不同浓度忧遁草提取物抑制阪崎肠杆菌生长模型的研究

人类感染阪崎肠杆菌(Cronobacter sakazakii)会引起一系列疾病,而忧遁草(Clinacanthus nutans CN)是一种具有消炎抑菌作用的天然药用植物。为了量化评估忧遁草对阪崎肠杆菌的抑制作用,以阪崎肠杆菌为研究对象,探究在阪崎肠杆菌最适生长温度37℃下,不同浓度的忧遁草提取物(25、50、75、100mg/mL)对在BHI中生长的阪崎肠杆菌的影响。结果表明,添加浓度为10%的体系中,忧遁草对延长阪崎肠杆菌的延滞期最长时常为4.116h,阪崎肠杆菌生长速率为1.094,而空白对照组分别为1.253h、1.726。可见,忧遁草对阪崎肠杆菌具有较好的抑制作用,且浓度越高,抑制效果越好。     

海藻糖对阪崎肠杆菌温度耐受性的影响研究

[目的]研究在磷酸缓冲液中添加不同浓度海藻糖的条件下阪崎肠杆菌对高温、低温的耐受性,为食品加工过程中控制阪崎肠杆菌污染提供参考。[方法]通过试验观察阪崎肠杆菌在不同温度条件下存活状况来反映其对温度的耐受性。[结果]阪崎肠杆菌在一定的高温条件下,其存活率与海藻糖的浓度成正比。[结论]海藻糖对阪崎肠杆菌有保护作用,随着海藻糖浓度的升高,其保护作用越明显。     

液态奶中阪崎肠杆菌污染状况的调查

[目的]了解某地区液态奶中阪崎肠杆菌的污染情况,为政府加强对液态奶的管理提科学依据。[方法]采用改进方法和PCR法检测液态奶。PCR适宜反应体系为：6μl 10×PCR buffer,4μl dNTPs混合物,2．5Mg^2＋ μl（25mM）,2μl 10μmol正向引物,2山10μmol反向引物,0．25μl（5U／μl）Taq,23．25μl水,总反应体系为50μl;其适宜的PCR扩增程序为：PCR反应采用冷启动,95℃预变性5min;变性95℃ 1min,退火61℃0．5min进行35个循环。PCR反应产物在2％的琼脂糖凝胶中进行电泳,凝胶成像系统观察结果,检出率为2．4％,同时对阪崎肠杆菌的毒力进行了研究,所筛出的4株阪崎肠杆菌均导致受试昆明小鼠死亡。[结果]从167份液态奶样品中检出4株阪崎肠杆菌。     

一种基于TaqMan探针法的阪崎肠杆菌qPCR全自动检测技术体系的建立

[目的]建立快速准确地检测食物样品中食源性致病菌的体系。[方法]配套湖州市微生物制剂与农产品安全重点实验室自主研发的微生物分子检测仪,建立一种基于Taq Man探针法的阪崎肠杆菌q PCR检测体系。[结果]体系建立成功,标准曲线斜率为-3.44,R~2=0.995 5,扩增效率为95.3%。[结论]该q PCR体系特异性强,灵敏度高,明显缩短了检测时间,并具有良好的稳定性与重复性,为食品中阪崎肠杆菌的高通量和自动化检测提供了一个新的途径。     

食品中阪崎克罗诺杆菌的药物敏感性及分子分型研究

克罗诺杆菌是一种革兰氏阴性菌，是配方粉中威胁婴幼儿健康的主要致病菌。近年来，乳制品及食品中常有克罗诺杆菌耐药株的报道，耐药株的出现给临床治疗带来巨大挑战。为探究PFGE型别与耐药表型之间的关联性，采用BD PhoenixTM-100全自动细菌鉴定及药敏系统对食品分离的68株阪崎克罗诺杆菌进行药敏检测，共选择19种抗生素，并采用PFGE对其进行分子分型。结果表明：4株阪崎克罗诺杆菌具有耐药性，耐药率为5.88%。其中，3株对头孢唑啉耐药，1株对四环素耐药。18株菌表现为中介，其中16株对头孢唑啉中介，2株对氯霉素中介。所有菌株对其余16种抗生素均敏感。68株阪崎克罗诺杆菌可分成58个PFGE带型，其中PT037、PT050、PT054、PT007、PT043及PT046带型分别含有4、3、3、2、2、2株菌，其余52个带型各含1株菌，带型较分散。3株头孢唑啉耐药菌株包含3个PFGE带型，18株中介菌株包含16个PFGE带型。检测的阪崎克罗诺杆菌食品分离株耐药率较低，未发现多重耐药菌株，且呈现出高度基因多态性，菌株PFGE带型与耐药性之间无明显相关性。     

陕西市售婴幼儿食品中阪崎克罗诺杆菌流行状况及相关特性研究

对陕西省62个品牌的366份市售婴幼儿配方乳粉和米粉及其他食品中阪崎克罗诺杆菌的污染状况进行调查,并对分离株的相关特性进行分析,旨在阐明陕西市售婴幼儿食品的食用安全性。结果表明,87份样品检出阪崎克罗诺杆菌阳性,平均检出率为23.8%。乳粉阳性样品检出率为18.3%,米粉为27.3%,其他婴幼儿配方食品检出率20.0%。共检出169株阪崎克罗诺菌,其中168(99.4%)株对利福平产生抗性,对其他抗生素耐药的菌株比例依次为阿莫西林20.12%、链霉素18.93%、四环素17.16%、氨苄西林12.43%、庆大霉素11.24%和头孢曲松0.59%等。135株(79.88%)分离株携带ompX基因,120株(71.01%)携带cpa基因、111株(65.68%)携带sip基因、93株(55.03%)携带hly基因。按照95%的相似性,169株分离株脉冲场凝胶电泳(Pulse field gel electrophoresis,PFGE)分型后可被分为4个大簇、8个小簇和1个单基因型,部分源于不同品牌或批次食品的菌株基因型相似性较高,表明陕西省市售婴幼儿配方粉及婴幼儿食品中阪崎克罗诺杆菌染问题不容忽视,存在严重的食品安全危胁。     

婴幼儿配方乳粉中阪崎肠杆菌检测方法探讨

通过对婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的菌落形态、生化特性等方面的试验,确定采用灭菌蒸馏水(DW)前增菌、肠道菌增菌肉汤(EE)增菌、显色培养基(X--αGlcA)分离培养、再以API20E生化系统鉴定的方法为检出该菌的理想方法。     

阪崎克罗诺杆菌中转座子拷贝数实时定量PCR检测方法的建立

[目的]建立检测阪崎克罗诺杆菌中转座子拷贝数的实时定量PCR方法。[方法]以单拷贝持家基因atpD作为内参基因,建立同时含有单拷贝持家基因atpD和EZ-TN5转座子的重组质粒;建立atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测的标准曲线,并利用所建立的标准曲线,对3株阪崎肠杆菌突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子的拷贝数进行检测,并计算其比值。[结果]atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测标准曲线的相关系数分别为0.999和0.998;3株突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子拷贝数比值分别为0.98、1.17与0.91,证明突变株中转座子为单拷贝。[结论]该研究所建立的实时定量PCR方法实用性强,可替代Southern杂交用于不同细菌中EZ-TN5转座子拷贝数的检测。     

Establishment of Real-Time Ouantitative PCR Method for Determination of Transposon Copy Number in Cronobacter sakazakii

[目的]建立检测阪崎克罗诺杆菌中转座子拷贝数的实时定量PCR方法.[方法]以单拷贝持家基因atpD作为内参基因,建立同时含有单拷贝持家基因atpD和EZ-TN5转座子的重组质粒;建立atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测的标准曲线,并利用所建立的标准曲线,对3株阪崎肠杆菌突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子的拷贝数进行检测,并计算其比值.[结果]atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测标准曲线的相关系数分别为0.999和0.998;3株突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子拷贝数比值分别为0.98、1.17与0.91,证明突变株中转座子为单拷贝.[结论]该研究所建立的实时定量PCR方法实用性强,可替代Southern杂交用于不同细菌中EZ-TN5转座子拷贝数的检测.     

新型DBI试剂盒在食品微生物生化鉴定中的应用

考查新研制的克罗诺杆菌属和单增李斯特氏菌干制生化鉴定(DBI)试剂盒在微生物生化鉴定中的应用效果。通过标准菌株的比对试验和样品分离菌株的鉴定,比较DBI试剂盒与传统微量生化试验管的鉴定结果,并与API20E细菌鉴定系统比对。结果表明,DBI试剂盒鉴定标准菌株的准确率达到100%;对样品中分离的阪崎克罗诺杆菌和单增李斯特氏菌疑似菌株,3种鉴定方法的生化反应结果完全一致。DBI试剂盒能准确、快速、简单地进行生化鉴定。