口蹄疫病毒P1全长基因表达载体的构建及对马铃薯的转化

将自主克隆的FMDV P1全长基因构建到植物表达栽体pB1131上,通过农杆茵介导法转入马铃薯,经PCR及Southem杂交等方法,证明了P1基因已整合到马铃薯染色体基因组中。这是国内外将FMDV P1全长基因转到马铃薯中的首次报道,为进一步利用转基因植物生产FMD疫苗和研制开发新型基因工程疫苗奠定了基础。     

口蹄疫病毒T细胞表位研究概况

口蹄疫病毒(FMDV)T细胞表位的研究对于阐明FMDV的结构、功能及FMDV疫苗的研制、病原的检测至关重要。从研究方法、研究现状及口蹄疫表位疫苗等方面对口蹄疫病毒T细胞表位的研究概况作一综述。     

以偶联多肽为抗原建立检测O型猪口蹄疫 病毒抗体的ELISA方法

以偶联多肽为抗原建立检测O型猪口蹄疫病毒抗体的ELISA 方法。通过FMDV 多肽序列的筛选、化学 合成及反应原性鉴定,将多肽与非蛋白结构多聚体载体进行偶联。利用偶联多肽作为抗原,通过方阵滴定确定偶联 多肽、血清及HRP 的最佳工作浓度,确定方法的阴阳性临界值,然后进行特异性试验、敏感度测定及临床猪血清样 本的免疫效果评估等。结果表明,偶联多肽具有良好的反应原性,最佳包被浓度为1.0 滋g/mL,血清最佳稀释度为1: 32,HRP 最佳稀释度为1:8 000,方法特异性好,敏感度高,操作方便省时,能够对FMDV 的自然感染进行检测,也可 对FMDV 免疫后的猪血清抗体水平进行评估。     

以合成肽为抗原建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测ELISA试剂盒

【目的】建立合成多肽抗原检测FMD NSP抗体的ELISA方法。【方法】固相法合成特异性FMDV NSP B细胞表位肽,将其偶联在BSA载体蛋白上,作为抗原包被在ELISA板上,制备检测抗FMDV NSP抗体的ELISA试剂盒,并对该试剂盒进行方法考核。【结果】抗原包被浓度选择2.5μg·mL-1;检测199份血清标本,与美国UBI商品试剂盒符合率达到96.48%,与国产3ABC ELISA比较,符合率为97.48%,显示极好的一致性。【结论】该合成肽ELISA试剂盒可以用以检测NSP抗体,从而鉴别FMD的自然感染与疫苗免疫,试剂盒特异性强,重复性好、稳定性高,操作简便。     

“O”型口蹄疫病毒生物合成多肽苗保护性抗体的免疫应答

ｐＸＺ５００持粒表达的生物合成多肽苗分别以总剂量３２μｇ／头和０．３４６ｍｇ／头分两次免疫接种豚鼠和猪，均可获得保护性抗体的良好免疫应答。豚鼠和猪在第一次免疫接种后４０ｄ和４５ｄ时，其血清的乳鼠保护指数均在２．０以上；分别用５０个发病单位强毒攻击，均可获得１００％保护。     

持续感染口蹄疫病毒VP1蛋白对细胞转录组的影响

【目的】通过转录组测序（RNA-Seq）方法分析持续感染口蹄疫病毒结构蛋白VP1诱导的PK-15细胞基因表达谱的变化,探索VP1蛋白对宿主细胞信号通路的影响。为后续开展VP1影响FMDV持续感染相关机制研究提供基础数据和理论支持。【方法】PK-15细胞分别转染pCAGGS-HA（对照载体）、pCAGGS-HA-Pi-VP1质粒,转染36 h后,Western blot检测VP1蛋白表达,同时提取两组细胞总RNA进行转录组测序（每组3个重复,2组6个样本）。将测序所得的序列进行过滤比对,获得差异表达基因后,对差异表达基因进行了生物信息学分析。采用qRT-PCR验证关键差异表达基因的表达。【结果】RNA-Seq共鉴定出3 376个差异表达基因（DEGs）|log2(Fold Change)|>0和padj<0.05,其中上调基因1 744个,下调基因1 632个。许多参与免疫反应和炎症的效应基因差异表达。GO和KEGG富集分析显示,差异基因GO条目绝大部分与核糖体有关,而KEGG富集中涉及了与天然免疫相关的信号通路,如TNF信号通路、Toll受体信号通路。【结论】pCAGGS-...     

影响口蹄疫病毒转译起始的因素

口蹄疫病毒的转译起始由一基因组内的顺式作用元件被称为内部核糖进入位点(IRES)所介导.FM DV的IRES的二级结构、三级结构以及它们之间的相互作用,是维持其转译活性所必需的.在这个转译过程中。E IF 4G,E IF 4B,E IF 4A协同的结合到IRES的3'区域,然后小核糖体亚单位、大核糖体亚单位结合到连有起始因子的IRES复合物上,核糖体在小RNA的IRES上得到组装,转译开始。     

口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因的表达及反应原性鉴定

[目的] 研究口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因的表达及反应原性鉴定。[方法] 以含有FMDV 3ABC基因的质粒为模板,应用RT-PCR技术扩增口蹄疫病毒非结构蛋白3AB基因并进行序列测定,将3AB基因克隆至表达载体pET-28a（＋）,选取阳性克隆转化BL21感受态用IPTG诱导表达,并进行SDS-PAGE鉴定与Western-bolt检测分析。[结果] 经SDS-PAGE和Western-bolt分析表明,在大肠杆菌中成功表达了3AB蛋白,表达的目的蛋白能与FMDV阳性血清发生特异性反应。[结论] 该项研究为应用以重组FMDV非结构蛋白为抗原建立感染和免疫动物的鉴别诊断方法提供了依据。     

利用乙肝核心抗原展示口蹄疫病毒2C蛋白表位

[目的]利用乙肝核心蛋白(Hepatitis B virus core protein,HBc)自我组装的能力将口蹄疫病毒(Foot and-mouth disease virus,FMDV)非结构蛋白2C的抗原表位插入到HBc的主要免疫优势区(Major immunodominant region,MIR),使2C的表位展示在衣壳表面,鉴定其是否具有免疫反应性.[方法]人工合成筛选的2C蛋白表位序列,将其插入HBc的MIR区,构建原核表达质粒p△HBc2C,室温条件下,1mM IPTG过夜诱导表达蛋白,诱导物离心后SDS-PAGE凝胶电泳分别检测沉淀和上清是否有蛋白表达,Western-blot鉴定表达蛋白是否具有免疫反应性.[结果]SDS-PAGE和Western-blot鉴定,沉淀中25 kD处有特异性条带出现,与预期的23 kD蛋白相符,证明2C蛋白具有免疫反应性.[结论]利用HBc自我组装空衣壳的能力展示筛选的2C蛋白抗原表位具有免疫反应性.     

以合成肽为抗原建立口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测ELISA试剂盒#br#

【目的】建立合成多肽抗原检测FMD NSP 抗体的 ELISA 方法。【方法】固相法合成特异性FMDV NSP B细胞表位肽,将其偶联在BSA载体蛋白上,作为抗原包被在ELISA板上,制备检测抗FMDV NSP抗体的ELISA 试剂盒,并对该试剂盒进行方法考核。【结果】抗原包被浓度选择2.5μg&#8226;mL-1; 检测199 份血清标本,与美国UBI商品试剂盒符合率达到96.48%,与国产3ABC ELISA比较,符合率为97.48%,显示极好的一致性。【结论】该合成肽ELISA试剂盒可以用以检测NSP抗体,从而鉴别FMD的自然感染与疫苗免疫,试剂盒特异性强,重复性好、稳定性高,操作简便。     

萝卜病毒病与过氧化物酶关系的初探

萝卜接种TuMV病毒后过氧化物酶活性和同功酶电泳研究表明:萝卜对芜菁花叶病毒的抗性与叶片中过氧化物酶活性呈显著正相关。抗病的萝卜材料不管是否接种TuMV,过氧化物酶活性都明显高于感病植株。抗病萝卜最高达215.58酶活单位,感病萝卜最低的只有97.59酶活单位;前者比后者高121.13％。感病萝卜不接种病毒时,叶片中过氧化物酶活性很低。接种病毒后增加较多,但绝对数值还低于抗病萝卜。抗病萝卜叶片中过氧化物酶同功酶带宽于感病萝卜。初步认为过氧化物酶变化是萝卜抗病毒病的内在因素之一。     

大白菇贮藏期间生理生化变化的研究

在0℃条件下,采用0.06mm聚乙烯袋扎口包装(分扎口和加脱乙烯剂后扎口两种处理)贮藏大白菇,由于袋內具有较高浓度的二氧化碳(12.8％以上)和极低浓度的氧(0.2～1.0%),获得了良好的保鲜效果。同时扎口及加脱乙烯剂后扎口处理与折口处理的大白菇相比,多酚氧化酶活性受到了抑制,细胞膜渗透率、水浸液的O·D值明显减低,浸出液的pH值有所下降。但三种处理的蛋白酶活性差异不大,均随贮藏期的延长而显著降低。此外,扎口与加脱乙烯剂后扎口处理的大白菇在感官新鲜度上无明显差异。     

水稻薄层干燥的试验研究

通过对黑龙江省几个水稻品种进行薄层干燥试验,分析了不同的初始水分、热风温度、表现速度及品种对水稻薄层干燥速率的影响,建立了两个产量较大的水稻品种的薄层干燥方程;在连续通风干燥条件下探讨水稻爆腰率增值规律。     

人工条件下影响板栗花粉发芽的若干因素研究

以26年生的实生罗田板栗花粉为试材,对采粉时期、枝梢类别、花粉干燥处理方法,花粉贮藏时间和条件、以及硫酸锰等对板栗花粉发芽的影响进行了研究。结果表明:盛花期花粉的发芽率显著高于初花期;雄花枝上的花粉发芽率高于结果枝;花粉室温贮藏以干燥、遮光条件为佳,并且以贮藏6天的花粉发芽率最高;适当浓度的硫酸锰显著地促进板栗花粉发芽,但影响其花粉管的的正常生长.     

固结快剪条件下细粒土抗剪强度指标影响因素分析研究

在实际工程中细粒土有着广泛的应用,其抗剪强度指标受多种因素影响,变化复杂,不易准确确定。本文在实际调查的基础上,考虑了孔隙比、含水率、塑性指数等3种主要因素对抗剪强度指标的影响。在固结快剪的条件下,利用正交设计的方法优化试验方案进行细粒土抗剪强度指标影响因素的研究。根据试验结果,分析了抗剪强度指标对各因素的敏感性;并利用多元回归的方法建立了粘聚力和内摩擦角与孔隙比、塑性指数、含水率等3个因素的回归方程,为细粒土抗剪强度指标的合理确定提供了一定的理论支持。     

哈尔滨地区番茄病毒病的发生与毒源类型鉴定的研究

1981和1982年,在哈尔滨地区11个点,调查不同栽培方式和不同品种番茄病毒病的发生情况和以含抗 TMV 基因的品种为亲本所获杂种一代抗病性的表现,并对病毒病毒源类型进行鉴定。结果指出,感病程度因不同品种而异,同一品种在不同栽培条件下抗病性也不同。强力米寿(具有抗 TMV 的 Tm-1基因)有一定的抗病性,但在某些条件下发病率很高。以矮黄(具有抗 TMV 的 Tm-2nv 基因)和俄亥俄 MR-9(具有抗TMV 的 Tm-2~a 基因)为亲本的 F_1,田间抗病性显著高于对照品种6613。两年来,先后25批采集病毒标样共250个,在无虫网室内经过生物鉴定和物理抗性测定,指出在哈尔滨地区番茄病毒病的主要毒源类型是烟草花叶病毒(TMV)。研究结果指出,用含 Tm-2nv 和 Tm-2~a 抗病基因的番茄品种与经济性状优良的番茄品种杂交获得抗病性高、经济性状优良的杂种一代或育成新的抗病品种,是解决番茄上烟草花叶病毒的有效途径。     

主要栽培因素对无子西瓜产量和果实品质的影响

主要栽培因素对无子西瓜产量和果实品质影响的研究结果表明，在湖南西瓜生长前期低温、多雨、寡照和后期高温、干旱的气候条件下，无子西瓜的播种期：海拔３００ｍ左右的平湖、丘陵区以３月底、４月初为宜，海拔６００～８００ｍ的高寒山区以５月上、中旬为宜，栽培密度为７５００株／ｈｍ２，双蔓式整枝的产量最高，不同有机肥与化肥配施比单施化肥产量高，果实品质好．     

连作对大豆根部酚含量、病害及产量的影响

本文探讨了连作大豆根部酚含量、病害与产量的关系以及施化肥对克服大豆连作的障碍效应。结果表明,连作大豆的根部病害加重,酚含量增加;连作施化肥对大豆根系内的酚含量无明显影响;但施化肥的增产效应连作比轮作更明显。     

不同生态因子对谷子蛋白质脂肪含量影响的研究

研究结果表明，在亩施肥０—８０公斤范围内，蛋白质、脂肪合量与氮、磷、钾肥施用量呈正相关，即随着氮磷钾肥施用量的增加而增加，在整个生育期蛋白质，脂肪含量与积温、降雨量、日照时数呈负相关；一定剂量的化学因子；ＥＤＴＡ、锗、β－环糊精拌谷种能提高谷子蛋白质脂肪含量．通过分析还提出了改善谷子品质的途径．