培养条件对烟草细胞生长和CoQ10含量的影响

双红花大金元品种的烟草为材料,采用细胞悬浮培养方法,对影响烟草生长和ＣｏＱ１０含量的细胞培养条件、ＰＨ、温度、接种量、扔床转速及装液量等进行了研究。结果表明,烟草细胞在培养基原始ＰＨ４．０～８．０下均能生长,但在ＰＨ６．０时细胞生长最地,ＣｏＱ１０含量最高;接种量仅能影响细胞培养周期,而不影响ＣｏＱ１０的形成,但超过２８℃则不利于烟草细胞的生长,ＣｏＱ１０总量并不增加;摇床转速和装液量对细胞生长和     

从烟草悬浮细胞制备辅酶Q10的初步研究

采用细胞悬浮的方法,从４个烟草品种（系）中筛选出辅酶Ｑ１０含量较高的黄花大金元,以其悬浮培养细胞为材料,比较了几种植物生长调节剂对细胞生长和辅酶Ｑ１０含量的影响。结果表明,０．１￣０．２ｍｇ／Ｌ的ＢＡ和ＫＴ对烟草细胞有显著的促进作用,但使辅酶Ｑ１０含量略有降低;０．５￣８．０ｍｇ／Ｌ的２,４－Ｄ可显著提高辅酶Ｑ１０含量,但当其浓度高时对细胞生长不利;ＩＡＡ和ＮＡＡ对烟草细胞生长和辅酶Ｑ１０含量均无     

NC89烟草悬浮细胞生产辅酶Q10的条件优化

研究了NC89烟草悬浮细胞的最佳培养方案,为进一步提高辅酶Q10的产量提供理论依据.通过单因素试验和正交试验考察了培养基种类、蔗糖浓度、接种量、转速、pH值和装液量对烟草细胞生长及辅酶Q10合成的影响.结果表明:接种量对细胞的生长及辅酶Q10合成的影响作用极显著;蔗糖浓度对二者的影响均不显著,优选蔗糖浓度为20g·L-1;装液量对辅酶Q10合成的作用显著,而对细胞生长作用不显著;优选转速为110r·min<-1>,pH值为6.2.可见,适于NC89烟草细胞生长及辅酶Q<,10>合成的优选培养条件为White基本培养基,附加蔗糖20g·L-1,装液量为20mL(100mL三角瓶),接种量75g·L-1,初始pH值为6.2,摇床转速为110r·min-1.在该条件下细胞产量和辅酶Q10含量分别为16.653g·L-1和14.780mg·L-1.     

魔芋细胞悬浮培养生产葡甘露聚糖的研究

[目的]对影响魔芋细胞悬浮培养及其次生代谢物葡甘露聚糖产生的主要影响因子进行研究。[方法]利用3,5-二硝基水杨酸测定葡甘露聚糖含量。[结果]在魔芋细胞悬浮液体培养葡甘露聚糖的过程中,采用MS培养基为基本培养基,pH值为6.0时有利于葡甘露聚糖的合成,25g/L乳糖可作为最适碳源;2,4-D在1.0mg/L时葡甘聚糖的积累效果明显;细胞分裂素6-BA使葡甘露聚糖积累明显高于KT,且1.5mg/L时葡甘露聚糖积累量较高,培养15d左右葡甘露聚糖含量达到最大。[结论]MS＋2,4-D1.0mg/L＋6-BA1.5mg/L＋乳糖25g/L,pH6.0,为魔芋细胞悬浮培养生产葡甘聚糖的较优培养基。     

葡聚六糖对烟草悬浮培养细胞活性氧的作用

研究了葡聚六糖对烟草悬浮培养细胞活性氧的作用.结果表明:葡聚六糖可以诱导烟草悬浮细胞活性氧的进发,活性氧进发蜂值出现在30 min,同时活性氧相关酶系活性也升高,超氧化物歧化酶(SOD)活性最高峰在处理后60 min,过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)变化趋势与活性氧相似.添加不同抑制剂EGTA、新霉素、氯化锂(LiCl)等测定发现,细胞胞内和胞外Ca2+参与调控葡聚六糖诱导的活性氧进发.     

肉苁蓉细胞悬浮培养动力学研究

肉苁蓉细胞悬浮培养的生长周期约为25 d,细胞内苯乙醇糖甙（PeG）的比生成速率YP/X与肉苁蓉细胞比生长速率μ大致成线性关系,为生长偶联型. 在培养过程中,培养基中的磷酸盐和氨盐被迅速消耗,而硝酸盐的利用稍慢,基于蔗糖、氨盐和硝酸盐的细胞收率系数分别为0.48、160和6.4 g/g,基于蔗糖的PeG收率系数为0.055 g/g. 根据细胞基本元素分析及各收率系数之间的关系,计算得出了肉苁蓉细胞悬浮培养的化学计量方程式,为细胞的生物反应器扩大培养提供理论依据.      

BHK21细胞的悬浮驯化及其悬浮培养参数研究

[目的]探讨各种悬浮培养条件对BHK-21细胞悬浮培养的影响,尤其是细胞生长过程中出现的细胞结团现象对细胞生长状态的影响,从而摸索出稳定的培养条件。[方法]将BHK-21细胞株进行悬浮驯化培养,通过对悬浮培养的培养液、pH、溶解氧、罐压、搅拌等各种细胞相关生长条件进行研究。[结果]细胞的结团严重影响了细胞的生长代谢。最佳培养条件为最佳接种浓度0.2×106个/ml,牛血清的最佳含量为5%,BHK21细胞培养液理想pH为7.0~7.2,采用2孔通气的100 r/min有利于BHK21细胞的生长。[结论]为体外规模化细胞培养平台奠定理论基础。     

沙地云杉胚性细胞悬浮培养研究

通过本次试验,得到了沙地云杉胚性细胞悬浮培养的最佳培养条件,即DCR+0.1mg/L 2,4-D+1mg/L 6-BA+30g/L蔗糖,pH6.0,接种量3.0%(以鲜重计),摇床转速为110r/min,25±1℃,黑暗条件下震荡培养;研究了细胞生长鲜重、干重和pH值、细胞活力以及培养液中NO3-、NH4+、PO43-和总糖的消耗动力学变化.为今后进行沙地云杉的原生质体培养分离、基因导入及细胞融合等研究提供实验基础.     

东北红豆杉（Taxus cuspidata）细胞悬浮培养研究

用东北红豆杉的愈伤组织建立细胞悬浮系。培养研究发现，最适宜细胞生产的培养基仍为Ｂ５，最佳接种量应控制在２ｇ鲜重／瓶左右。在培养基中添加酷蛋白水解物经水解乳蛋白更利于悬浮细胞生物量的增加。培养基的ｐＨ值随细胞的培养周期而有相应的变化。     

枸杞胚细胞悬浮培养系统建立的研究

以宁夏农科院选育的新品种宁杞 1号 3年生树为试材 ,对影响枸杞胚细胞悬浮培养及其再生系统建立的培养基与激素配比进行了研究。结果表明 ,以人工授粉后 18d的幼果 ,剖取成熟胚作为外植体 ,选择 MS+6 BA1.0 mg/ L+IBA0 .5 m g/ L 培养基诱导愈伤组织 ,经单细胞悬浮培养建立了稳定的细胞系 ;MS+6 BA0 .2mg/ L 培养基较为适宜枸杞胚状体萌发成苗 ,该再生苗转移到 MS+NAA0 .2 mg/ L 生根培养基上 ,诱导生根并获得完整植株 ;共移栽成活 14株 ,成活率达 38.8%。     

烟草细胞培养生产辅酶Q10的动力学研究

烟草细胞培养是获得辅酶Q10的一条有效途径。在黄花烟草细胞株培养过程中,对生物量、总糖、辅酶Q10的含量进行监测,建立起在烟草细胞悬浮培养过程中细胞生长、蔗糖消耗、辅酶Q10生成的动力学方程模型,各方程曲线与实验点拟合较好,相关系数均达到99%以上。     

L-肉碱与辅酶Q10添加对腹水症肉鸡心肌细胞凋亡及抗氧化能力的影响

为探讨L-肉碱与辅酶Q10单独或共同添加时对腹水症肉鸡心肌细胞凋亡的影响,在饲料中添加100 mg/kg L-肉碱和40 mg/kg辅酶Q10,采用常规温度缓慢降温和低温处理。结果表明:日粮中单独添加辅酶Q10可以显著降低低温组肉鸡36日龄时的红细胞压积(PCV)(0.41 vs.0.31)(P<0.05),单独添加L-肉碱可以显著降低低温组肉鸡42日龄时的腹水心脏指数(AHI)(0.31 vs.0.21)(P<0.05);单独添加L-肉碱或辅酶Q10以及二者同时添加都可以显著降低腹水症的死亡率(P<0.05)。正常肉鸡心肌细胞采用H2O2诱导凋亡时,发现有细胞色素C大量释放到胞浆中,而不采用H2O2诱导凋亡组则没有观察到该现象;腹水症肉鸡心肌细胞不论采用H2O2诱导凋亡与否都发现有细胞色素C释放到胞浆中的现象。但各组Caspase-3活性并没有显著变化,L-肉碱与辅酶Q10同时添加时可显著提高腹水症肉鸡心肌线粒体谷胱甘肽(GSH)含量和血清中抗活性氧能力(A-RC)(P<0.05)。因此肉鸡发生腹水症与心肌细胞凋亡之间存在必然联系,但日粮单独或共同添加L-肉碱与辅酶Q10均能够显著降低肉鸡腹水症的死亡率。     

天冬氨酸族氨基酸对沼泽红假单胞菌J001辅酶Q10合成的影响

[目的]探讨天冬氨酸族氨基酸对沼泽红假单胞菌J001辅酶Q10合成的影响.[方法]通过在对数生长末期添加天冬氨酸族氨基酸来考察了其对沼泽红假单胞菌辅酶Q10合成的影响,以期为微生物发酵法获得大批量天然辅酶Q10的培养基优化和菌种的遗传改造提供依据.[结果]蛋氨酸的添加量与辅酶Q10合成呈正相关,蛋氨酸添加量达125 mg/L时,辅酶Q10产量达最大值23.8 mg/L,比对照提高20.2%;添加低浓度的赖氨酸、苏氨酸、异亮氨酸对辅酶Q10的合成没有影响,但高浓度(赖氨酸浓度达500 mg/L以上、苏氨酸400 mg/L以上、异亮氨酸400 mg/L以上)时,辅酶Q10的合成受到抑制,说明该菌株天冬氨酸激酶受到赖氨酸、苏氨酸以及异亮氨酸的反馈抑制或阻遏而不利于蛋氨酸的合成,进而减少辅酶Q10的产量.[结论]可通过菌种遗传改造获得抗赖氨酸、苏氨酸以及异亮氨酸结构类似物的反馈调节型和赖氨酸、苏氨酸以及异亮氨酸营养缺陷型突变体来提高辅酶Q10的产量.     

富含辅酶Q10红曲固态发酵工艺的优化

【目的】以籼米为原料,优化富含辅酶Q10红曲的固态发酵工艺。【方法】采用Box-Benhnken试验设计和响应面分析法,以影响红曲色价和辅酶Q10含量的4个关键固态发酵条件(初始pH、接种量、籼米初始含水率、亚油酸添加量)为自变量,以红曲色价和辅酶Q10含量为响应值对上述4个关键发酵条件参数进行优化,并在此基础上探讨红曲分段控温发酵策略。【结果】初始pH、接种量、亚油酸添加量对红曲色价和辅酶Q10影响显著(P0.05),而籼米初始含水率对红曲色价和辅酶Q10影响不显著(P0.05),优化确定的红曲最佳发酵条件为:初始pH6.0,红曲霉接种量12%,籼米初始含水率50%,亚油酸添加量64mg/kg。辅酶Q10红曲固态发酵的温度控制策略为:30℃6d→34℃5d→28℃4d。【结论】在最佳发酵工艺条件下,所制红曲的色价、辅酶Q10含量分别为4 521.69U/g和387.23mg/kg,较优化前分别提高38.10%和80.01%。     

外源硅和辅酶Q10对盐胁迫下黄瓜根系线粒体的保护作用

【目的】探明外源Si和辅酶Ｑ10(CoQ10)对NaCl胁迫下黄瓜(Cucumis sativus L.)幼苗根系离体线粒体膜生物物理特性和呼吸功能的保护作用。【方法】试验设置3个处理：CK; 加50 mmol·L-1 NaCl; 加1.0 mmol·L-1 K2SiO3 + 50 mmol·L-1 NaCl。处理10 d后取各处理植株根系提取线粒体，在离体线粒体中加入10 mmol·L-1 CoQ10。【结果】Si能显著降低盐胁迫下黄瓜线粒体的H2O2含量，抑制线粒体的脂质过氧化，增加线粒体膜的流动性和膜电位(ΔΦM)，降低膜的肿胀度，使线粒体呼吸控制比(RCR)和氧化磷酸化效率(P/O)显著升高，提高线粒体的呼吸速率。CoQ10也有降低线粒体膜膨胀度，增加线粒体膜流动性和膜电位的作用，同时可以降低线粒体的H2O2和MDA含量，缓解盐胁迫的伤害作用。【结论】外源Si和CoQ10能有效缓解盐胁迫对黄瓜根系线粒体膜的损伤，增强线粒体抗膜脂质过氧化能力和膜完整性，提高线粒体的呼吸作用。     

用黄色隐球酵母发酵生产辅酶Q10最佳条件的选择

从黄色隐球酵母Cryptococcus luteolus L3302中提取辅酶Q10,经过对氮源、碳源、初始pH、发酵温度等的研究分析,得到最佳的发酵条件。通过最优化试验,确定培养基的碳源为蔗糖和葡萄糖各1．25g／L;氮源为酵母膏和玉米浆,各0．3g／L;pH值6．5,温度28℃,接种量5％,500mL锥形瓶中的装液量为50mL;生长因子以蛋白水解液为优。按此发酵条件上罐发酵,发酵液中菌体生长量为13．4g/L,辅酶Q10的产量为18．2mg／L。     

放射农杆菌产辅酶Q10培养基的优化研究

以放射农杆菌为出发菌株,采用6因素二次通用旋转组合设计法对影响放射农杆菌发酵产辅酶Q10的相关因素进行了研究。结果选取到6种有显著效应的因素：葡萄糖、蔗糖、蛋白胨、酵母膏、异戊醇和L-甲硫氨酸。运用高压液相色谱法对辅酶Q10的含量进行测定,经DPS模拟寻优,建立二次回归方程,优化了培养基的组成。结果表明,当葡萄糖2g/L、蔗糖1g/L、蛋白胨1．25g/L、酵母膏0．75g/L、异戊醇0．075g/L、L．甲硫氨酸0．0375g/L或葡萄糖1．5g/L、蔗糖1．5g/L、蛋白胨1．5g/L、酵母膏1g／L、异戊醇0．05g/L、L．甲硫氨酸0．025g/L时,辅酶Q10的产量最大。     

几种有机物对烟草细胞辅酶Q10形成的影响

采用细胞悬浮培养的方法,以烟草红花大金元细胞为材料,研究了几种有机营养物质辅酶Ｑ１０（Ｃｏ１０）合成前体物质及Ｃｏ＾６０－γ射线对烟草悬浮培养细胞生长和辅酶Ｑ１０形成的影响。实验证明,肌醇,酵母膏,盐酸硫胺素对烟草悬浮培养生长和ＣｏＱ１０含量都有一定的影响。     

Herbicide-resistant mutants from tobacco cell cultures

Several mutants resistant to the herbicides chlorsulfuron and sulfometuron methyl were isolated form cultured cells of Nicotiana tabacum. Resistance was inherited as a single dominant or semidominant mutation in all cases. Linkage analysis of six mutants identified two unlinked genetic loci. Studies of plants homozygous for one mutation showed the mutant plants to be completely resistant to treatment with a concentration of chlorsulfuron 100 times higher than that which produces symptoms of phytotoxicity on normal plants.