神经生长因子受体TrkA在母牛性腺及性腺外生殖器官中的表达研究

采用FQ-PCR方法和Western Blot技术对成年母牛卵泡期和黄体期的子宫、卵巢、输卵管中TrkAmR-NA和蛋白表达进行检测,旨在探讨TrkA在母牛卵泡期和黄体期子宫、卵巢、输卵管3种组织中的表达情况。结果表明:TrkA mRNA和蛋白在卵泡期和黄体期的子宫、卵巢、输卵管中均有表达,且卵泡期输卵管中TrkAmRNA表达量极显著高于卵泡期卵巢和黄体期卵巢(P0.01),其他组织间无显著性差异。     

神经生长因子及其受体在蛋鸡卵巢上的表达

以83日龄性未成熟和230日龄性成熟蛋鸡各5只为试验动物,通过免疫组织化学方法和荧光定量PCR技术研究神经生长因子(NGF)及其受体酪氨酸激酶A(TrkA)和神经营养素受体p75(p75)在蛋鸡卵巢和等级前卵泡上的表达定位及其mRNA表达水平。结果表明:在83日龄性未成熟蛋鸡卵巢上均未发现NGF及其受体TrkA和p75阳性表达细胞,但在230日龄等级前卵泡的膜细胞和颗粒细胞中均发现有其阳性细胞表达。NGF及其受体的mRNA表达水平在230日龄蛋鸡小黄卵泡(SYF)上的表达量显著高于各自在小白卵泡(SWF)和大白卵泡(LWF)上的表达量。此外,230日龄蛋鸡血清中的雌激素和孕激素水平都显著高于83日龄蛋鸡。综上所述,NGF可能在蛋鸡等级卵泡的生长、发育和排卵过程中起一定调节作用。     

促性腺激素受体在母犬生殖器官的表达定位研究

为研究促性腺激素受体(FSHR、LHR)在母犬生殖器官中的分布情况,运用免疫组织化学SABC法对处于卵泡期、黄体期成年母犬的卵巢、子宫、输卵管中FSHR和LHR分别进行免疫定位。结果表明:FSHR和LHR阳性细胞在卵巢主要见于卵母细胞、颗粒细胞、卵泡膜细胞、外周生殖上皮细胞和血管周围间质细胞;输卵管中主要分布于输卵管黏膜表面的柱状上皮细胞和肌层细胞;子宫中主要见于子宫内膜上皮细胞、子宫腺上皮细胞。此外,发情周期不同,FSHR和LHR的表达量存在差异,卵泡期卵巢FSHR和LHR的表达量均高于黄体期,且卵泡期卵巢的FSHR阳性反应强度均高于LHR;子宫中卵泡期FSHR、LHR的阳性反应强度高于黄体期,且黄体期中LHR阳性反应强度高于FSHR;输卵管中卵泡期FSHR、LHR的阳性反应强度高于黄体期,且黄体期LHR阳性反应强度高于FSHR。本试验研究促性腺受体在动物生殖器官中的表达情况,对进一步探讨动物促性腺激素的作用机制,具有非常重要的意义。     

脑源性神经营养因子在母牛性腺及性腺外生殖组织中的表达

采用RT-PCR方法及免疫组织化学技术检测脑源性神经长生因子BDNF基因在母牛卵泡期和黄体期的卵巢、输卵管和子宫组织中的表达和定位情况。结果表明:BDNF mRNA表达于上述2个时期3种组织中,主要表达于卵巢的颗粒细胞和膜细胞、输卵管的黏膜上皮细胞、子宫内膜上皮细胞及子宫腺细胞,且各组织间免疫活性的表达强度明显不同。     

促性腺激素释放激素在不同品种水牛卵巢中的免疫组化定位

【目的】了解促性腺激释放激素（GnRH）在广西沼泽型水牛与摩拉杂交水牛卵巢中定位表达的异同点,为深入阐明GnRH调节卵巢功能的机制提供理论依据。【方法】采用免疫组化SP染色法对广西沼泽型水牛和摩拉杂交水牛卵巢中GnRH及其受体的分布表达进行对比研究。【结果】两种不同品种水牛卵巢中均存在大量的GnRH阳性细胞,且主要位于颗粒层细胞和黄体粒细胞的胞质内;通过比较显示,两种不同品种水牛卵巢GnRH阳性细胞个数差异极显著（P〈0．01）,但GnRH阳性细胞大小及其平均光密度的差异均不显著（P〉0．05）。【结论】不同品种水牛卵巢的GnRH分布差异可能与繁殖性能有关,但主要分布于巢卵颗粒层细胞和黄体粒细胞的胞质内。     

GnRH在青年摩杂一代水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的免疫组化定位

[目的]研究促性腺激素释放激素（GnRH）在青年摩杂一代水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的免疫组化定位。[方法]采用免疫组织化学SuperPicTure^TM二步法检测5头青年摩杂一代水牛下丘脑、垂体和卵巢中GnRH的分布情况,研究GnRH在下丘脑、垂体及卵巢的分布上的联系,进而了解GnRH在下丘脑、垂体及卵巢三者之间分泌释放的途径。[结果]GnRH存在于青年摩杂一代水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的各个环节。青年摩杂一代水牛下丘脑中各主要核团都有GnRH免疫阳性神经元的分布,尤其以视上核、视前核、室旁核分布较多。对于垂体,GnRH免疫阳性产物只存在于青年摩杂一代水牛的腺垂体中。青年摩杂一代水牛卵巢中生殖上皮细胞、颗粒细胞和黄体细胞发现有GnRH免疫阳性产物。[结论]为进一步研究GnRH在生殖中的生理和作用机制提供形态学依据,并对青年摩杂一代水牛的繁殖育种起到参考指导作用。     

水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的分离·培养和生物学特性研究

[目的]建立一种高效的水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞分离培养方法,为胚胎着床和子宫内膜相关疾病的分子生物学机制研究奠定基础。[方法]采用酶消化、刮取、系列过滤和差速贴壁相结合的方法分离水牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,用免疫细胞化学法和台盼兰染色法检测分离细胞的纯度和活率。[结果]成功分离培养出子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞;免疫荧光染色和细胞计数表明上皮细胞和基质细胞的纯度均达90％以上;台盼兰染色结果显示,上皮细胞的活率为91％,基质细胞的活率为78％。[结论]采用酶消化、刮取、过滤和差速贴壁相结合的方法可分离出高纯度的永牛子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞。     

雌激素对小鼠子宫BDNF、NGF表达的影响

以21日龄雌性小鼠为研究对象,用雌激素处理一周后收集子宫,苏木素-伊红(HE)染色法观察到子宫发生水肿、内膜外膜明显增厚。提取子宫总RNA和总蛋白,通过实时荧光定量和Western-Blot方法检测雌激素对子宫中神经营养因子BDNF及NGF的表达。荧光定量结果表明:试验组BDNF表达显著升高、NGF表达显著降低。Western-Blot结果与荧光定量结果一致。这说明雌激素能够调节小鼠子宫中BDNF和NGF的表达。     

子宫蓄脓犬的子宫和卵巢组织的显微及超微结构观察

应用超薄切片、光学及电子显微镜检查等技术,对临床上96例犬子宫蓄脓病例卵巢和子宫作显微、超微结构的观察,探讨其发病机制.结果表明,大部分病犬的子宫内膜腺体出现不同程度的囊性增生(CEH)和炎症变化;卵巢有持久黄体或囊性黄体.开放型病犬多表现子宫壁增厚;闭锁型多表现子宫内膜萎缩,子宫壁极薄,子宫内膜腺体发生CEH时,其上皮表现鳞状化生和腺瘤样病变.此外,闭锁型病例其子宫与卵巢肉眼可见的、显微及超微组织病理学变化均较开放型严重.     

槟榔江水牛ACVR1基因分离鉴定及表达谱分析

【目的】ACVR1作为一些TGF-β超家族成员信号通路的I型受体之一,在器官形成和细胞分化及卵泡形成等调控事件中扮演重要角色。迄今,有关ACVR1基因的研究主要集中在人上,有关水牛ACVR1基因的研究尚未见报道。【方法】采用RT-PCR测序法对槟榔江水牛ACVR1基因的编码区序列进行了分离鉴定,进一步对之进行了功能生物信息学和表达谱分析。【结果】水牛ACVR1基因编码区全长1 530 bp,编码1个由509个氨基酸残基构成的多肽。水牛ACVR1为弱亲水性蛋白,含有1个信号肽和跨膜区,定位在质膜上;该蛋白含有Activin_recp、TGF_beta_GS和STKc_ACVR1_ALK1三个保守结构域,其二级结构、三维结构与人的ACVR1极为相似。水牛的ACVR1与普通牛、野牦牛、人和猪等8个物种的ACVR1氨基酸序列间一致性99%。在所检测的水牛9个组织中,ACVR1基因在肝脏、脾脏、肾、瘤胃、卵巢、子宫和睾丸中均表达,其中在卵巢和子宫中表达水平最高。【结论】水牛的ACVR1与其他物种的ACVR1具有相近的氨基酸组成和结构特征,其作为BMP、AMH信号通路的I型共享受体,可能参与了水牛的细胞分化及卵泡形成等调控事件。     

Magnaporthe Rab5 homologs show distinct functions in nerve growth factor(NGF)-mediated neurite outgrowth and cell differentiation

Nerve growth factor(NGF) binds to TrkA and forms a NGF/TrkA complex at the cell surface,which is then internalized into signaling endosomes and promotes neuronal survival and neurite outgrowth.The small GTPase Rab5 is reported to localize on the plasma membrane and early endosomes,regulating endosome fusion.It was reported that endogenous Rab5 function may need to be suppressed during NGF-induced neurite outgrowth and cell differentiation.Two Rab5 homologs(MoRab5A:MGG_06241 and MoRab5B:MGG_01185) were characterized from the rice blast fungus Magnaporthe oryzae,and MoRab5 B was identified as the Rab5 ortholog promoting early endosomal fusion,while MoRab5 A specialized to perform a non-redundant function in endosomal sorting.In this study,we examined whether MoRab5 A and MoRab5 B play different roles in NGF-induced neurite outgrowth and cell differentiation in PC12 cells(a rat pheochromocytoma cell line).Our data showed that MoRab5 B is a negative regulator of NGF signaling and neurite outgrowth in PC12 cells,similar to human Rab5(hRab5).MoRab5B:WT inhibits NGF signaling-dependent neurite outgrowth while the dominant-negative MoRab5 B mutant(MoRab5B:DN) enhances NGF signaling and neurite outgrowth.In contrast,MoRab5A:WT and MoRab5A:DN both significantly promote NGF-induced neurite outgrowth,indicating that MoRab5 B is more similar to hRab5 than MoRab5 A in the regulation of NGF signal transduction.     

增殖细胞核抗原在水牛腔前卵泡中的表达与卵巢组织定位

【目的】探讨在水牛中增殖细胞核抗原（PCNA）参与卵泡发生的时期及其在卵巢组织不同时期卵泡中的表达定位;【方法】采用石蜡切片结合免疫组化的方法对PCNA在卵巢组织中进行定位,利用实时荧光定量PCR（QRT-PCR）技术检测PCNA在腔前卵泡中的表达情况。【结果】免疫组化结果显示：原始卵泡中的卵母细胞能检测到PCNA的表达,但颗粒细胞并未观察到PCNA的免疫染色;初级卵泡到次级卵泡,卵母细胞和颗粒细胞中均可检测到PCNA的表达,且在颗粒细胞中的表达有增强的趋势;有腔卵泡中,颗粒细胞、卵泡膜细胞及包围卵母细胞的卵丘细胞中都能观察到很强的免疫染色。定量表达检测结果显示：PCNA在原始卵泡、初级卵泡及次级卵泡中的表达呈上升趋势,并且有显著差异（43.50333±0.138338 vs 1.633804±0.093796 vs 1±0.012219 , P<0.01）;【结论】从初级卵泡开始在颗粒细胞中能检测到PCNA的表达,并且其表达随着卵泡的发育有明显的增强趋势,腔前卵泡中PCNA表达的QRT-PCR测定结果与免疫组化结果相一致,研究结果为阐明PCNA参与卵泡发生的分子调控机制奠定了基础。     

A model for neuronal competition during development

We report that developmental competition between sympathetic neurons for survival is critically dependent on a sensitization process initiated by target innervation and mediated by a series of feedback loops. Target-derived nerve growth factor (NGF) promoted expression of its own receptor TrkA in mouse and rat neurons and prolonged TrkA-mediated signals. NGF also controlled expression of brain-derived neurotrophic factor and neurotrophin-4, which, through the receptor p75, can kill neighboring neurons with low retrograde NGF-TrkA signaling whereas neurons with high NGF-TrkA signaling are protected. Perturbation of any of these feedback loops disrupts the dynamics of competition. We suggest that three target-initiated events are essential for rapid and robust competition between neurons: sensitization, paracrine apoptotic signaling, and protection from such effects.     

摩交一代水牛与沼泽型水牛下丘脑细胞构筑的比较研究

[目的]为水牛下丘脑参与生殖生理功能调节的研究提供形态学依据。[方法]应用石蜡切片NISSL染色,采用DMRXAQ550JMS型显微镜及其图象分析系统扫描水牛下丘脑切片。以LEICQWIN图象分析软件对细胞数密度、胞体平均面积、胞体周长、各型细胞的出现率进行研究。[结果]比较摩交一代水牛与沼泽型水牛下丘脑细胞构筑,结果显示,2种水牛下丘脑细胞大小差异较大,巨型、大型、中型、小型细胞在各个核团均有出现,且各自的比例也有明显不同;摩交一代水牛与沼泽型水牛下丘脑内侧部9个核团的神经纤维分布相似,各型细胞的出现率不同;摩交一代水牛与沼泽型水牛相比,在9个主要核团的细胞构筑均有明显差别。[结论]2种不同类型水牛下丘脑细胞存在较大差异,其参与调节2种类型水牛的不同生理生殖功能。     

Gene transfer and molecular cloning of the human NGF receptor

Nerve growth factor (NGF) and its receptor are important in the development of cells derived from the neural crest. Mouse L cell transformants have been generated that stably express the human NGF receptor gene transfer with total human DNA. Affinity cross-linking, metabolic labeling and immunoprecipitation, and equilibrium binding with 125I-labeled NGF revealed that this NGF receptor had the same size and binding characteristics as the receptor from human melanoma cells and rat PC12 cells. The sequences encoding the NGF receptor were molecularly cloned using the human Alu repetitive sequence as a probe. A cosmid clone that contained the human NGF receptor gene allowed efficient transfection and expression of the receptor.     

催产素在广西本地水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的免疫组化定位

[目的]研究催产素（OT）在广西本地水牛下丘脑、垂体及卵巢的分布,进而了解OT在下丘脑、垂体及卵巢三者之间分泌释放途径。[方法]采用免疫组织化学SuperPicTureTM二步法检测5头广西本地水牛的下丘脑、垂体和卵巢中催产素（OT）的分布情况。[结果]下丘脑中分泌OT的神经元主要分布在弓状核、视上核及室旁核,在腹内侧核、腹外侧核、交叉上核、背内侧核、乳头体、下丘脑前核等核团也有一定数量的阳性神经元;在腺垂体发现OT免疫反应阳性产物,自垂体柄和正中隆起的一侧可见平行排列的OT阳性神经纤维断续地延伸至神经部;卵巢中只在生殖上皮、卵泡颗粒细胞和黄体细胞发现有大量OT免疫阳性产物。[结论]首次发现OT存在于广西本地水牛下丘脑-垂体-卵巢轴的各个环节,并且下丘脑中各主要核团均有OT免疫阳性神经元的分布,尤其以弓状核、视上核、室旁核分布最多,为进一步研究OT的合成和作用机制提供形态学依据,并对广西本地水牛的繁殖育种及泌乳起到一定的参考指导作用。     

黄牛血液体外培养水牛牛巴贝斯虫的研究

人非巴贝斯虫病流行地区以临床检查健康，免疫学检查无巴贝斯虫感染的黄牛，分离血清和红细胞，分别与健康水牛红细胞和血清以不同的组方式混合，采用改进的微气静相培养技术外培养水牛牛巴贝斯虫，结果表明：黄牛红细胞不能作为寄生于水牛体内的牛巴贝斯虫体外培养的支持细胞，黄牛血清支持牛巴贝斯虫生长的能力明显低于水牛血清。这一发现对研究寄生于体内的牛巴贝斯虫的生物学特性及牛巴贝斯虫病的免疫均具有重要意义。     

水牛肺泡巨噬细胞的分离、培养及鉴定

为了深入研究水牛巨噬细胞（Macrophage,Mφ）的生物学特性,探索一种简便的水牛肺泡巨噬细胞（Alveolarmacrophage,AM）分离、培养方法,采用肺气管冷PBS灌洗法分离获得水牛肺泡细胞,并进行鉴定和功能检测。结果表明,采用肺气管冷PBS灌洗法可获得大量贴壁细胞,经光学显微镜和电子显微镜观察,其形态具备巨噬细胞的典型特征;酸性磷酸酶和非特异性酯酶阳性率分别为（89.4±3.5）%和（83.6±3.4）%;细胞表面抗原MHCⅡ阳性率为（96.6±1.3）%;鸡红细胞吞噬率为（23.6±4.2）%,墨汁吞噬率为（92.3±0.6）%。可见,肺气管冷PBS灌洗法是一种获取水牛肺泡巨噬细胞的可行方法。