侵染果蔗的甘蔗黄叶病毒RT-PCR检测鉴定

根据GenBank登录的SCYLVCP基因序列,设计特异性引物,应用RT-PCR方法从黑皮果蔗病株中克隆甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因,扩增出608个核苷酸(nt)的特异片段。核苷酸和氨基酸序列分析结果表明,该片段包含甘蔗黄叶病毒(SCYLV)外壳蛋白基因的全长,编码196个氨基酸,与国内外已报道的SCYLV分离物同源性达96%以上;从构建的来自不同地区18个分离物的系统进化树得出本研究分离到的SCYLV-FJ Badila属于BRA-PER基因型;对福建省果蔗种植区长泰、龙文、同安等地的果蔗进行采样检测,结果表明,福建省果蔗普遍受到SCYLV的侵染。     

广西甘蔗黄叶病调查及3种病毒基因型在广西的分布

[目的]探明甘蔗黄叶病在广西蔗区的发生情况,明确甘蔗黄叶病毒（SCYLV）基因型类型和地理分布,为甘蔗抗病育种和健康种苗生产提供科学依据.[方法]从广西蔗区采集不同品种（品系）显症或不显症甘蔗样品,采用特异引物（P1/P2）进行RT-PCR检测.甘蔗黄叶病病毒基因型鉴定采用3对特异引物BRA-PER-F/BRA-PER-R、REU-F/B-REVd和CUB-F/CUB-R进行RT-PCR鉴定.[结果]SCYLV RT-PCR检测结果,124个样品中有57个样品可扩增出大小约630 bp的目的条带,扩增产物与GenBank中已报道的SCYLV CP基因序列同源性达95％～99％.甘蔗黄叶病调查结果,124个样品中57个样品检测出SCYLV,感染率为46.0％.广西北部蔗区黄叶病感染最严重,SCYLV检出率为76.0％;桂西、桂中、桂南蔗区分别有50.0％、40.0％和36.8％的品种检出SCYLV;桂东蔗区SCYLV阳性检测率最低,为16.6％.在所调查的甘蔗品种中以柳城03-182、桂糖21、粤糖55和粤糖93-159感染SCYLV比较严重,主栽品种ROC22在柳城、宜州、钦州和金光农场均检测出阳性.病毒基因型调查结果,广西甘蔗黄叶病病毒基因型存在巴西-秘鲁（BRA-PER）、留尼汪岛（REU）和古巴（CUB）基因型等3种.主要以CUB型为主,占63.2％,除东部和西部蔗区外其他蔗区均有分布;其次是BRA-PER基因型,占56.1％,每个生态蔗区均有分布;REU基因型占5.3％,分布于柳州、凭祥、南宁蔗区.[结论]甘蔗黄叶病SCYLV已在广西各主要蔗区发生且蔓延,其病毒基因型存在3种且有不同程度分布.     

粤北翁源蔗区甘蔗宿根矮化病调查

为明确粤北翁源蔗区甘蔗宿根矮化病(Ratoon Stunting Disease,RSD)的发生状况,给甘蔗健康种苗生产提供科学依据,本研究通过斑点酶链免疫试验(DB-EIA),对随机采自翁源蔗区的232个蔗茎样品进行检测.结果表明:在232个蔗茎样品中,RSD检出率为28.4%;主要栽培品种新台糖22号、粤糖83-271、粤糖93-159、新台糖16号、粤糖85-177、黑皮果蔗的RSD检出率分别为3.2%、54.8%、54.2%、17.9%、50.0%和100.0%;坝仔、周陂、庙墩、龙仙等镇的甘蔗RSD发生较重,检出率分别为37.5%、36.4%、34.4%和30.4%;新植蔗的RSD检出率为35.6%,宿根蔗的RSD检出率为26.0%,田块的RSD检出率达73.5%,说明甘蔗宿根矮化病在翁源蔗区已普遍发生,且主栽品种感病严重.     

广西地区甘蔗黄叶病病毒分子鉴定

[目的]为广西甘蔗黄叶综合征（YLS）的分子检测和抗病育种提供参考。[方法]采集显症甘蔗叶样本，通过提取总RNA，利用引物P1／P2对样本递行反转录RCR（RT-PCR）扩增，对广西地区甘蔗黄叶病的病原体进行分子鉴定。[结果]经引物P1／P2扩增出630 bp的目的片段。氨基酸和核苷酸序列分析结果表明，该片段是甘蔗黄叶病毒（SCYLV）外壳蛋白基因的一部分，与其他国家SCYLV分离物同源性达95％-99％。[结论]广西甘蔗黄叶病病原确是SCYLV，该病毒可能是近年从区外或境外传入的。     

甘蔗黄叶病毒的RT-PCR检测技术

以甘蔗黄叶病毒(ScYLV)特异性引物YLSF111和YLSR462为引物,对福建蔗区8个罹病品种的疑似病株进行RT-PCR检测,扩增出352 bp特异性片段.将PCR产物克隆后测序,序列分析表明,该片段是ScYLV外壳蛋白(CP)基因的一部分,核苷酸和氨基酸序列同源性达95%以上,与美国、印度、巴西等国家ScYLV分离物(GeneBank登录号分别为AF157029、AY236971、AF141385)CP基因同源性达100%,证实我国福建地区甘蔗黄叶综合症的病原体为ScYLV.本研究同时建立了ScYLV的RT-PCR检测技术.     

甘蔗选50叶片中水溶性糖、全氮含量与抗绵蚜关系研究初报

甘蔗绵蚜( Ceratovacuna lenigera Zehuter )是甘蔗主要害虫之一,在贵州蔗区普遍发生危害,甘蔗选50经贵州省亚热带作物科学研究所多年的引种试验观察,是高抗甘蔗绵蚜的优良品种。甘蔗叶片中水溶性糖、全氮含量以及糖一氮比例与甘蔗抗绵蚜存在一定的相关关系。为了探讨甘蔗选50抗绵蚜机理,我们对甘蔗选50及主要栽培品种的植株叶片中水溶性糖、全氮含量以及糖一氮比例进行测定分析,     

广西北部蔗区甘蔗黄叶病调查

【目的】探明甘蔗黄叶病在广西北部蔗区的发生情况,为甘蔗健康种苗生产提供科学依据。【方法】从广西北部蔗区采集不同品种显症或不显症甘蔗样品,采用引物（P1：5′-AATCAGTGCACACATCCGAG-3′/P2：5′-GGAGCGTCGCCTACCTATT-3′）进行SCYLV一步法RT-PCR检测。【结果】柳州郊区蔗区调查的8个品种中有6个品种带毒,带毒率为75.0%;柳城蔗区调查的7个品种全部带毒,带毒率为100.0%;鹿寨蔗区调查的4个品种中有2个品种带毒,带毒率为50.0%;宜州蔗区调查的6个品种中有4个带毒,带毒率为66.7%。在所调查的品种中,柳城03-182、桂糖21和台糖16在作为调查对象的蔗区均检测出黄叶病毒;主栽品种ROC22也在柳城和宜州蔗区检测出黄叶病毒。【结论】甘蔗黄叶病已在广西北部蔗区发生,且有向外蔓延的趋势。     

广西南部地区甘蔗黄叶病毒病的研究

[目的]明确甘蔗黄叶病毒病SCYLV在广西南部蔗区的发生情况,为广西健康种苗的推广和抗病育种提供科学依据。[方法]在广西南部蔗区对不同甘蔗品种采集显症或不显症甘蔗叶片,采用引物（P1：5＇-aatcagtgcacacatccgag-3＇/P2：5＇-ggagcgtcgcctacctatt-3＇）进行RT-PCR检测。[结果]对经P1、P2扩增获得的PCR产物进行直接测序,所得序列在NCBI中比对确认均为SCYLV CP序列。黄叶病调查结果发现,钦州蔗区感病最严重,品种感病率达80%;扶绥蔗区的5个品种中,检出黄叶病毒的有3个品种,感病率为60%;凭祥蔗区感病的品种占60%;北海蔗区的品种感病率为50%;宁明东安乡蔗区6个品种中1个品种检出SCYLV,感病率为17%;驮卢镇渠立村和崇左江州2个地方11个品种均未检测出SCYLV。[结论]甘蔗黄叶病毒病已在广西南部大部分蔗区发生且蔓延。     

全国甘蔗新品种比较

[目的]为甘蔗新品种的推广提供参考依据。[方法]以Roc22号为对照，对国家甘蔗产业技术体系提供的9个甘蔗品种进行比较，筛选综合性状表现较好的甘蔗品种。[结果]甘蔗品种粤糖55、福农15、桂糖02-901、粤糖00-236萌芽率较高；粤糖55、粤糖00-236分蘖率高。蔗茎产量高于对照的有粤糖55、桂糖97-69、粤糖00．236和福农15几个品种，蔗糖分较高的为桂糖02-901和云蔗99-91。云蔗99-91、云蔗03-422、粤糖55、甘蔗品种粤糖00-236几个品种耐寒性较强。公顷舍糖量较高的为粤糖55、福农15、粤糖00-236和桂糖97．69。[结论]甘蔗品种粤糖00-236和福农15号综合性状表现较好，可繁殖推广。     

广西北部蔗区甘蔗黄叶病调查

【目的】探明甘蔗黄叶病在广西北部蔗区的发生情况,为甘蔗健康种苗生产提供科学依据。【方法】从广西北部蔗区采集不同品种显症或不显症甘蔗样品, 采用引物（P1：5′-AATCAGTGCACACATCCGAG-3′/ P2：5′-GGAGCGTCGC
CTACCTATT-3′）进行SCYLV一步法RT-PCR检测。【结果】柳州郊区蔗区调查的8个品种中有6个品种带毒,带毒率为75.0%;柳城蔗区调查的7个品种全部带毒,带毒率为100.0%;鹿寨蔗区调查的4个品种中有2个品种带毒,带毒率为50.0%;宜州蔗区调查的6个品种中有4个带毒,带毒率为66.7%。在所调查的品种中,柳城03-182、桂糖21和台糖16在作为调查对象的蔗区均检测出黄叶病毒;主栽品种ROC22也在柳城和宜州蔗区检测出黄叶病毒。【结论】甘蔗黄叶病已在广西北部蔗区发生,且有向外蔓延的趋势。     

甘蔗黄叶病毒及其所致病害评述

甘蔗黄叶病毒是2000年国际病毒分类命名委员会第七次报告才确认的黄症病毒科未归属成员。其分布几乎遍及世界所有甘蔗产区,并已于近年传入我国南方蔗区。该病毒引起甘蔗病毒性黄叶病,经高粱蚜及玉米蚜以持久性方式传播,可能起源于黄症病毒科属间基因重组。本文简述该病毒研究概况及其在我国的发生特点。     

采用分生组织培养生产脱甘蔗黄叶病毒苗

【目的】尝试使用茎尖分生组织培养技术生产UP01235和UP00972个甘蔗品种的脱甘蔗黄叶病毒（SCYLV）脱毒组培苗。【方法】以大田染病和健康甘蔗植株的不同大小茎尖分生组织为外植体，经培养获得组培幼苗。采用1对甘蔗黄叶病毒特异性引物（SCYLV-615F：5’-ATGAATACGGGCGCTAACcGYYCAC-3’和SCYLV-615R：5’-GT-GTTGGGGRAGCGTCGCYTACC-3’）进行RT—PCR分析，在6个月内每隔1个月检查1次组培苗是否存在病毒。【结果】当以1．5mm茎尖进行培养时，获得的2个甘蔗品种的组培苗在温室种植，在生长期间未发现存在黄叶病毒，说明黄叶病毒已被消除；而以超过1．5mm的茎尖为外植体时，PCR分析表明结果，所获得的组培苗存在黄叶病毒。【结论】对以1．0～1．5mm茎尖培养获得的200多株组培苗进行温室繁殖，在生长期间均未发现黄叶病毒。     

甘蔗新品种粤糖55号的选育

粤糖55号是广州甘蔗糖业研究所湛江甘蔗研究中心以粤农73-204为母本、CF72-1210为父本进行杂交选育而成的甘蔗新品种.多年试验结果表明,该品种萌芽好,分蘖力强,中至中大茎,原料茎数多,不易风折和倒伏,抗黑穗病、高抗嵌纹病,宿根性好,特早熟,高产稳产.平均每公顷蔗茎产量比ROC10号增产36.7%.甘蔗11-12月平均含甘蔗蔗糖分15.23%,比ROC10高1.02%.比ROC16高0.57%.     

用模糊综合评判方法筛选甘蔗优良杂交组合

为直观地对甘蔗杂交组合进行筛选及评价,选择对甘蔗杂交组合优劣影响最大的四个因素(锤度、株高、茎径、有效茎),以2009年广西甘蔗研究所实生苗的24个亲本杂交组合为研究对象,采用模糊综合评判方法,研究锤度、株高、茎径、有效茎的相互作用对24个甘蔗杂交组合的影响,从中筛选出优的甘蔗杂交组合1个(ROC24×粤糖91-976),较优的甘蔗杂交组合10个(ROC1×ROC22、ROC1×桂糖96-211、桂糖92-66×湛蔗92-126、粤糖91-976×ROC1、桂糖92-66×福农91-4621、桂糖94-119×CP74-383、粤糖89-113×HoCP93-750、ROC10×崖城94-46、崖城99-31×ROC22、桂糖92-66×桂糖00-245),这些组合可用到今后的育种实践。     

甘蔗黄叶病毒P0蛋白分子特性及其抑制RNA沉默活性

【目的】甘蔗黄叶病（yellow leaf,YL）是一种主要的甘蔗病毒病害,在全球多数甘蔗种植国家或地区普遍发生,已对甘蔗生产造成严重威胁。其病原为甘蔗黄叶病毒（Sugarcane yellow leaf virus,SCYLV）,属于黄症病毒科马铃薯卷叶病毒属成员。研究SCYLV编码的沉默抑制子P0蛋白的分子特征、保守结构域及其在自然寄主甘蔗上抑制RNA沉默的功能,为下一步从RNA沉默水平解析SCYLV致病分子机理奠定基础。【方法】利用RT-PCR克隆技术获得SCYLV中国分离物CHN-FJ4编码的RNA沉默抑制子基因P0及其两个缺失突变体P0^Δ2-15（N端缺失15个氨基酸）和P0^Δ155-256（C端缺失102个氨基酸）,然后定向克隆到单子叶植物表达载体pUbi-nos（空载体）上,获得重组质粒。利用甘蔗嫩叶组织瞬时表达系统鉴定病毒RNA沉默抑制子技术,结合ImageJ软件定量分析P0及其两个缺失突变体抑制外源基因EYFP瞬时表达活性的变化。番茄丛矮病毒（Tomato bushy stunt virus,TBSV）编码的P19作为沉默抑制子阳性对照。【结果】P0核苷酸序列的遗传进化分析结果显示,所获得的SCYLV病毒分离物CHN-FJ4为BRA基因型,与其他BRA基因型分离物氨基酸序列一致性为96.1%—98.4%。利用MEME在线软件预测P0蛋白的保守结构域,结果表明P0蛋白含有3个显著的保守区。分别位于第1—60、76—125和161—210氨基酸残基。通过Datamonkey在线服务器（http://www.datamonkey.org）提供的5种运算方法分析P0蛋白氨基酸位点的选择压力,结果显示P0蛋白具有8个氨基酸正向选择位点。将含有P0及其缺失突变体的重组质粒连同含EYFP报告基因的pTEM12质粒采用基因枪轰击法分别导入甘蔗嫩叶组织细胞,轰击后48—120 h,P0和P19逐渐地提高EYFP荧光表达点数和荧光表达水平;在120 h,与pUbi-nos空载体（不含沉默抑制子）对照组相比,P0和P19均显著地提高甘蔗嫩叶组织EYFP荧光表达点数和荧光表达水平,分别达1.6倍和4.0倍以上。P0与P19抑制RNA沉默活性水平没有显著差异（P>0.05）。P0蛋白N端缺失15个氨基酸（P0^Δ2-15）和C端缺失102个氨基酸（P0^Δ155-256）均丧失了沉默抑制子的功能,荧光表达与不含沉默抑制子对照组相当。【结论】在甘蔗嫩叶组织EYFP瞬时表达体系上,P0能够显著地提高外源基因EYFP表达水平。P0蛋白N端15个氨基酸和C端102个氨基酸含有显著的保守区域,是P0发挥沉默抑制子功能所必需的。