、丙酸、丁酸和总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度的影响。【结果】添加屎肠球菌对瘤胃pH值和MCP无显著影响(P>0.05),但能显著提高瘤胃NH3-N浓度(P<0.01);与对照组相比,1.25×106mL-1屎肠球菌液添加组显著提高了瘤胃液的乙酸与总挥发性脂肪酸浓度(P<0.05),而添加屎肠球菌对瘤胃丙酸和丁酸浓度及乙酸与丙酸的比例没有显著影响(P>0.05)。【结论】添加一定量的屎肠球菌,可在不改变瘤胃发酵类型的情况下促进饲料中碳水化合物的消化。     

不同品质粗饲料日粮对瘤胃发酵及主要纤维分解菌的影响

 【目的】研究不同品质粗饲料组成的混合日粮对绵羊瘤胃发酵功能和3种主要纤维分解菌的影响。【方法】以粗饲料分级指数GI为指标对粗饲料品质进行调配,在精粗比为2﹕8条件下配制3种混合日粮,其中含高GI粗饲料日粮组（H组,GI值＝2.89）、含中GI粗饲料日粮组（M组,GI值＝1.73）和含低GI粗饲料日粮组（L组,GI值＝0.65）。利用16S rRNA特异性寡核苷酸探针杂交法测定3种纤维分解菌的数量变化。【结果】三组试验动物瘤胃液pH维持在正常范围,各组间差异不显著（P＞0.05）,但H组pH变化更为平缓。随着GI指数的升高,瘤胃液NH3-N浓度呈升高势态,H组显著高于L组（P＜0.05）,乙酸浓度有降低的趋势,而丙酸浓度则有上升的趋势,乙酸/丙酸出现降低趋势,各试验组TVFA浓度的平均值差异不显著（P＞0.05）。黄化瘤胃球菌在绵羊瘤胃中相对含量的总平均值为1.18%,白色瘤胃球菌的相对含量为2.44%,琥珀酸拟杆菌的含量为10.07%。【结论】不同品质粗饲料日粮显著影响绵羊瘤胃产琥珀酸丝状杆菌的数量,随着粗饲料品质的升高,该菌的数量有增加的趋势;不同品质粗饲料日粮改变了瘤胃的发酵方式和发酵功能。     

日粮中添加硒对山羊瘤胃消化代谢的影响

在基础日粮中添加Ｎａ２ＳｅＯ３饲喂装有永久性瘤胃瘘管的河南本地空怀母山羊６０ｄ，结果表明，添加硒不仅不影响瘤胃液ＰＨ值，还能显著提高瘤胃液三氯醋酸沉淀蛋白和细菌蛋白含量；使瘤胃液原虫蛋白和氨氮浓度有升高趋势。能提高瘤胃发酵水平。改变瘤胃发酵类型，降低乙酸百分比，使丙酸显著增加，使瘤胃发酵趋于丙酸型；添加硒能显著提高血清总蛋白含量，降低血清尿素氮，显著提高山羊日增重。     

日粮添加钛对山羊瘤胃消化代谢的影响

试验分２个系列研究了日粮中添加铁对山羊瘤胃消化代谢及日增重的影响。系列Ⅰ体内试验结果表明，日粮添加钛不影响瘤胃液ｐＨ值；试验期与对照期相比，瘤胃液氨氮浓度明显升高（Ｐ＜０．０５）；瘤胃液三氯醋酸沉淀蛋白、细菌蛋白及原虫蛋白的含量均显著提高（Ｐ＜０；０５）；添加钦后瘤胃液总挥发性脂肪酸增加，乙酸、丁酸降低，但差异均不显著（Ｐ＞０．０５），而丙酸显著增加（Ｐ＜０．０５），乙酸／丙酸值从对照期的３．１５降至试验期的２．３３（Ｐ＜０．０５），说明添加钛使瘤胃发酵类型趋于丙酸型。添加钛使血清尿素氮明显降低（Ｐ＜０．０５），但对血清总蛋白含量、血糖水平无明显影响（Ｐ＞０．０５）。添加钛能显著提高山羊日增重（Ｐ＜０．０５）。系列Ⅱ体外培养试验结果表明添加钛后人工瘤胃中细菌蛋白、原虫蛋白、氨氮浓度以及挥发性脂肪酸含量等项指标与系列Ⅰ体内试验结果基本一致。     

日粮不同NFC/NDF比对山羊瘤胃发酵与瘤胃微生物区系结构的影响

【目的】探讨日粮中非纤维性碳水化合物/中性洗涤纤维（NFC/NDF）比对山羊瘤胃发酵、瘤胃细菌与瘤胃产乳酸菌菌群结构组成,以及瘤胃产乳酸菌、总细菌与大肠杆菌数量的影响。【方法】试验选用4只装有永久性瘤胃瘘管、健康阉割的长江珠三角白山羊,采用自身对照试验设计,共分3期进行,每期15 d,依次饲喂 NFC/NDF比值分别为0.42（Ⅰ期）、1.04（Ⅱ期）、2.73（Ⅲ期）的3期日粮,分别于第13、14和15天采集瘤胃内容物。采用PCR/DGGE（denaturing gradient gel electrophoresis）分析瘤胃微生物区系结构,采用real-time PCR定量瘤胃内容物中总菌、乳酸杆菌、牛链球菌与大肠杆菌数量。【结果】随日粮中NFC/NDF比值提高,瘤胃pH显著降低（P＜0.05）;瘤胃液中乳酸、乙酸、丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸、异戊酸和总挥发性脂肪酸（total violate fatty acid,TVFA）浓度均显著增加（P＜0.05）,而乙酸与丙酸比显著降低（P＜0.05）;DGGE图谱分析表明,来自NFC/NDF比值不同的瘤胃样品分别聚成一族;real-time PCR测定表明,随NFC/NDF比值提高,乳酸杆菌数量显著增加（P＜0.05）,总细菌数量显著下降（P＜0.05）,牛链球菌及大肠杆菌数量未发生显著变化（P＞0.05）。【结论】瘤胃发酵模式受日粮NFC/NDF比值的影响,随NFC/NDF比值增加,瘤胃发酵从乙酸型发酵转向丙酸型发酵;同时,瘤胃微生物区系组成发生改变,瘤胃细菌总量下降。     

日粮精粗比对奶牛瘤胃发酵及泌乳性能的影响

选择4头安装有永久性瘤胃瘘管的泌乳奶牛,按4×4拉丁方设计,分别饲喂精粗比约为30∶70的“高低质粗料型”日粮、30∶70的混合型高青贮日粮、50∶50的精粗料比例相当的日粮及65∶35的高精料日粮等4种不同精粗比日粮,研究日粮精粗比对奶牛瘤胃发酵及泌乳性能的影响。结果显示,日粮精粗比对奶牛瘤胃pH值,氨氮质量浓度,总挥发性脂肪酸、丙酸、丁酸的浓度和乙酸/丙酸、(乙酸+丁酸)/丙酸有显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)影响,而对瘤胃乙酸浓度影响不显著(P>0.05);饲喂不同精粗比日粮,奶牛乳产量、4%标准乳产量均有显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)差异,而乳脂、乳蛋白、乳糖、非脂固形物及总固形物的含量差异均不显著(P>0.05),但其产量随乳产量的增加而增加,存在显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)差异。结果表明,4种精粗比日粮能使瘤胃发酵和乳成分含量保持稳定,但影响瘤胃挥发性脂肪酸浓度和乳产量;低质和优质粗料的合理搭配有利于稳定瘤胃内环境和乳脂含量,且能改善泌乳性能。     

超声耦合双水相体系提取茶皂素的工艺优化与机制探讨

【目的】茶皂素是一种具有广阔应用前景的天然活性物质,纯度是限制其应用和价值的关键因素。探究超声耦合双水相提取（Ultrasound-assisted two-phase aqueous extraction, UAATPE）油茶粕茶皂素的工艺条件及其提取机制,以开发纯度高且高效的提取技术,为油茶粕高值化利用提供技术指导。【方法】以油茶粕为原料,在单因素基础上,利用Plackett-Burman设计筛选影响得率的关键因素,经Box-Behnken设计优化提取工艺;通过比较传统乙醇提取法和水提法的提取物得率和纯度,评价UAATPE法茶皂素提取效果;结合扫描电子显微镜分析油茶粕微观结构,初步探讨UAATPE法提取机制。【结果】影响茶皂素得率的关键因素为乙醇质量分数、硫酸铵质量分数和超声时间,经Box-Behnken设计优化的最佳工艺参数为：乙醇质量分数27.50%（w/w）,硫酸铵质量分数19.60%（w/w）,液固比50﹕1,超声时间32 min,超声功率300 W,提取温度60℃,在此条件下茶皂素得率为（26.21±0.54）%。与传统乙醇提取法相比,UAATPE法的茶皂素得率虽差异不显著,但其纯度提高了6.57%（P<0.05）。相较于传统水提法,UAATPE法提取的茶皂素得率和纯度分别提升了17.74%和40.23%（P<0.01）。微观结构显示UAATPE法处理的油茶粕因超声波空化效应,加剧了油茶粕组织破坏,产生大量空洞和强烈表面收缩,有效促进油茶粕茶皂素释放。UAATPE提取过程,茶皂素在双水相系统中首先经过固液提取进入电导率高的底相,然后经液液萃取迁移至极性较大的顶相,从而达到初级纯化,提升茶皂素纯度的效果。【结论】采用UAATPE法可以显著提高茶皂素得率和纯度,为油茶粕的高效利用提供了新方法。     

徐淮白山羊瘤胃细菌和原虫的类群结构研究

 【目的】研究以稻草为主的日粮条件下徐淮白山羊瘤胃细菌和原虫的类群结构。【方法】以4只安装瘤胃瘘管的徐淮山羊为试验动物,PCR扩增瘤胃细菌16S rDNA序列,利用分子克隆与测序分析、细胞计数等技术,解析瘤胃细菌和原虫群体的类群组成。【结果】获得的细菌克隆基本归为两簇：与瘤胃球菌R.bromii YE282相似性为95%的XHGR1、与瘤胃R-7菌相似性为98%的XHGR3,XHGR2位于另立的R. flavefaciens簇。瘤胃球菌属细菌占细菌克隆总数的比例较高（33.33%）,原虫生物量略低于细菌,占瘤胃生物总量的44.83%。群体主要有内毛属、双毛亚科、前毛属、头毛属和等毛科等原虫,其中内毛属原虫比例最高为74.25%。【结论】以稻草为主的日粮条件下,徐淮白山羊瘤胃中细菌和原虫生物量相近,瘤胃球菌属细菌和内毛属原虫分别是瘤胃细菌和原虫区系的优势类群。     

辣椒碱与茶皂素对棉蚜的毒力测定及田间药效试验

[目的]为明确辣椒碱和茶皂素对棉蚜的防治效果.[方法]室内试验测定辣椒碱和茶皂素对棉蚜的杀虫活性,研究辣椒碱、茶皂素混配的共毒系数;将辣椒碱和茶皂素配制成微乳剂,进行5;辣椒碱·茶皂素微乳剂对棉蚜的田间防效实验.[结果]辣椒碱对棉蚜在处理24和48 h的LD50值分别为343.82和271.54 mg/L;茶皂素对棉蚜在24和48 h的LD50值分别为512.85和321.27 mg/L;二者混配在处理24 h的共毒系数为137.16,表现为增效作用.[结论]5;辣椒碱·茶皂素微乳剂速效性和持效性较好,各处理药后3 d达到最高防效,7 500 g/hm2施药量处理,最高防效为57.40;,略低于吡虫啉450 g/hm2处理时的防效,但是二者没有显著性差异;7 500与3 750 g/hm2的处理间没有显著性差异.     

体外条件下不同精粗比对瘤胃纤毛虫种属变化的影响

利用双外流人工瘤胃模拟系统,研究了饲料不同精粗比对瘤胃纤毛虫种属及瘤胃内环境的影响。选用安装有永久性瘤胃瘘管的成年杂交阉牛作为体外连续培养的瘤胃液供体动物。将风干羊草加混合精料,压制成颗粒料投入发酵罐,罐内的液相稀释率为12%/h,选用两种精粗比,分别为20/80和40/60。结果表明,随着发酵罐内饲料精粗比的提高,纤毛虫总数随之升高,但差异不显著(P>0.05)。除前毛属外,其余各属纤毛虫的数量均呈上升趋势,且密毛属和内毛属明显升高(P<0.05),其余各属变化不显著。提高日粮精料水平导致发酵罐内的pH值明显降低,并使总VFA浓度升高,NH3-N浓度下降,但差异不显著。乙酸和丁酸的摩尔浓度随日粮精料水平升高呈上升趋势(P>0.05),丙酸的摩尔浓度则显著增加(P<0.05)。增加日粮中的精料含量显著降低了乙酸的摩尔比例,并使丙酸的摩尔比例明显增加(P<0.05),表明提高精粗比明显改变了发酵罐内的发酵类型。     

日粮添加肉桂醛对奶牛公犊生长、健康及瘤胃发酵性能的影响

【目的】在犊牛开食料中添加肉桂醛,研究其对早期奶牛公犊生长性能、健康、瘤胃发酵及微生物区系的影响,为肉桂醛在早期犊牛的培育应用提供理论依据。【方法】试验选24头出生2周龄、体重相接近,健康状况良好的荷斯坦奶牛公犊,分为对照组和试验组,每组3个重复,每个重复4头,对照组饲喂基础开食料,试验组在开食料中添加0.3%含油率为15%的包被肉桂醛。哺乳期预饲期6 d,正饲期27 d,两组饲喂等量牛奶,开食料及燕麦草自由采食,断奶日通过胃管采集瘤胃液;断奶后全部动物按照相同饲养管理方式继续饲喂51 d,试验末通过胃管采集瘤胃液。试验期的两个阶段均测定奶牛公犊采食量,生长性能、体尺指标、粪便评分和瘤胃挥发性脂肪酸指标,并基于16SrDNA基因高通量测序法对奶牛公犊瘤胃细菌区系测定分析。【结果】1)在采食量和生长性能方面,犊牛哺乳阶段、断奶后以及试验全期,试验组的平均日增重、干物质采食量、料重比等指标与对照组差异不显著(P>0.05),试验组与对照组在体尺指标中各阶段差异不显著(P>0.05);2)在犊牛健康方面,试验组犊牛腹泻率均低于对照组,但与对照组腹泻率差异不显著(P>0.05);3)在瘤胃发酵指标方面,断奶日试验组各挥发性脂肪酸的含量均低于对照组,但差异不显著(P>0.05);试验末试验组乙酸、丙酸、丁酸、戊酸和总挥发性脂肪酸极显著高于对照组（P<0.01）;4) 试验末,肉桂醛显著提高了瘤胃香农多样性指数,降低了辛普森指数;在门水平上降低了Bacteroidetes菌群丰度,提高了Firmicutes和Actinobacteria丰度;在属水平上仅提高了Prevotella丰度。【结论】通过开食料对犊牛补饲0.3%含油率为15%的包被肉桂醛对哺乳期及断奶后的生长性能没有影响,但降低了腹泻率,显著提高了断奶犊牛瘤胃挥发性脂肪酸浓度并降低了乙酸/丙酸比例,提高了瘤胃细菌菌群多样性和Firmicutes和Prevotella菌丰度,表明日粮中添加0.3%的包被肉桂醛对犊牛生长性能无负作用,但可改变瘤胃微生物区系并调控瘤胃发酵模式。     

精料水平对小尾寒羊瘤胃代谢的影响

6只 8月龄小尾寒羊公羊 (平均体重为 2 9.98kg)安装永久性瘤胃瘘管。采用对比试验设计 ,分 15 0g d、2 5 0g d、35 0g d、4 5 0g d四个混合精料水平。采集瘤胃液测定pH值、氨氮浓度和乙丙酸浓度。试验结果表明 :试羊瘤胃液平均pH值在 6 .4 8～ 6 .89范围内变动。随精料水平的提高 ,pH值下降 (P <0 .0 1)。瘤胃液平均氨氮浓度的变化范围为 2 1.6 8～ 30 .0 4mg 10 0ml,其浓度随精料水平的提高而增加 (P <0 .0 1)。随精料水平的提高 ,瘤胃液乙酸、丙酸摩尔浓度饲喂后峰值随时间点的推移有延迟的趋势。乙酸、丙酸浓度随饲喂精料水平的提高而增加 ,且差异显著 (P <0 .0 5 )。乙丙酸摩尔浓度比随精料水平的提高而下降 ,但不同精料水平间差异不显著 (P >0 .0 5 )。