酶联免疫法检测中华鳖肌肉中己烯雌酚

根据酶标免疫法原理，用含有针对兔IgG（已烯雌酚抗体）的羊抗体与待测中华鳖肌肉中的已烯雌酚发生特异性的结合反应。洗涤后，加入的酶标底物连接未结合的已烯雌酚抗体，在酶基质的作用下与无色发色剂生成有色产物。反应后于450nm处理量吸光度，吸光强度与样品中的已烯雌酚浓度成反比。该检测方法平均最低检测下限为0.0125μg/kg，平均回收率74.8%，变异系数为1.763-3.084%。表明本方法快速、灵敏、可靠，适合对已烯雌酚残留限量检测的要求。     

己烯雌酚特异性抗体的制备

 【目的】制备抗己烯雌酚（DES）的高亲和力特异性抗体，建立检测DES的间接竞争ELISA标准曲线，为进一步研究DES快速检测试剂盒打下基础。【方法】应用DES人工免疫抗原免疫新西兰大白兔，采集抗DES的特异性抗血清，用KCjunior软件进行4参数非线性回归，建立检测DES的间接竞争ELISA标准曲线，各药物浓度在同一批次酶标板中做4次重复，共做4个批次对标准曲线进行评价，用己烷雌酚（HEX）、双烯雌酚（DIEN）、雌二醇（E2）、乙炔雌二醇（EE2）和L-酪氨酸（Tyr）来评价抗体的特异性。【结果】5只家兔免疫产生了抗DES的特异性抗血清，其中4号家兔抗血清效价达到了1﹕4 096 000竞争抑制效果最好，工作稀释浓度为1﹕1 024 000时，线性范围在0.01～50 μg•L-1，标准曲线的IC50在0.71～1.0 μg•L-1，R2在0.9952～0.9978。获得各标准浓度下B/B0的批内变异系数在0.52%～22.48%，批间变异系数在2.64%～19.51%。交叉反应试验表明，4号家兔抗血清对与DES结构相似的人工合成二苯乙烯类雌激素药物己烷雌酚（HEX）和双烯雌酚（DIEN）的交叉反应率分别为8.5%和38.5%，与天然雌激素类药物雌二醇（E2）和乙炔雌二醇（EE2）以及L-酪氨酸（Tyr）的交叉反应均小于0.001%。【结论】本文报道的抗体特异性好、亲和力高，可满足目前中国动物性食品安全评价检测的需要，为研究组织中DES残留检测的ELISA方法及其开发DES快速检测试剂盒奠定了基础。     

己烷雌酚抗原合成和多克隆抗体制备

为了对己烷雌酚进行检测,采用混合酸酐法,合成具有己烷雌酚基本分子结构特性的半抗原。以己烷雌酚-牛血清白蛋白为抗原免疫家兔,获得了特异性的己烷雌酚多克隆抗体。结果表明:己烷雌酚半抗原与牛血清白蛋白偶联的摩尔比为12.93∶1。今后可将所得抗体用于间接竞争性酶联免疫吸附分析法用于己烷雌酚的检测。     

磁性化学发光酶免疫法检测猪肉中的磺胺类药物

以磁性微球为固定相,建立了检测猪肉中的磺胺类药物含量的化学发光酶免疫法。此方法为在微孔中加入羊抗兔磁性微球、样品、抗体和酶标抗原反应30min后,清洗磁珠,加入发光液10min后分析测定。通过酶标抗原量、抗体量和反应模式的优化,成功建立了一种高灵敏度的检测猪肉中磺胺类药物的磁性化学发光方法。该方法的检出限为0.26μg/kg,回收率81.21%~97.82%之间,相对标准偏差小于9.48%。     

除草剂丁草胺直接竞争ELISA检测方法研究

制备出3种不同结合比的酶标抗体,对检测条件进行了优化,建立了标记抗体固相抗原直接竞争ELISA(cdELISA)检测丁草胺的方法。结果表明,酶标抗体克分子比为1.55时偶合物活性最高,包被浓度1μg·mL-1,酶标抗体800倍稀释,稀释液采用2×PBS,不含BSA、甲醇,建立的标准曲线IC50=1.7ng·mL-1,检测限为0.006ng·mL-1,检测范围0.06～2616.7ng·mL-1,批内变系数9.25%,批间变异系数23.55%。蒸馏水以及稀释10倍后的矿泉水、池塘水、稻田水添加1ng·mL-1和10ng·mL-1的丁草胺,用所建立的方法检测,平均回收率分别为93.27%、158.50%、119.75%、124.51%。本研究为进一步开发丁草胺免疫分析试剂盒奠定了基础。     

新孢子虫病P43蛋白质(包涵体)的纯化及rELISA方法的建立

为建立新孢子虫病间接酶联免疫吸附试验(rELISA)检测方法,先诱导表达GST-P43包涵体蛋白,并对其进行提取、纯化、复性处理,再以复性后的P43蛋白作为抗原,优化rELISA检测方法。结果表明,这种包涵体处理方法,可使其纯度达到87%,复性后的目的蛋白具有良好的免疫活性。通过对rELISA各反应条件的优化,确定了最佳反应条件,血清稀释倍数为1∶100,抗原包被浓度为7μg/mL,封闭液为0.5%脱脂乳,酶标抗体的工作浓度为1∶4000,酶标抗体作用时间为1 h,底物作用时间25 min。且该方法不与弓形虫和布鲁氏菌病发生交叉反应。     

羊抗鸡酶标二抗用于鹅血清抗体检测的研究

通过比较鸡IgG与鹅IgG的相似性,探讨羊抗鸡酶标二抗用于检测鹅血清抗体的可行性。用辛酸-硫酸铵盐析法提纯鸡、鸭、鹅、小鼠、兔、猪、羊的IgG,比较上述动物IgG粗提物的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱,并用蛋白免疫转印法定性检测上述动物血清IgG与羊抗鸡酶标二抗的结合情况;然后用直接ELISA方法分析不同动物血清分别与抗鸡酶标抗体和抗鹅酶标抗体结合程度的差异;最后用间接ELISA方法比较两种酶标抗体对同一鹅群大肠杆菌抗体的检测结果。结果表明,鸡、鸭、鹅IgG具有较大的相似性,都能够与抗鸡酶标二抗结合;羊抗鸡酶标二抗可以替代抗鹅酶标二抗来检测鹅的血清抗体。     

检测猪肺炎支原体抗体间接ELISA方法的建立

选用猪肺炎支原体Mhp J株培养物制备抗原,建立检测猪肺炎支原体抗体的间接ELISA(酶联免疫吸附)方法.结果显示,ELISA试验的最佳反应条件为:抗原包被浓度为1.5 μg/ml,待检血清的最佳稀释浓度1∶100,2%明胶作封闭液,抗原抗体最佳结合时间为90 min,酶标抗体1∶10 000(体积比)稀释,最佳作用时间为60 min.对136份样品检测结果表明,建立的猪肺炎支原体间接ELISA抗体检测方法与美国IDEXX公司生产的猪肺炎支原体抗体检测试剂盒检测的符合率达到83.8%,假阴性率8.8%,假阳性率1.5%.     

基于番鸭细小病毒VP3蛋白的间接ELISA方法建立

本试验采用经原核表达并纯化的番鸭细小病毒VP3蛋白作为包被抗原，辛酸-硫酸铵沉淀法提取纯化制备的兔抗番鸭IgG酶标抗体作为二抗，经一系列试验，确定了间接ELISA检测番鸭细小病毒抗体的最佳抗原浓度为5 μg·mL^-1，血清的最佳稀释度为1∶100，血清样品稀释液为含10% FBS和10%脱脂奶粉的PBST，兔抗番鸭酶标抗体最适稀释度为1∶2 500。将建立的方法进行了特异性、敏感性、重复性与中和试验的符合性等试验。试验结果表明，阳性血清样品作1 600倍稀释还能检测到抗体；与其他常见鸭传染病的阳性血清无交叉反应；批内、批间重复性试验的变异系数小于8.7%；100份番鸭血清样品用ELISA方法与中和试验的总符合率达90%以上。说明本试验建立的检测方法敏感性高、特异性强、重复性与稳定性好，可用于番鸭细小病毒流行病学调查及鸭群免疫番鸭细小病毒疫苗后抗体监测。     

检测传染性支气管炎抗体NP-ELISA方法的建立

【研究目的】建立可在临床上检测鸡传染性支气管炎抗体的检测IBV抗体的间接ELISA方法;【方法】以表达的重组IBVNP蛋白为包被抗原,将之包被于聚苯乙烯酶标板上,以封闭液进行封闭,然后加待检血清在37℃作用1h,洗涤后加酶标兔抗鸡IgG抗体,在37℃作用1h,加底物显色,终止反应后测定OD值;【结果】抗原包被浓度为1.45μg/ml,待检血清最佳稀释度为1:40,酶标二抗最佳工作浓度为1:1000,确定阳性判定标准为OD450≥0.314。NP-ELISA与AIVH9、H5、H7、IBD、ND、EDS76的标准阳性血清不发生交叉反应,具有良好的特异性;【结论】NP-ELISA具有特异性强、灵敏度高、重复性好、方便快速的特点,可用于临床IB抗体的检测。     

Structure of the hydrated alpha-Al(2)O(3) (0001) surface

The physical and chemical properties of the hydrated alpha-Al(2)O(3) (0001) surface are important for understanding the reactivity of natural and synthetic aluminum-containing oxides. The structure of this surface was determined in the presence of water vapor at 300 kelvin by crystal truncation rod diffraction at a third-generation synchrotron x-ray source. The fully hydrated surface is oxygen terminated, with a 53% contracted double Al layer directly below. The structure is an intermediate between alpha-Al(2)O(3) and gamma-Al(OH)(3), a fully hydroxylated form of alumina. A semiordered oxygen layer about 2.3 angstroms above the terminal oxygen layer is interpreted as adsorbed water. The clean alpha-Al(2)O(3) (0001) surface, in contrast, is Al terminated and significantly relaxed relative to the bulk structure. These differences explain the different reactivities of the clean and hydroxylated surfaces.     

杨树蛀干性害虫杨大透翅蛾的发生与防治

本文对我国北方杨树蛀干性害虫杨大透翅蛾(Aegerla apiformls clerck)进行了研究。除对形态特征,生活史,生活习性记述外,着重该虫的发生量与营林措施及不同杨树品种的关系,以及一系列的防治试验。在此基础上提出成虫期采用活雌虫性诱;卵期树干涂白;幼虫期使用熏蒸毒签等经济有效的防治手段。同时营造乔灌混交林,选用抗虫性较强的毛白杨等13个品种,可有效地控制该虫的发生量。     

甜菜夜蛾天敌的研究进展

对甜菜夜蛾(Spodoptera exigua Hubner)的天敌种类,包括捕食性天敌、寄生蜂、寄生蝇、病原线虫、微孢子虫、病原真菌、细菌和病毒等及其应用进行了综述,并就当前应用中存在的问题及解决方法进行了探讨.     

电荷补偿剂对Ca_(0.97)Mn_(0.03)Al_(12)O_(19)荧光粉的结构及发光性能的影响

采用高温固相法制备了一种新型的Mn4+的掺杂量为质量分数3%的红色碱土金属铝酸盐荧光粉Ca0.97Mn0.03Al12O19,并就电荷补偿剂Cl-和F-对荧光粉的结构和发光性能的影响进行了研究.结果表明:在Ca0.97Mn0.03Al12O19荧光粉中,F-和Cl-的掺杂均没有改变Ca Al12O19的晶相,但掺入Cl-离子能提高荧光强度,而F-离子却能减弱荧光强度.     

Signature of superfluid density in the single-particle excitation spectrum of Bi(2)Sr(2)CaCu(2)O(8+delta)

We report that the doping and temperature dependence of photoemission spectra near the Brillouin zone boundary of Bi(2)Sr(2)CaCu(2)O(8+delta)exhibit unexpected sensitivity to the superfluid density. In the superconducting state, the photoemission peak intensity as a function of doping scales with the superfluid density and the condensation energy. As a function of temperature, the peak intensity shows an abrupt behavior near the superconducting phase transition temperature where phase coherence sets in, rather than near the temperature where the gap opens. This anomalous manifestation of collective effects in single-particle spectroscopy raises important questions concerning the mechanism of high-temperature superconductivity.     

傅氏鳞石蛾和弓突鳞石蛾幼虫记述(毛翅目:鳞石蛾科)

首次记述了中国毛翅目特有种傅氏鳞石蛾(Lepidostoma fui (Huang))和弓突鳞石蛾(L.arcuatum (Huang))幼虫的形态特征。傅氏鳞石蛾幼虫与黄褐鳞石蛾(L.flavum Ulmer)极为相似，但前体稍大，头壳色浅，前胸背板4根外侧刚毛的第2与第3根的间距等于或大于第2与第1根间距的2倍(后第2与第3根的间距小于第2与第1根间距的2倍)。弓突鳞石蛾的主要鉴别特征为头壳黑褐色，沿头顶经颅侧区至上颚基部具白色宽环带。对两种幼虫的筑巢、化蛹等生物学特性作了初步探讨，发现两种幼虫均利用枯叶筑四方形管状巢，老熟幼虫巢的四面均由5小片叶组成，傅氏鳞石蛾巢长9．6～10．1mm，巢最宽处2．0～2．2mm；弓突鳞石蛾巢长13．0～14．4mm，巢最宽处2．7mm。     

绝缘性陶瓷材料Si_3N_4电火花加工稳定性实验研究

用TiN蒸镀膜作辅助电极.在不同脉宽系数下对绝缘性陶瓷材料Si3N4的电火花加工稳定性进行 了实验研究,得出了脉宽系数越小,加工越稳定的结论。     

过渡金属离子Mn(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)对草酸还原Cr(Ⅵ)的催化作用

25 ℃和pH 30～50条件下,研究了Mn(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)对草酸还原Cr(Ⅵ)的催化作用.结果表明:避光条件下,Mn(Ⅱ)对草酸还原Cr(Ⅵ)有显著的催化作用,光照下其催化作用进一步得到提高.然而,避光条件下Fe(Ⅲ)对草酸还原Cr(VI)的影响甚微,但在光照条件下,Fe(Ⅲ)表现出极优越的催化作用.溶液pH值和照射光波长对反应有显著影响,Mn(Ⅱ)和Fe(Ⅲ)的催化作用随pH值提高而减弱;紫外光照射下两金属离子的催化作用大于模拟日光照射的.因此,本研究结果对由Cr(Ⅵ)引起的土壤和水的污染治理具有理论和实践指导意义.     

19个自育葡萄品种(系)指纹图谱构建

【目的】 利用SSR标记技术开展19个葡萄品种(系)的指纹图谱构建,为种苗认证、品种登记和植物新品种保护提供依据。【方法】 以19个葡萄品种(系)为试材,利用16对SSR标记荧光引物,对其进行PCR扩增和毛细管电泳,获得指纹条带,构建指纹图谱,并筛选可以将19个品种(系)区分的引物组合,绘制种质分子身份证数字码。【结果】 从16对SSR标记引物选择了VRZAG67、VVS2、VVMD7、VCHR4a、VVMD5等5对多态性信息量相对较高的SSR标记,完成了品种(系)的指纹图谱构建,并对其进行了赋值编码,形成了身份识别码。【结论】 构建的指纹图谱和分子身份证可以鉴定和区别19个品种(系),但由于葡萄种质较多,如果继续区别更多的品种,需要增加的 SSR 引物数量。