TDZ对仙客来不同外植体再生的影响

在无菌条件下培养仙客来种子,并以无菌萌发植株的子叶节、子叶、叶片及叶柄为外植体进行芽分化诱导。试验结果表明,不同浓度TDZ对各外植体的诱导效果不同,用子叶节、子叶、叶片及叶柄均可诱导出再生芽,但以叶片为材料的诱导效果最佳,其中1.0 m g/L TDZ对叶片再生芽的诱导效果最好,而子叶以0.5 m g/LTDZ、子叶节和叶柄以0.2 m g/L TDZ诱导再生芽的效果较好。     

杂种枫香组织培养再生研究

目的枫香具有适应性强、生长速度快、观赏价值高等特点，既可以作为用材树种又可以作为优良的园林绿化树种。北美枫香能够与中国枫香杂交并可产生有杂种优势的后代，但是杂种枫香的快速繁殖技术和遗传转化体系还有待完善。方法本研究以北美枫香为母本，中国枫香为父本进行杂交，选用子一代杂种枫香的子叶、子叶节以及下胚轴为外植体材料建立高效的组培再生体系，并对3种外植体的分化能力进行比较。结果(1) 子叶和子叶节外植体最佳芽诱导培养基为0.2 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA的WPM培养基，而下胚轴外植体最佳芽诱导培养基为0.1 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA的WPM培养基。(2)3种外植体在0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.8 mg/L GA不加琼脂的WPM芽伸长液体培养基中获得最高的平均不定芽诱导数。(3)不定芽在2.0 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA的WPM培养基中生根，生根率达到100%。(4)不定芽生根培养2个月后长为完整植株，移栽成活率在90%以上。结论(1) 杂种枫香3种外植体的分化能力依次为:子叶节>子叶>下胚轴，其中子叶节的分化能力显著高于子叶和下胚轴。(2)TDZ能够有效促进不定芽的诱导，GA对不定芽的伸长具有显著的影响。(3)杂种枫香外植体在固体培养基中获得了最高的不定芽诱导率，在液体培养基中获得了最高不定芽平均数量，而且液体培养中未出现玻璃化。本研究为杂种枫香新品种的快速繁育以及遗传转化体系的建立奠定了良好的基础。      

银白杨下胚轴高频离体再生体系的建立和优化

【目的】建立银白杨(Populus alba)下胚轴高频再生体系,为银白杨遗传转化和推广利用奠定基础。【方法】以银白杨下胚轴为外植体,通过器官发生途径诱导形成不定芽,探讨苗龄、接种方式及不同植物生长调节剂、硝酸银和蔗糖质量浓度等对银白杨下胚轴不定芽分化和生根的影响。【结果】适宜银白杨下胚轴不定芽分化的最佳培养基为:MS+AgNO33.5 mg/L+蔗糖35 g/L+琼脂6.0 g/L+IBA 0.3 mg/L+TDZ 1.5 mg/L,用该培养基培养银白杨下胚轴外植体,其分化率为98.63%,平均每个外植体形成的不定芽为23.81个。银白杨下胚轴外植体不定芽未经愈伤组织而直接产生于下胚轴的表皮或近表皮等表层细胞。3~7 d苗龄银白杨下胚轴诱导不定芽分化能力无显著差异,诱导率均达到95%以上,7 d后随着苗龄的增加,不定芽分化、诱导能力快速下降,苗龄为11 d时不定芽分化率只有52.28%。不同切段下胚轴不定芽再生能力由强到弱表现为:上部切段(靠近子叶端的下胚轴部分)>中部切段>下部切段。以正插(形态学下端插入培养基)方式接种的外植体不定芽再生能力显著大于反插(形态学上端插入培养基)和平放的。【结论】优化了银白杨的组织培养体系,初步找到了影响银白杨下胚轴诱导分化及植株再生的主要因子。     

芥蓝高频离体再生体系的建立

以'尖叶芥蓝'、'中花粗心芥蓝'和'迟花芥蓝'3个品种为材料,研究苯基噻二唑脲(TDZ)预处理、不同激素配比、基因型和外植体类型对不定芽再生的影响,建立芥蓝离体高频再生体系.结果表明:3个品种中,'中花粗心芥蓝'再生能力最强;不同外植体类型中再生率由大到小依次为:下胚轴、带柄子叶、子叶块;不定芽再生的最佳激素组合为0.2 mg·L-1NAA+6 mg·L-16-BA;以此激素组合为基础,下胚轴经0.5 mg·L-1TDZ浸泡30 min预处理接种在分化培养基(MS+0.2 mg·L-1NAA+6 mg·L-16-BA+8 g·L-1琼脂+30 g·L-1蔗糖)上不定芽再生率最高,达98.5%.     

黄瓜不定芽诱导试验

研究了津优31号黄瓜适宜的外植体处理方式及诱导不定芽的适宜培养基。结果表明,适宜的外植体处理方式为:保留单片子叶,下胚轴纵切,去除2/3子叶;适宜的不定芽诱导培养基为:MS+TDZ0.005 mg/L+IBA 0.05 mg/L。     

黄瓜子叶节离体再生体系的研究

以6个品系的欧洲温室型全雌系黄瓜子叶节为材料,比较了不同激素组合,苗龄,切割方式和基因型,从而建立了简单快速高效的黄瓜离体再生体系。结果表明:在MS+BA1.5mg·L-1+IAA0.2mg·L-1上启动培养3d为最佳芽启动培养方式,再转入最佳芽诱导培养基MS+TDZ0.02mg·L-1。10d苗龄的子叶节出芽率最高,保留两片子叶各切除1/3为最佳切割处理方式,六种基因型均能生芽,且每外植体出芽数均较高达1.93～3.15。整个过程从种子萌发到驯化移栽,仅需8周。     

大白菜真叶高频再生体系的建立

【目的】建立大白菜真叶高效再生体系。【方法】选择‘06J28’、‘92S105’、‘06J30’、‘06J31’4种不同基因型大白菜作为试验材料,以刚长出第2片真叶的大白菜幼苗的第1片真叶为外植体,研究不同激素(6-BA、NAA、TDZ)组合、外植体切割与接种方式以及不同基因型对真叶不定芽再生的影响。【结果】在MS+4.0mg/L 6-BA+0.14mg/L NAA培养基上培养时,‘06J28’真叶不定芽再生率和再生系数达到最大分别为87.63%和2.62;在MS+0.3mg/L TDZ+0.14mg/L NAA培养基上培养时,‘06J28’真叶不定芽的再生率和再生系数分别为80.73%和1.89,表明TDZ的作用与6-BA相似。在真叶柄基部和下胚轴交接处横切,保留完整真叶作为外植体为最佳切割方式,以真叶柄的下端竖直向下插入培养基为最佳接种方式。在供试的4种基因型材料中,‘06J28’真叶的再生率最高,达87.63%;‘92S105’的再生系数最高,达3.76。【结论】建立了大白菜真叶高效再生体系,为大白菜转基因研究奠定了基础。     

辣椒子叶和下胚轴的离体培养及高效再生体系的建立

采用 9 个辣椒品种(Capsicum annuum L.)的子叶和下胚轴,分别离体培养在附加不同激素及化合物的MB5培养基上,对苗龄、基因型、不同外植体、激素组合和 AgNO3等对外植体不定芽诱导分化和芽伸长的影响进行研究。结果表明,苗龄对外植体不定芽分化的方式有直接影响;AgNO3的加入可使芽分化率平均提高 20 %～30 %,并缩短外植体再生时间;子叶的不定芽分化率高于下胚轴;B5维生素有利于芽的生长和芽伸长率的提高。通过结果比较,筛选出了辣椒子叶和下胚轴离体再生的较好芽分化培养基为 MB5+5 mg/L、6-BA+0.5 mg/L、IAA+4 mg/L、AgNO3+30 g/L、蔗糖+5 g/L 琼脂;芽伸长培养基为 MB5+3 mg/L、6-BA+1 mg/L、IAA+2 mg/L、GA3+4 mg/L、AgNO3+30 g/L、蔗糖+5 g/L 琼脂;生根培养基为 1/2 MS+0.2 mg/L、IAA+0.1 mg/L NAA。     

膜荚黄芪(Astragalus membranaceus(Fisch) Bunge)组织培养再生体系的建立

本研究以膜荚黄芪的子叶、下胚轴、幼茎、幼叶为外植体,诱导愈伤组织及再生芽,建立膜荚黄芪组织培养再生体系。结果表明,子叶是最佳的外植体。在6-BA与2,4-D或NAA培养基组合中,以MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L为最佳的愈伤组织及芽诱导培养基。黄芪再生植株较难生根,在IAA、IBA和NAA激素培养基组合中,以1/2MS+IBA 2.0mg/L或1/2MS+IBA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L为最佳的试管苗生根培养基,生根率50%左右。     

辣椒全基因组测序材料Capsicum annuum cv.CM334再生体系的建立

选用辣椒全基因组测序材料Capsicum annuum cv. CM334、高抗CMV辣椒材料C. frutescens cv.PBC688和高感CMV辣椒材料C. annuum cv. G29,以其幼苗的子叶、下胚轴作为外植体,研究了不同激素组合对辣椒组织培养再生的影响。结果显示:最佳的芽分化培养基为MS+5.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L IAA+5000.0mg/L DJ+10.0 mg/L AgNO_3;促进再生芽伸长的最优培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L IAA+2.0 mg/L GA_3+5000.0 mg/L DJ+10. 0 mg/L AgNO_3; 3个基因型子叶的平均芽分化率(5.9%)高于下胚轴的(2.4%);CM334的再生能力最强,以子叶和下胚轴作为外植体时,其芽分化率分别为10.74%和4.85%,芽伸长率分别为54.54%和53.33%,分别获得可移栽的生根再生植株30株和8株; PBC688和G29的再生能力较差,只获得少量的再生植株。     

白玉龙火龙果不同外植体的离体培养

【目的】研究白玉龙火龙果子叶、下胚轴及子叶节的不定芽诱导及茎段增殖技术,为白玉龙火龙果的品种改良及快繁育苗提供技术支持。【方法】以白玉龙火龙果种子培育的无菌苗为材料,采用正交试验设计分析不同培养基、不同植物生长调节剂与浓度及其组合对白玉龙火龙果子叶、下胚轴及子叶节不定芽诱导及茎段增殖与生根的影响。【结果】白玉龙火龙果子叶、下胚轴及子叶节均能直接诱导不定芽发生。其中,16个正交处理均能诱导子叶节不定芽发生,其最优诱导培养基为WPM+0.50 mg/L TDZ+0.50 mg/L CPPU+0.05 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA,诱导率为87.1%~100.0%;子叶仅1个处理未能诱导出不定芽,最高诱导率为36.0%,其最优诱导培养基为1/2MS+0.50 mg/L TDZ+0.05mg/L CPPU+2.00 mg/L 6-BA+0 mg/L NAA;下胚轴仅5个处理能诱导出不定芽,最高诱导率仅3.0%,其最优诱导培养基为1/2MS+0.05 mg/L TDZ+2.00 mg/L CPPU+1.00 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA。茎段去顶处理有利于腋芽的诱导萌发,去顶处理的最大增殖系数为4.2,不去顶处理的最大增殖系数为3.1,其最优增殖培养基为WPM+0.50 mg/L 6-BA+0.05 mg/L IBA。NAA处理能促进茎段生根,适宜的生根培养基为1/2MS+0.1~0.5 mg/L NAA,生根率达100.0%。【结论】不同基本培养基、植物生长调节剂与浓度及其组合均能诱导白玉龙火龙果子叶、下胚轴和子叶节不定芽发生及茎段芽增殖和不定根产生。其中,不定芽诱导以子叶节最易诱导发生,其次为子叶,下胚轴较难;茎段芽增殖和不定根诱导均较容易。     

光皮桦叶片再生体系的建立

【目的】建立光皮桦叶片高效再生体系,为光皮桦的良种培育及遗传转化研究提供依据。【方法】以光皮桦无菌叶片为外殖体,分别用含0.6 mg/L TDZ 的MS、WPM和1/2MS培养基进行不定芽诱导分化,筛选最佳基本培养基;向筛选出的最佳基本培养基中添加0.05 mg/L NAA及不同质量浓度（0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2 mg/L）TDZ的激素组合组成不定芽分化培养基,用于诱导不定芽分化,筛选最佳不定芽诱导分化培养基;以1/2MS培养基为基本培养基,分别附加0,0.05,0.1,0.5,1.0,2.0 mg/L的IBA或0.5,1.0,2.0,3.0 mg/L的NAA组成生根培养基,用于再生苗生根,筛选最佳生根培养基,建立光皮桦叶片再生体系。【结果】光皮桦无菌叶片诱导不定芽的最适基本培养基为MS培养基,其诱导的不定芽最多,且芽生长状况良好,颜色深绿;最适不定芽诱导分化培养基为：MS+TDZ 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂5.5 g/L,在该培养基上叶片丛生芽诱导率可达到80.00%,平均不定芽数高达12.00个,且芽生长健壮,呈深绿色;最适再生苗生根培养基为：1/2MS+IBA 1.0 mg/L+蔗糖20 g/L+琼脂5.5 g/L,在该培养基上再生苗的生根率达100%,平均根数为14.5个,平均根长为11 cm,根较粗壮,基部无愈伤组织,且产生了很多毛细根。【结论】建立了光皮桦无菌苗叶片的高效再生体系。     

TDZ对牛皮杜鹃叶片分化及继代增殖的影响

以牛皮杜鹃组培苗为试材,研究以改良MS为基本培养基,不同质量浓度TDZ、ZT与IBA组合,对叶片愈伤组织诱导及分化、继代增殖的影响。结果表明：TDZ对组培苗叶片愈伤组织诱导及分化的效果显著优于ZT,但在继代培养时增殖效果不如ZT;TDZ 0.3 mg/L+IBA 0.5 mg/L处理的叶片分化效果最好,分化率高达97.44%;不定芽在改良MS+ZT 0.2 mg/L+IBA 0.5 mg/L中继代培养后,每瓶分化的不定芽数最多（30.2个）。     

酿酒葡萄“赤霞珠”叶片和叶柄离体再生系统建立的研究

以赤霞珠叶片、叶柄为材料,研究了细胞分裂素(TDZ)、不同基本培养基、叶柄砧有无对其不定芽再生的影响。结果表明:TDZ对赤霞珠离体叶片、叶柄不定芽再生有诱导作用,对叶片、叶柄的最高诱导率分别为18.06%和28.57%;叶片再生的最佳培养基为MS+TDZ4.0mg/L,叶柄再生的最佳培养基为MS+TDZ4.0mg/L+NAA0.01mg/L,叶片不定芽生根培养基为1/2MS+IBA1.0mg/L+20g/L蔗糖。     

山杏下胚轴再生植株的研究

研究了影响山杏下胚轴再生的有关因素,首次获得了山杏下胚轴再生植株。结果表明,经15d的暗培养,山杏下胚轴切段在附加TDZ2mg/L+NAA0.5mg/L的改良MS培养基(1/2NH4NO3)上,愈伤组织诱导率(100%)和再生频率(37.5%)均最高,细胞分裂素用TDZ效果优于6-BA,再生获得的不定芽在改良MS+IBA0.2mg/L培养基上生根率为75.8%。     

基于AFLP标记的河八王种质资源遗传多样性分析及分子身份证构建

以广西地区的15份河八王无性系为材料,采用AFLP标记结合毛细管电泳进行分析,计算多态性引物的总扩增条带数、多态性条带数和多态性条带比率。进行遗传相似系数和UPGMA聚类分析,并建立分子身份证。25对AFLP引物组合在15份河八王种质资源中共扩增出2 208个位点,其中多态性位点1 914个,多态性比率(PPB)为87.11%。UPGMA聚类分析表明,供试的15份河八王种质资源其遗传相似系数变化范围在0.656~0.878,在相似系数为0.706时,可划分为3个类群。结合特征带和不同引物组合方法可有效建立河八王种质资源特异分子身份证,置信概率达到99.99%。所供试河八王种质具有较丰富的遗传多样性水平,基于3对AFLP引物组合104条谱带构建的15份河八王种质分子身份证具有唯一性,AFLP标记是在分子水平上鉴定河八王种质的有效方法。     

南方型紫花苜蓿Millennium组织培养及其再生

以南方型紫花苜蓿Millennium种子发育5~7 d无菌苗的子叶、下胚轴为外植体,对紫花苜蓿愈伤组织诱导和植株再生进行了研究。结果表明,在愈伤组织诱导中,下胚轴为最佳外植体材料,出愈率随着2,4-D质量浓度的增加呈明显的升高趋势,最佳愈伤组织诱导培养基为2,4-D 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L,诱导率达到100%。紫花苜蓿诱导最佳愈伤组织的分化培养基为MS+KT 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L,下胚轴愈伤组织分化率达到58%,子叶愈伤组织分化率达到40%。将苗切下转接到1/2 MS+20 g/L蔗糖质量浓度时,培养6 d即可诱导生根,诱导生根率达到100%,完成植株再生仅需60~70 d。成功地建立了南方型Millenni-um紫花苜蓿子叶和下胚轴的离体培养再生途径,并获得了再生植株。     

葡萄砧木“1202”离体再生体系的建立

以葡萄砧木"1202"为试材,研究了不同外植体类型、不同植物生长调节剂浓度及配比、不同外植体放置方式等对其不定芽再生频率的影响。结果表明:叶片的再生效果最好,不定芽率达68.78%;葡萄砧木"1202"叶片不定芽再生的最适培养基为MS+TDZ 1.0 mg/L+IBA 0.01 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂5.5 g/L,pH 5.8;叶片最佳放置方式为远轴面接触培养基。将再生不定芽置于3/4 MS+IBA 0.35 mg/L培养基上诱导生根,生根率达80%。再生植株培养35～50 d后移栽炼苗,成活率可达90%。