牛抵抗素对牛肺泡巨噬细胞TLR4/MyD88非依赖信号通路基因表达的影响

旨在探究牛抵抗素通过TLR4/MyD88非依赖信号通路诱发牛肺泡巨噬细胞的相关炎症反应机理。使用100 ng·mL^-1终浓度牛抵抗素诱导牛肺泡巨噬细胞,分别在0、1.5、3.0、6.0、12.0、24.0 h时采用qRT-PCR检测TLR4/MyD88非依赖信号通路相关基因(TLR4、TRAM、NF-κB)mRNA水平表达量,通过ELISA法检测下游IL-6、1L-1β、TNF-α等促炎细胞因子表达水平。结果显示,100 ng·mL^-1牛抵抗素处理牛肺泡巨噬细胞后,TLR4、TRAM、NF-κB基因表达量于6.0 h时极显著上调(P<0.01),诱导12.0 h时,相关基因表达量达到最高;IL-6、1L-1β、TNF-α等促炎细胞因子于1.5 h表达量极显著上调(P<0.01),且均存在时间依赖效应。抵抗素诱导牛肺泡巨噬细胞后,可激活TLR4/MyD88非依赖信号通路,通过信号传递,释放大量促炎细胞因子,引起肺部炎症。     

髓样分化因子MyD88与天然免疫系统中Toll样受体的关系

髓样分化因子（myeloid differentiation factor88,MyD88）是Toll样受体（Toll-like receptors,TLRs）信号通路中的一个关键的转接分子,属于死亡结构域（death domain）家族和Toll/IL-1R家族成员,从Toll受体与MyD88的结构、基本功能及其所介导的信号通路进行综述。     

虾青素对脂多糖通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路诱导的IPEC-J2细胞炎症的影响

【目的】研究虾青素(AST)对脂多糖(LPS)通过TLR4/My D88/NF-κB信号通路诱导的IPEC-J2细胞炎症的影响。【方法】采用MTT法确定虾青素和LPS对IPEC-J2细胞和转染IPEC-J2细胞的最佳处理浓度和处理时间,在处理后采用实时荧光定量PCR检测IPEC-J2细胞和转染IPEC-J2细胞炎症因子NF-κB、TNF-α、IL-6和IL~(-1)β的m RNA相对表达量,采用ELISA检测上述炎症因子的分泌量。【结果】当处理3 h,虾青素浓度达到150μmol·L~(-1)时,IPEC-J2细胞和转染IPEC-J2细胞活力达到峰值;当处理6 h,LPS质量浓度达到100 ng·m L~(-1)时,IPEC-J2细胞和转染IPEC-J2细胞活力达到峰值。与对照组相比,LPS组IPEC-J2细胞NF-κB、TNF-α、IL-6、IL~(-1)β的m RNA相对表达量和分泌量显著升高(P0.05);与LPS组相比,AST+LPS组NF-κB、TNF-α、IL-6、IL~(-1)β在IPEC-J2细胞中的m RNA相对表达量和分泌量显著降低(P0.05),而在转染IPEC-J2细胞中的炎症因子m RNA相对表达量和分泌量均无显著变化(P0.05)。【结论】虾青素可以抑制细胞炎症反应,且对细胞的保护作用与TLR4/My D88/NF-κB信号通路相关。     

仙人掌多糖对THP–1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇蓄积及其相关基因表达的影响

采用PMA和ox–LDL构建THP–1巨噬细胞源性泡沫细胞模型,观察不同浓度(5、10、15 nmol/L)仙人掌多糖(ODP–Ia)对泡沫细胞内脂质、胆固醇蓄积以及介导胆固醇流出的ABCA1、ABCG1、SR–BI基因表达的影响。结果显示:THP–1巨噬细胞泡沫化后胞内蓄积了大量脂质,高剂量(15 nmol/L)ODP–Ia能够显著减少胞内脂质、胆固醇蓄积,并增强ABCA1、ABCG1、SR–BI m RNA及蛋白表达(与单独ox–LDL处理组比较,P0.05),但效果均次于阳性对照依折麦布组(P0.05),低、中剂量(5、10 nmol/L)ODP–Ia作用效果均不显著。本研究结果表明,ODP–Ia可通过增强ABCA1、ABCG1、SR–BI基因表达来减少胞内胆固醇蓄积。     

利用RNA干扰技术研究长牡蛎TLR2-2基因对MyD88-2基因表达的影响

为研究长牡蛎(Crassostrea gigas)免疫基因TLR2-2对MyD88-2基因表达的调控作用,将体外合成的dsRNA注射进入成体长牡蛎体内,72 h后检测TLR2-2基因和MyD88-2基因的表达量。结果表明,成功地对TLR2-2基因和MyD88-2基因进行了干扰,而在TLR2-2基因被干扰后,MyD88-2基因的表达量显著下降,但在MyD88基因被干扰的长牡蛎中TLR2-2基因表达量没有明显变化。     

仙人掌多糖提取的二次优化研究

在以仙人掌多糖提取时间、提取温度和料液比3个因素最佳配合基础上,选取酒精用量、沉淀时间两因素进行二次回归正交组合设计试验,对其提取工艺参数进行优化研究。利用MATLAB7.0软件对仙人掌多糖提取产量的二次多项数学模型解逆矩阵分析表明:在酒精用量为6.52倍,沉淀时间59.7h的条件下,仙人掌多糖提取最大预测值为35.22g/100ml,实际值为35.17g/100ml,两者基本相符。利用优化工艺参数提取仙人掌多糖时,具有最大的提取产量。     

野生仙人掌多糖对DPPH.NO2-的清除能力及其还原力研究

利用热水浸提法提取野生仙人掌多糖,并用Sevage法对其进行纯化,通过测定DPPH·、NO2-的清除作用和其还原力,研究野生仙人掌多糖的抗氧化活性.结果表明,野生仙人掌多糖对DPPH·、NO2-有较强的清除作用,并具有一定的还原能力,其抗氧化性有待深入研究和开发应用.     

米邦塔仙人掌多糖提取工艺的研究

对热水提取米邦塔仙人掌(Opuntia milpa alta Haw)粗多糖的提取工艺进行研究。以新鲜米邦塔仙人掌为原料,采用单因素试验考察料液比、提取温度、提取时间和提取次数对米邦塔仙人掌粗多糖得率的影响,并通过响应面法优化工艺参数。结果表明,影响粗多糖得率的因素主次顺序为提取温度料液比提取时间。确定最佳提取工艺参数为提取温度83℃,料液比1∶28(g∶m L),提取时间为3 h,在此条件下,仙人掌粗多糖的得率为2.05%。     

PCV2感染对仔猪肝脏MyD88-NF-κB信号途径的影响

选取31头经检测猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原和抗体均为阴性的5周龄断奶仔猪,随机分为对照组16头和试验组15头,对照组仔猪每头滴鼻4 mL PBS,试验组仔猪每头滴鼻4 mL 5×105TCID50.mL-1PCV2悬液。于PCV2接种当天剖杀4头仔猪作为对照组,分别于14、21和35 d剖杀4头对照组和5头试验组仔猪,采集肝脏。用激光共聚焦显微镜检测核因子κB/P65(NF-κB/P65)蛋白的核易位变化;蛋白提取法分别提取肝脏细胞核蛋白和胞浆蛋白,Western blot定量检测细胞核中NF-κB/P65和细胞浆中p-IκBα、MyD88蛋白含量的变化;电泳迁移率(EMSA)法检测细胞核中NF-κB DNA的结合率变化。检测结果显示,PCV2接种仔猪,肝脏中NF-κB/P65蛋白核易位逐渐增多,到21 d达到峰值;p-IκBα、MyD88、NF-κB/P65 DNA结合率在接种后均先升高后趋于恢复,并于21 d达到高峰。与对照组仔猪相比,肝脏中MyD88和NF-κB/P65蛋白含量以及NF-κB DNA结合率在14和21 d试验组均显著升高(P<0.05),35 d含量变化不显著;21 d时试验组p-IκBα蛋白含量显著升高。相关性分析显示,NF-κB/P65蛋白含量与MyD88含量、NF-κB DNA结合率之间存在显著正相关,相关系数分别是0.566和0.528。结果表明,PCV2可通过激活MyD88启动NF-κB信号途径;通过IκBα的磷酸化降解激活NF-κB,并促进其进行核易位,使NF-κB与DNA发生结合,调控相关炎性细胞因子的转录和表达。     

牛蒡多糖对小鼠免疫调节作用的研究

经口给予小鼠不同剂量的牛蒡多糖20 d后,与对照组相比能显著地提高小鼠抗体生成细胞数、小鼠巨噬细胞吞噬指数和小鼠脾脏、胸腺器官相对重量。检测结果表明,牛蒡多糖具有较强的调节体液免疫功能和调节小鼠巨噬细胞吞噬功能的作用。     

中药复方多糖对不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞TLR 4介导的TRIF依赖性途径的影响

探讨中药复方多糖在不同MHC B-LβⅡ基因型鸡淋巴细胞中对TLR4信号转导通路下游TRIF依赖性途径主要元件的影响。采用PCR-SSCP方法将500羽京红1号蛋鸡按不同MHC B-LβⅡ基因型分组,采集不同MHC B-LβⅡ基因型鸡的外周血淋巴细胞,分别加入终质量浓度为100、75、50、0μg/mL(高、中、低、对照组)中药复方多糖共培养16、24、32、48h,收集细胞,采用Real-time PCR方法检测TRIF、IRF3、IFN-β基因mRNA的表达。结果显示:(1)与对照组相比,中药复方多糖能显著增强不同MHC B-LβⅡ基因型鸡TRIF、IRF3、IFN-βmRNA的表达量(P0.05)。(2)中、低剂量中药复方多糖组AA基因型鸡TRIF、IRF3基因mRNA的表达量各个时间段均高于高剂量组,IFN-β在24、32、48h高于高剂量组,高剂量中药复方多糖组BB基因型TRIF、IRF3基因的表达量各个时间段高于其他剂量组,IFN-β在24、32、48h高于其他剂量组,低剂量中药复方多糖组中BC基因型TRIF、IRF3基因的表达量各个时间段高于其他剂量组,IFN-β在24、32、48h高于其他剂量组。表明中药复方多糖可能与淋巴细胞表面TLR4结合,可以通过下游TRIF依赖性信号转导通路,调控细胞免疫,并且对促进其信号通路主要元件mRNA的表达的最适cCHMPS剂量有一定的影响。     

响应面法优化米邦塔仙人掌水溶性多糖提取工艺的研究

[目的]为了寻求采用响应面分析法提取仙人掌多糖的最佳工艺,为其开发利用提供可用数据。[方法]在单因素试验的基础上,根据Box-Benhnken的中心组合试验设计原理,选取提取温度、提取时间和水料比对仙人掌多糖提取影响显著的三个因素,采用三因素三水平的响应面分析方法,对仙人掌茎多糖提取条件进行优化。[结果]响应面分析结果表明,提取温度、提取时间以及水料比与仙人掌茎多糖多糖得率存在着显著的相关性,仙人掌茎多糖水提的最佳提取工艺条件为:提取温度86.1℃、时间提取时间3.61 h、水料比3.72∶1,仙人掌茎多糖的得率达到理论值0.694%。[结论]采用响应面分析法优化工艺得到的提取条件参数可信,具有可行性与应用价值。     

虾青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响及机制

【目的】研究虾青素(AST)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响及作用机制,为将虾青素应用于炎症治疗奠定理论基础。【方法】采用不同浓度梯度的脂多糖及虾青素对RAW264.7细胞进行不同时间段的处理,通过MTT法确定最佳处理浓度和时间,对细胞进行最佳处理后,用ELISA法、荧光定量PCR技术和Western blot法分别检测细胞炎症因子的分泌量、mRNA相对表达量和蛋白相对表达量。【结果】100μmol/L虾青素和2μg/mL脂多糖处理3 h的RAW264.7细胞活力处于峰值。与对照组相比,脂多糖组RAW264.7细胞中TNF-α、IL-6和Caspase-1的分泌量分别降低了12.83%、9.66%和20.80%(P0.05),脂多糖对于TLR4/MyD88/NF-кB通路相关蛋白表达有促进作用,其中,TLR4和NF-кB p65蛋白相对表达量分别提高了195.40%和226.95%(P0.05);与LPS组相比,AST+LPS组中虾青素对炎性因子的分泌及mRNA表达有抑制作用,TLR4、MyD88和NF-кB p65蛋白相对表达量降低了54.99%、45.70%和28.20%(P0.05)。【结论】虾青素预保护能抑制TLR4/MyD88/NF-кB通路相关蛋白的表达,进而缓解脂多糖刺激RAW264.7细胞产生的炎症反应。     

槲皮素通过TLR4/MyD88途径改善LPS诱导的bEECs的炎症反应

【目的】旨在探明槲皮素对LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞(bEECs)炎症反应的作用。【方法】用组织块和差时消化法分离纯化bEECs, 1μg/mL脂多糖(LPS)作用12 h后,添加不同浓度槲皮素(10, 20, 40μM)孵育12 h,采用Western blot法检测TLR4和MyD88蛋白的表达,同时通过qRT-PCR法检测炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的相对表达量。【结果】经CK18免疫荧光染色证实获得的bEECs纯度较高。LPS作用后,细胞炎症因子的表达显著高于对照组(P<0.01)。相比于LPS组,槲皮素孵育后,可降低炎症因子和TLR4/MyD88的表达(P<0.01)。【结论】槲皮素可通过抑制TLR4/MyD88的表达,改善LPS诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞的炎症反应,该结果将为奶牛子宫内膜炎的治疗提供了新的研究思路和理论依据。     

苦荆茶多糖对小鼠免疫功能的影响

采用小鼠碳粒廓清试验和腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验研究苦荆茶多糖对小鼠免疫功能的影响.将试验小鼠分为3组,即空白对照组、阳性药物对照组(盐酸左旋咪唑按22.5 mg/kg体重给药)和苦荆茶多糖给药组(苦荆茶多糖按4 g/kg体重给药),给药方式为灌胃给药.7d后,测定小鼠脾脏指数、碳粒廓清指数、吞噬指数和腹腔巨噬细胞吞噬功能.结果表明,苦荆茶多糖给药组和左旋咪唑给药组小鼠的碳粒廓清指数、脾脏指数和吞噬指数均显著(P＜0.01或P＜0.05)高于空白对照组,腹腔巨噬细胞吞噬功能显著(P＜0.05)高于空白对照组.说明苦荆茶多糖具有增强小鼠机体免疫力的作用.     

迭鞘石斛所含多糖对小鼠免疫细胞影响的研究

[目的]研究迭鞘石斛（Dendrobinm chryseum Rolfe）所含多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖以及腹腔巨噬细胞的影响。[方法]分离提取小鼠脾脏淋巴细胞和腹腔巨噬细胞,通过添加和不添加迭鞘石斛所含多糖进行体外培养,以MTT法检测这些免疫细胞增殖的变化情况。[结果]石斛多糖在中、高浓度时可极显著提高小鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的增值（P﹤0.01）,低浓度时没有增强作用。[结论]迭鞘石斛所含石斛多糖在体外对小鼠脾淋巴细胞增殖以及腹腔巨噬细胞的增殖有增强作用,说明对小鼠具有免疫增强作用。     

转录组分析探讨揭示羊肚菌多糖ME-X抗S180肿瘤的分子机制

【目的】为探究羊肚菌多糖(ME-X)对S180肿瘤细胞抑制作用及其基因表达的影响,探索ME-X抑制小鼠S180肿瘤表型下潜在的作用分子及主要信号通路。【方法】以S180肿瘤小鼠为模型,先进行ME-X体内抑制小鼠S180肿瘤试验,再结合RNA-Seq测序技术对体内试验组中小鼠的S180肿瘤细胞进行测序并对得到的数据进行生物信息学分析。【结果】羊肚菌多糖(ME-X)和甘露聚糖肽(mannatide)一样能够极显著(P<0.01)抑制小鼠S180肿瘤的生长,其抑瘤率可达53.81%。差异表达基因(differential expressed genes,DEGs)分析结果显示羊肚菌多糖抑制S180肿瘤的关键基因主要富集在PI3K-AKT信号通路中,该通路中的成纤维细胞生长因子(Fgf10)、成纤维细胞生长因子受体(Fgfr2)、细胞因子受体(Prlr、Ghr、I12rb)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(Pck1)等多个基因显著上调。【结论】羊肚菌多糖(ME-X)可能通过PI3K-AKT信号通路调控S180肿瘤细胞代谢、迁移、细胞周期等进程达到抑制S180肿瘤的目的,为羊肚菌多糖抑制肿瘤分子机...