发酵蔗渣产黄腐酸菌种的筛选及应用

为提高蔗渣发酵产黄腐酸的能力,从生物腐植酸样品中分离培养菌种,对分离获得的菌种进行较高温下降解纤维素能力的测定,初步筛选出生长良好和降解纤维素能力较强的菌株,鉴别其形态、并接种于蔗渣物料发酵试验进一步筛选,最后将优化筛选的菌株进行16sDNA鉴定,同时应用于工厂生产性装袋的中试发酵。结果表明腐植酸分离样品中芽孢杆菌占绝对优势,其中芽孢杆菌E菌株具有较高的转化蔗渣产黄腐酸的能力。该菌株经16sDNA鉴定为枯草芽孢杆菌。采用枯草芽孢菌株进行发酵蔗渣中试,获得黄腐酸含量为17.2%,较工厂对照组黄腐酸含量(14.3%)提高了20%。     

饲用复合微生态制剂的研究

本文报道了饲用复合微生态制剂中主要微生物菌种的分离、筛选与鉴定研究结果,从不同生态区土壤样品分离和筛选获得一株吸氧力强的需氧芽孢杆菌菌株ＳＢ－１５,经细菌学分类鉴定,该菌株属蜡状芽孢杆菌。ＤＮＡ中（Ｇ＋Ｃ）ｍｏｌ％为３４．４％,表现ＳＯＤ酶活性。     

动物微生态制剂猪肠源芽孢杆菌的分离与鉴定

本次试验的菌种是从宁夏平罗县边远农村基本自然生长的健康肉猪的小肠、大肠和盲肠中分离获得的,共分离出28株菌株.通过对这28株菌株的菌落形态观察、革兰氏染色和芽孢染色镜检,筛选出12株芽孢杆菌(Bacillus)菌株进行了生理化学鉴定,其中有11株分属于芽孢杆菌的3个种.确定8株为蜡状芽孢杆菌(B.cereus),1株为枯草芽孢杆菌(B.subtilis),2株为短芽孢杆菌(B.brevis).这11株菌株的各项鉴定结果均符合芽孢杆菌属和相应种的菌落形态、革兰氏染色和芽孢染色特征以及生理生化鉴定标准.     

牛粪沼液对枯草芽孢杆菌产孢影响

枯草芽孢杆菌是生产微生物菌肥的有效微生物菌种之一,芽孢含量直接影响菌肥效果。为降低生产成本,提高发酵液中芽孢数量,探究牛粪沼液对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)D1产孢影响。采用分批培养法确定发酵培养基中沼液最适浓度及碳源与氮源种类和含量。利用比浊法和稀释平板涂布法检测枯草芽孢杆菌的菌体数量及芽孢产率,采用火焰原子吸收光谱法检测沼液中金属离子含量。结果表明,牛粪沼液中含有对产孢有显著影响的Ca~(2+)、Mn~(2+)、Mg~(2+)三种离子;当沼液与水配比为11时,产孢效果最佳;麸皮和大豆粉分别是菌株生孢最佳碳源、氮源;最适碳源和氮源含量分别为2.0%和0.5%(质量比),35℃,120 r·min~(-1)恒温培养24 h后,产芽孢率可达83.77%。     

榨菜腐败微生物的分离、鉴定及生物学特性研究

    通过对发生"胖袋"现象的袋装榨菜微生物进行分离,得到7株细菌菌株、4株酵母菌菌株.根据反正试验和细菌学鉴定试验,确定了引起榨菜腐败变质的2株细菌菌株:坚强芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌.利用比浊法原理,以细菌在液体培养基中吸光度值的变化作为细菌生长指标,研究坚强芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌的生长曲线、耐温性、耐盐性及耐硝酸盐性.结果表明:坚强芽孢杆菌与蜡状芽孢杆菌的生长速度不同,前者较后者幔,但两者对数生长期持续时间差不多;低温(<10℃)、高盐(>12%)能有效地抑制坚强芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌的生长;亚硝酸盐(0%～0.15%)对坚强芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌的生长没有影响.     

黑钙土细菌种群组成特征

报道了采自吉林省农安县新刘家镇刘家村三社黑钙土中的细菌种群组成：（枯草芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌、类产碱假单胞、荧光假单胞菌变种Ⅰ、施氏假单胞菌、放射形土壤杆菌变种Ⅰ、放射形土壤杆菌变种Ⅱ、约氏不动杆菌、乙酸钙不动杆菌、喜盐微球菌、产黄纤维单胞菌、粪肥纤维单胞菌、柠檬色节杆菌、球形节杆菌、黄黄色杆菌等）及其鉴别特征，并根据其在土壤中的数量组成和分离出现率确定了柠檬色节杆菌、球形节杆菌、放射形土壤杆菌变种Ⅰ、类产碱假单胞、荧光假单胞菌变种Ⅰ、枯草芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌、粪肥纤维单胞菌为黑钙土的优势细菌种群。     

芽孢杆菌的DNA碱基组分分析

用高效液相色谱法 (HPLC)测定了用传统分类学方法归于巨大芽孢杆菌、球形芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌的一些菌株的DNA碱基组成 .检测菌株与标准菌株G Cmol%误差在种内各菌株间的G Cmol%误差 (4 %～ 5 %左右 )范围内 .而用HPLC测定标准菌株G Cmol%与文献上解链温度法 (Tm)测得的数值相差不大     

富贵子内生真菌的分离及抗菌活性物质产生菌的鉴定

从药用植物富贵子植株中分离出内生真菌,以大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、铜绿假单胞杆菌(Pseudomonas aeruginosa)为指示菌,采用内生真菌发酵液法进行抗菌活性筛选,并通过ITS-rRNA测序的方法进行菌株鉴定。结果表明:从富贵子中分离纯化得到的43株内生真菌中,有63%的菌株表现出不同程度的抑菌活性,其中有3株菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、铜绿假单胞杆菌均有抗性,分别命名为FGZ5、FGZ8、FGZ13,经形态学及分子生物学鉴定,FGZ5属镰刀菌属,与NCBI数据库中尖孢镰刀菌相似性为100%,FGZ8、FGZ13属毛壳菌属,FGZ 8与NCBI数据库中金黄毛壳菌相似性为99%,FGZ13与NCBI数据库中角毛壳菌相似性为100%。其中,毛壳菌已有报道对多种植物病害有生防作用,可作为农业生防菌株进一步开发和利用。     

草本纤维提取用菌株的PCR-16S rDNA及ITS-RFLP分析

通过分析从沤麻水中分离到的8株草本纤维提取用菌株的16S rDNA以及ITS序列,鉴定并构建其聚类图,明确草本纤维提取用菌株的遗传关系.通过BLAST比对16S rDNA并用限制性内切酶酶切16～23S的ITS保守序列,对参试菌株的16S rDNA及ITS酶切片段进行聚类分析.结果表明,8株菌株分别属于地表芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌以及多粘类芽孢杆菌:基于16S rDNA序列与ITS-RFLP所获得的聚类结果基本一致,菌株1251与菌株1172-1聚为一类,其余聚为一类,但种内聚类存在一定的差异,可能与不同类型的序列进化程度有关,8株菌株的16SrDNA序列的相似性为78.66%;Alu Ⅰ、Hinf Ⅰ、Sau3A Ⅰ、Taq Ⅰ 4种限制性内切酶对参试的8株草本纤维提取用产芽孢菌株的ITS进行酶切,各获得0～4条100～440bp的酶切产物.     

低温环境下南海深海沉积物中可培养细菌的多样性及其抑菌活性分析

模拟低温(10℃)环境分离纯化培养南海深海沉积物中的细菌,基于16S rRNA基因序列对南海深海沉积物可培养细菌多样性进行分析,并利用滤纸片扩散法测试可培养细菌发酵液的抑菌生物活性。结果表明,从南海深海沉积物中共分离获得相关可培养细菌32株,分属于3个菌门(变形菌门、厚壁菌门和拟杆菌门)的19个种,其中以芽孢杆菌为优势菌群。分离获得的南海深海沉积物可培养菌株中有17株的代谢物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和蜡状芽孢杆菌4种指示菌均表现出抑制作用,占分离菌株种类的89.5%。说明低温环境下对深海沉积物可培养细菌多样性和活性均存在一定影响。     

新疆土壤芽胞杆菌采集鉴定及其分布多样性

为了解新疆芽胞杆菌的种类及其多样性情况,将采集于新疆4个地点的14份土样用稀释平板计数法进行芽胞杆菌分离,用MIDI鉴定系统和16SrDNA测序法进行种类鉴定。结果发现,从新疆土样中共分离到53株,13种芽胞杆菌,分别为巨大芽胞杆菌、蜡状芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌、嗜碱芽胞杆菌、粘性芽胞杆菌、地衣芽胞杆菌和萎缩芽胞杆菌。通过16SrDNA序列的系统发育树分析发现,分离的菌多数和模式菌株亲缘关系较近,也有少数几株菌与模式菌株亲缘关系较远,可能是由于芽胞杆菌属中各个种之间具有较近的亲缘关系,在种的系统发育上也存在一定的交叉,各菌株间序列差异较小。根据土壤中芽胞杆菌多样性研究发现,不同土壤标本内的芽胞杆菌含量差异显著表现为阿拉尔市>新疆喀什>阿克苏>塔克拉玛干沙漠。而每个地点中同种芽胞杆菌的含量差异也较显著,如:蜡样芽胞杆菌在阿克苏的含量为5.230×105 cfu.g-1,而在塔克拉玛干沙漠的含量仅仅为0.7×103cfu.g-1。新疆芽胞杆菌较丰富,不同地点芽胞杆菌在种类和数量上都有很大差异,每个地点都含有独特的芽胞杆菌。     

海湾泥、碱渣和粉煤灰作为园林种植基质的微生物学特性研究

以滨海盐土、扰动人为新成土（客土）为对照，就利用海湾泥、碱渣和粉煤灰作为城市园林绿化种植基质的土壤微生物特性进行了研究。结果表明，不同土壤条件下0～40cm土壤微生物数量差异极显著表现为防护林〉客土绿地〉滨海盐土，0～20cm土层微生物数量是20～40cm的3～4倍。在细菌、放线菌和真菌三大类群中，细菌占绝对优势，其次是放线菌和真菌。滨海盐土微生物的季节变化不大，防护林试验地和客土绿地微生物总数最多时均出现在秋季。芽孢杆菌的11个种在不同土壤条件下的生态分布明显不同，最常见的是蜡质芽孢杆菌、拟霉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和蜂房芽孢杆菌。放线菌主要是链霉属放线菌，包括链霉菌属的10大类群，分布最广的类群是灰褐类群、金色类群和青色类群。真菌分布有11个属，在不同土样中其组成的差异和生态分布也有着明显的差异。     

天津地区土壤中苏云金芽孢杆菌调查

在从天津市采集的227个土样中共分离出128株Bt菌株,出菌率为56.37%。在所分离的土样中,采自北部林区土壤的出菌率最高,高于其它土壤的出菌率,达到86.2%;东部地区的出菌率最低。室内生物测定试验结果表明,林区土壤分离菌株的毒力特性也是最好的。试验还表明,土壤和环境对苏云金杆菌的杀虫特性有明显的影响。     

具有稻瘟病菌拮抗活性的枯草芽孢杆菌的分离与鉴定

采用梯度稀释分离法,从黄河稻区水稻根际土壤中分离出耐高温芽孢菌722株。通过真菌生长抑制试验,获得具有稻瘟病菌拮抗活性的菌株27株。通过形态学观察和生理生化指标鉴定,获得具有稻瘟病菌拮抗活性的枯草芽孢杆菌疑似菌株7株。挑取其中抑菌活性最强的1株进行16SrDNA鉴定,将其16SrDNA基因序列与GenBank中基因序列进行同源性比较,发现与枯草芽孢杆菌16SrDNA有99%同源性,判定此菌为枯草芽孢杆菌,命名为BS501a。     

水稻主要病害拮抗细菌的筛选与鉴定

从稻种、稻叶、稻田土壤、稻田菌核和菜地土壤共 1 0 5份样品中共分离细菌菌株 2 6 72株 ,经拮抗性能测定 ,对水稻纹枯病菌 (Rhizoctoniasolani)、水稻恶苗病菌 (Fusari ummoniliforme)、水稻稻瘟病菌 (Maganporthegrisea)、水稻白叶枯病菌 (Xanthomonasoryzaepv .oryzae)和水稻细菌性条斑病菌 (Xanthomonasoryzaepv .oryzicola)有拮抗作用的菌株分别有 5 0 0、6 7、45、1 1和 9个。根据NA平板上菌落的形态特征 ,将 6 7株稻恶苗病拮抗细菌初步分为 7个类群 ,每一类群中选拮抗性能最强的一个菌株进行鉴定 ,结果有 4支菌株为Bacillussubtilis,另 3支菌株分别为B .pumillus、B .polymyxa和Pseudomonassp     

陕北土壤芽胞杆菌种类分布多样性研究

为了解陕北土壤中芽胞杆菌的种类及其多样性,将采集于陕北5个地点的土壤样品利用温度筛选法、稀释平板计数法进行芽胞杆菌分离,用16S rDNA基因测序法进行种类鉴定。结果发现,从采集的土壤样品中共分离到31株芽胞杆菌,共19种芽胞杆菌,其中部分菌株为国内少见报道的菌株。通过16S rDNA基因序列的系统发育树分析发现,分离的菌株基本上和模式菌株亲缘关系较近,在种的系统发育上也存在一定的交叉,各菌株间序列差异较小。对土壤样品中芽胞杆菌多样性的研究中发现,不同土壤样品中的芽胞杆菌含量差异明显,表现为采自洛川毛主席故居土壤样品＞采自黄陵黄帝陵墓土壤样品＞采自宜川壶口瀑布土壤样品＞采自富县石泓寺土壤样品＞采自宝塔山宝塔下土壤样品,每个土壤样品中同种芽胞杆菌的含量差异也较明显,每个采集地点都含有特有的芽胞杆菌,说明陕北土壤中芽胞杆菌较丰富。     

Effect of Bacillus subtilis and Pseudomonas fluorescens on Growth of Greenhouse Tomato and Rhizosphere Microbial Community

Bacillus subtilis(B. subtilis) and Pseudomonas fluorescens(P. fluorescens) are two of the most important plant growth promoting rhizobacteria(PGPR) in agriculture. An in situ trial was conducted on greenhouse tomato(Lycopersicum esculentum Mill.) to examine the effect of two bacterial strains, Bacillus subtilis(CGMCC 1.3343) and Pseudomonas fluorescens(CGMCC 1.1802), on tomato growth, gray mold disease control, catabolic and genetic microbial features of indigenous rhizosphere bacteria under lownitrogen conditions. A commercial inoculant(ETS) was also tested as a comparison. Both B. subtilis and P. fluorescens promoted growth and biomass of seedlings, while only B. subtilis was effi cient in reducing gray mold incidence in greenhouse tomato. The two bacterial strains could colonization in tomato rhizosphere soil at the end of experiment(10 days after the last inoculation). Different AWCD trends and DGGE patterns were got in different bacterial treatments; however, analyses of microbial diversities showed that indigenous soil microbes did not seem to have signifi cant differences at either the catabolic or genetic level among treatments. ETS, as a commercial microbial agent, promoted plant growth and gave a higher microbial diversity in rhizosphere soil.     

Antagonistic Activities of Volatiles from Four Strains of Bacillus spp. and Paenibacillus spp. Against Soil-Borne Plant Pathogens

The four effective antagonistic Bacillus strains, isolated from the rhizosphere soil of cucumber in a greenhouse, produced antifungal volatiles. These volatiles strongly inhibited the growth of the most tested pathogenic fungi with wide host plants, induced the mycelial morphological abnormalities, and decreased the sclerotoid production of Sclerotinia sclerotiorum in sealed plates. Spores of Botrytis cinerea exposed to these volatiles for 24-48 h in cavity slides cracked and the sporaceous inclusion became brown and effused to the suspension. An interesting phenomenon observed was that all the bacterial volatiles exhibited intense inhibitory activities against the pigment formation of tested pathogenic fungi, including Ascochyta citrullina, Alternaria solani, Alternaria brassicae, and so on. Interactions mediated by microbial volatiles could be widespread in soils, and volatiles may play an important role in reducing disease levels. A phylogenetic analysis based on 16S rDNA sequence placed the four bacteria in three species Paenibacillus polymyxa （BMP-11）, Bacillus subtilis （BL02）, and Bacillus pumilus （BSH-4 and ZB 13）. Through headspace sampling and GC-MS analysis, a rich profile was found from B. subtilis and overlapping volatile patterns could be found among the different species. Studies are under the way to find the possible action mechanisms and to seek the effective application of bacterial volatiles in greenhouse.     

松材线虫生防放线菌的筛选、鉴定及其毒性因子初步研究

目的从土壤中筛选、鉴定出对松材线虫有较高杀灭活性的放线菌,并确定其毒力因子。方法以藤黄八叠球菌、枯草杆菌、大肠杆菌3个敏感菌株为抑菌检测对象,从南阳师范学院校园内、白河边、宝天曼、卧龙岗等地采集的土壤样品中筛选有抑菌活性的放线菌,采用形态学观察以及基于16S rRNA序列分析等方法对抑菌活性最高的菌株进行分类鉴定,将该菌株进行杀松材线虫活性测试,并分离纯化出杀线活性物质。结果筛选出4株有抑菌活性的放线菌菌株:C611、C612、C614、C619,其中C611菌株对藤黄八叠球菌、枯草杆菌和大肠杆菌均有较高抑制活性。结合该菌株形态学、生理学特征以及16S rRNA序列分析等结果,将其初步确定为链霉菌属。将C611发酵液处理松材线虫7 d后,线虫死亡率高达85%,空白对照组死亡率为0,对C611发酵液进行分离纯化后,初步确定活性成分为呋喃它酮。使用含量为0.1%呋喃它酮纯溶液测试杀线虫活性,作用于线虫5 d后其死亡率高达96%。结论本研究筛选到的生防放线菌C611,鉴定出其活性物质为呋喃它酮,丰富了松材线虫生防菌的种类,本研究首次发现呋喃它酮对线虫有较强毒杀作用,为松材线虫生物防治奠定了一定的理论基础。      

盐碱土壤修复菌剂的微生物筛选

为盐碱土壤修复菌剂提供菌种资源,本研究从盐碱地植物根际土壤中筛选具有促生耐盐碱、产胞外多糖、解磷、解钾等能力的芽孢杆菌,并通过形态、生理生化、分子鉴定确定菌株种类,通过向日葵盐碱地种植试验,考察耐盐碱芽孢杆菌发酵液对植物生长状况和土壤理化性质的影响。本研究从7株促生芽孢杆菌中筛选出两株耐盐碱、产胞外多糖、解磷、解钾的菌株B25、B43,经鉴定为巨大芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌。在向日葵盐碱土壤种植试验中,增施土壤修复菌剂的处理比常规施肥株高、茎粗、盘粒重、结实率、产量分别增加1.53%、8.44%、7.23%、3.40%、12.37%;土壤pH降低0.4,有机质、全氮、有效磷、速效钾含量分别增加42.48%、15.04%、41.52%、31.13%,含盐量减少1.76%。巨大芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌具有较强的胞外多糖产生能力,在盐碱土壤中,促进向日葵生长和改良土壤的效果显著,可用于盐碱土壤改良菌剂的研制。