罗汉果三倍体雌株与二倍体雄株遗传背景的 RAPD 分析

为了给无籽罗汉果优良品种的选育提供分子生物学依据，利用RAPD标记对28份罗汉果三倍体雌株与二倍体雄株进行遗传背景分析。结果表明，罗汉果三倍体雌株和二倍体雄株的遗传背景存在一定的丰富性，但大多遗传相似性系数较大，遗传距离较近。总的来说，罗汉果三倍体雌株和二倍体雄株遗传背景的复杂性较低，应该尽快采取相应措施，进行种质创新，丰富无籽罗汉果亲本的遗传背景。     

三倍体雄性虹鳟(Oncorhynchus mykiss)生殖发育研究

以8~35月龄的三倍体雄性虹鳟为试材,同期二倍体为对照,研究了性腺发育和精子发生过程中组织结构、超微结构以及几种生殖激素含量的变化,以了解染色体多倍化对三倍体虹鳟精巢发育和精子发生的影响,探讨多倍体虹鳟的生殖机制。结果表明,三倍体虹鳟精巢能够发育成熟,但较二倍体发育迟缓,成熟精子量少,精子结构正常、大小不一;精子发生经历了精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子5个阶段,各级生精细胞结构与二倍体相同,但体积较大,发生过程中有大量坏死细胞存在,精子变态期尤为明显;败育的生殖细胞被支持细胞所吞噬;生殖激素仅呈现一个生殖周期变化,与二倍体变化趋势相同但滞后。三倍体雄性虹鳟的生精细胞能够完成减数分裂,滞育于精子细胞阶段,由于非同源染色体不规则的联会,产生的精子绝大多数因含有多余的染色体片段成为非整倍体而败育,只有少数生精细胞能够正常发育成精子。     

大白菜2n配子发生的细胞学机制研究

研究了大白菜(BP058株系等)2n配子发生的细胞学机制。结果表明,由于中期II纺锤体定位方向变异,导致二极体和三极体形成,最终形成2n雄配子。其中三极体为2n雄配子形成的主要途径,比率高达86·5%。2n雌配子遗传传递率65·18%,远高于2n雄配子的传递率(23·29%)。二、四倍体杂交2n卵(2x=20)×n花粉(2x=20),其杂交胚乳和杂种胚能正常发育;而二倍体n配子与四倍体n配子杂交,虽能受精形成三倍体杂种合子,但授粉后15d胚乳完全解体,致使胚乳败育不能形成种子。     

东方百合2n雌配子诱导及三倍体多样性研究

 以东方百合为材料，在株高为20～30cm时，用0.1％～0.4%的秋水仙素处理二倍体品种的花蕾成功获得了2n配子。然后将2n雌配子与1n雄配子杂交形成了三倍体胚，再通过胚拯救技术获得了三倍体植株。细胞学鉴定表明三倍体气孔比二倍体大，但比四倍体小。三倍体染色体数为36（2n＝2x＝36），二倍体染色体数为24（2n＝2x＝24）。而且，2n配子杂种后代存在染色体数目的多样性。此外，还对百合三倍体种球的繁育也进行了探索。     

团头鲂倍间杂交三倍体性腺发育的多态性观察初报

于5月份团头鲂正常繁殖期前夕,以初次性成熟(二足龄)二倍体团头鲂为对照样本, 同龄同池培育的同源倍间正交三倍体、同源倍间反交三倍体、异源倍间杂交三倍体为实验样本,分别取性腺,石蜡切片,镜检发育状况.发现团头鲂三倍体的性腺可归纳为三种情况:(1)性腺发育程度很低,表现为雄性二足龄三倍体的性腺外观细小,生殖细胞处于精原细胞水平.(2)性腺发育出现异常,表现在性腺外观畸形,有卵巢单侧不发育,有精巢大部分为细线,局部增粗等情况,还有发现外观无异常,但切片观察为雌雄嵌合体.(3)性腺发育无异常,表现为性腺外观没有异常,切片观察也能观察到各期典型的生殖细胞.     

团头鲂倍间杂交三倍体性腺发育的多态性观察初报

于5月份团头鲂正常繁殖期前夕,以初次性成熟(二足龄)二倍体团头鲂为对照样本, 同龄同池培育的同源倍间正交三倍体、同源倍间反交三倍体、异源倍间杂交三倍体为实验样本,分别取性腺,石蜡切片,镜检发育状况.发现团头鲂三倍体的性腺可归纳为三种情况:(1)性腺发育程度很低,表现为雄性二足龄三倍体的性腺外观细小,生殖细胞处于精原细胞水平.(2)性腺发育出现异常,表现在性腺外观畸形,有卵巢单侧不发育,有精巢大部分为细线,局部增粗等情况,还有发现外观无异常,但切片观察为雌雄嵌合体.(3)性腺发育无异常,表现为性腺外观没有异常,切片观察也能观察到各期典型的生殖细胞.     

转基因鲤性腺结构及繁殖性能的研究

采用解剖及显微观察对大麻哈鱼生长激素基因鲤(以下简称转基因鲤)的性腺发育和繁殖性能进行了研究.结果表明:转基因鲤精巢组织结构属壶腹型,其壁由2层膜组成,外为腹膜,内为白膜,精小叶不规则排列,小叶由许多精小囊组成,精小囊是精子发生增殖、生长、成熟的地方,精子成熟后由精小囊进入小叶腔内.卵巢1对,位于腹腔两侧,外为腹膜,内为被膜,卵子成熟后由输卵管从泄殖孔排出体外.精卵生殖细胞发育程序相似,可分为6个时期.其中雌性个体成熟年龄为1周年;雄性个体成熟比雌性个体成熟早.成熟卵巢的成熟系数为0.49 ～0.84,成熟精巢的成熟系数为1.47 ～4.87.繁殖期性腺发育观察:7月时精巢中精原细胞和精母细胞所占比例较高,卵巢中初级卵母细胞所占比例较高;8月时精巢中精原细胞数量开始减少,精母细胞开始增加,并有少量精子细胞和精子出现,卵巢中卵母细胞数量有所增加,并出现一些小的液泡和卵黄物质;9月时精巢中大多都为精子细胞和精子,卵巢中大部分卵母细胞进入卵黄充塞期.通过对繁殖期3个月雌、雄个体性腺发育与普通鲤作t检验,雌、雄个体性腺发育程度有所不同但差异不显著(P＞0.05).该研究证明转基因鲤的性腺发育是正常的,雌、雄个体性个体都能达到性成熟.     

饥饿和再投喂对中间球海胆性腺发育的影响

对中间球海胆Strongylocentrotus intermedius进行了不同时间的饥饿和再投喂试验。采用各组“饥饿时间 投喂时间”相同的试验设计,在30 d内,试验组(S3、S6、S9、S12组)海胆分别饥饿3、6、9和12d后再连续饱食投喂直至试验结束,同时设对照组S0。结果表明:试验结束时S3组海胆性腺重、性腺指数均接近对照组,其余各组较对照组低;特殊生长率在再投喂的第2 d或第4 d出现最大值。性腺组织学观察的结果表明:对照组海胆性腺为滤泡型,由生殖细胞和营养细胞构成,发育至生长期;随着饥饿时间的延长,雄海胆性腺中成熟精子的数量减少,雌海胆性腺中初级卵母细胞发育迟缓,而雌、雄海胆性腺中营养细胞的数量无明显变化;再投喂后,性腺有不同程度的发育。     

自然四倍体泥鳅雄核发育二倍体染色体组构成研究

为探究鱼类雄核发育新途径及自然四倍体泥鳅所产生的配子染色体组构成,采用自然四倍体泥鳅(4n=100)为父本、二倍体泥鳅(2n=50)为母本进行杂交,受精后5 min将受精卵放入3℃水中处理60 min诱导雄核发育二倍体泥鳅,并对其后代的血红细胞核体积、染色体核型、Ag-NORs带型及荧光原位杂交(FISH)信号等进行了研究。结果表明:对照组杂交三倍体泥鳅血红细胞核体积为(38.29±3.14)μm³,处理组雄核发育二倍体泥鳅血红细胞核体积为(27.92±3.58)μm³,二者血红细胞核体积之比为1.37∶1;杂交三倍体泥鳅胚胎染色体数目3n=75,核型公式为15m+6sm+54t,NF=96,雄核发育二倍体泥鳅胚胎染色体数目2n=50,核型公式为10m+4sm+36t,NF=64;杂交三倍体泥鳅胚胎染色体中,在3个染色体短臂的端部检测到3个FISH杂交信号,雄核发育二倍体泥鳅胚胎染色体中,在2个染色体短臂的端部检测到2个FISH杂交信号;杂交三倍体泥鳅染色体和间期核中,呈现出Ag-NORs数目为1~3个,雄核发育二倍体泥鳅胚胎染色体和间期核中,呈现出Ag-NORs数目为1~2个。研究表明,雄核发育二倍体泥鳅的染色体组构成为2套染色体组,表明自然四倍体雄性泥鳅能产生二倍体(2n)配子,该结果为自然四倍体雄性泥鳅是具有4套染色体组的遗传四倍体提供了重要的遗传学证据。     

柿属新种德阳柿花芽分化的形态学观察

【目的明确柿属新种德阳柿各花器官原基出现的大致时间，以及花性别分化早期的形态学差异。【方法以10年生德阳柿雌株和雄株为材料，采集现蕾前的混合芽以及现蕾后的雌花和雄花，拍照记录其外部形态；同时利用扫描电镜和常规石蜡切片法，观察雌花和雄花各花器官原基以及性细胞的发育过程。【结果以休眠期为时间节点，德阳柿雌、雄花芽的发育过程可分为花芽分化前期和花芽分化后期。分化前期为6-7月，该阶段雌、雄花芽的发育进程基本一致，首先在叶原基基部出现花分生组织，然后依次形成苞叶原基、萼片原基和花瓣原基；分化后期为次年3-5月，雌、雄花芽解除休眠后，再依次分化出雄蕊原基和心皮原基。雄花芽解除休眠的时间早于雌花芽，雄花形成雄蕊原基和心皮原基的时间较雌花早17 d。随后，雄花和雌花进入性细胞发育时期。雄花雄蕊内部会产生初生造孢细胞团，造孢细胞继续分裂发育直到形成成熟花粉粒；雌花心皮原基基部形成子房，内部产生胚珠原基，随后胚珠分化发育，最终产生成熟胚囊；雌、雄花性细胞发育成熟的时间基本一致。【结论】德阳柿花芽分化跨2个年度进行，在萼片原基分化期和雄蕊、心皮原基分化期，雌花芽和雄花芽表现出明显的形态学差异。     

三倍体毛白杨有性生殖能力的研究

该文通过对 7个毛白杨三倍体和 3个二倍体无性系的花序量、花粉量及生命力、种子品质的比较研究和生殖器官形态的观察 ,发现三倍体无性系的花序量明显比二倍体的少 ;雄性无性系每个花序的花粉量及其发芽率在三倍体和二倍体之间差异不大 ;而三倍体雌性无性系的结实能力、果实形态大小和种子品质明显较二倍体的差 .结果表明三倍体毛白杨的有性生殖能力较低 ,因此 ,种植三倍体毛白杨将会减少毛白杨早春散粉和飞絮对环境的污染 .     

太平洋牡蛎三倍体诱导及苗种培育技术研究

本文报道了采用细胞松弛素B（CB）诱导太平洋牡蛎三倍体的研究结果。研究结果表明，CB浓度为0．25mg／L，处理时间约20分钟，诱导三倍体的倍化率可达75％，至D型幼虫的孵化率为40－50％。1992－1996年其培育出三倍体贝苗1846．4万枚。     

太平洋牡蛎三倍体诱导及苗种培育技术研究

本文报道了采用细胞松弛素B（CB）诱导太平洋牡蛎三倍体的研究结果。研究结果表明，CB浓度为0．25mg／L，处理时间约20分钟，诱导三倍体的倍化率可达75％，至D型幼虫的孵化率为40－50％。1992－1996年其培育出三倍体贝苗1846．4万枚。     

秋水仙碱诱导白杨三倍体新途径的发现

以银腺杨等为母本 ,毛白杨为父本 ,授粉后一定时间采用秋水仙碱溶液处理花序 ,共获得 40 2粒种子 ,成苗10 7株 ,从中检出 2 1株银腺杨×毛白杨三倍体 .证明授粉后 2 4～ 3 6h是施加秋水仙碱诱导白杨三倍体的有效时期 ,三倍体得率最高达 57 1% .通过这一途径获得的白杨三倍体同样具有十分明显的生长优势 ,2年生实生苗的平均苗高、地径超出全部后代群体总平均值的 2 9%和 65% ,其中以BY3 2 0等表现最佳 ,分别超出群体平均数的 55%和119% .该研究为高效诱导白杨三倍体找到了一条新的途径     

高温诱导大孢子染色体加倍选育毛白杨杂种三倍体

目的鉴于杨树三倍体具有突出的营养生长优势，针对毛白杨良种选育中母本效应难以充分利用问题，选择毛白杨育性好的雌株诱导大孢子染色体加倍选育白杨杂种三倍体，为毛白杨三倍体育种提供技术支撑。方法本研究以毛白杨无性系MC1和MC2为母本，银腺杨YX1为父本。根据白杨大小孢子发生发育存在相关性的原理，以雄株小孢子发育进程为即时判别大孢子发生进程的参照，当小孢子发育至单核早期、单核靠边期和双核期时，分别施加38、40和42 ℃高温持续处理雌花序4 h。结果两个杂交组合的处理组共得到189株毛白杨杂种三倍体，其中MC1×YX1组合中共获得70株杂种三倍体，平均诱导率为56.45%；MC2×YX1组合中共获得119株杂种三倍体，平均诱导率为47.04%，对照组未获得杂种三倍体。当小孢子发育至单核靠边期，对应大孢子母细胞减数分裂至粗线期至中期Ⅰ，此时施加38和40 ℃高温处理4 h是毛白杨大孢子染色体加倍的最佳处理时期。两个杂交组合的杂种三倍体在平均苗高和地径生长方面均优于二倍体，但组合间存在一定差异，表明三倍体育种同样需要重视亲本选配。结论研究进一步证明高温诱导大孢子染色体加倍是一种高效获得毛白杨杂种三倍体的技术途径，相关技术进步对于推进毛白杨良种选育进程具有重要的意义。      

授粉后施加秋水仙碱处理诱导青杨派异源三倍体

从中国北方地区拓展杨树品种资源考虑,以哲引3号杨为母本,小青杨和北京杨为父本,对授粉后24～96 h的雌花序施加0.3%～0.5%的秋水仙碱溶液处理,获得了26株青杨杂种三倍体.其中尤以授粉后54～66 h时施加秋水仙碱处理的三倍体诱导效果最好,三倍体得率最高,达66.7%. 与二倍体后代群体相比,青杨杂种三倍体具有一定的生长优势,其中哲引3号杨×北京杨三倍体2年生实生苗的地径和苗高平均值分别超出二倍体20%和5%;最优单株的地径和苗高分别达4.42 cm和2.77 m,超出二倍体平均值144%和43%. 青杨派树种的三倍体诱导实践进一步证明,雌花序授粉后施加秋水仙碱处理是一种高效的三倍体诱导方法.      

苹果二倍体和三倍体的同工酶电泳分析

对苹果二倍体和三倍体两个酶同工酶电泳分析的结果发现,与二倍体相比,三部体苹果酸氢酶（ＭＤＨ）电泳谱带ＭＤＨ－１染色加深,表现了明显的剂量效应。谷草转氨产（ＧＯＴ）电泳谱带ＧＯＴ－１谱带数目明显增加,又说明三们体的遗传杂和性增加,研究表明。经有性杂交产生的三倍体不仅存在基因剂量的特征,同时也包含基因重组效应。     

青黑杨杂种三倍体花粉母细胞减数分裂染色体行为及其花粉变异研究

目的本研究通过分析青黑杨杂种三倍体的花粉母细胞减数分裂特征和配子变异规律，为进一步利用三倍体种质作为中介材料进行杨树染色体工程育种奠定基础。方法本研究以雌配子染色体加倍来源的‘哲引3号杨’ × ‘北京杨’杂种三倍体WT-21及杂种二倍体WD-2雄株为材料，基于醋酸洋红染色压片观察，比较分析了两者花粉母细胞减数分裂染色体行为及花粉形态变异。结果（1）无论是三倍体杂种WT-21还是二倍体杂种WD-2，其花粉母细胞减数分裂染色体行为均非常丰富，存在高频率的染色体提前分离、落后染色体、微核等异常现象，反映了亲本基因组间较强的异质性。（2）WT-21和WD-2花粉母细胞减数第二次分裂过程均存在平行纺锤体、融合纺锤体、三极纺锤体等异常定向，而且在WT-21中还发生胞质提前分裂，共同导致减数分裂产物中二分体、三分体等的产生。（3）三倍体WT-21的花粉空瘪率达44.55%，高于二倍体WD-2；WT-21饱满花粉的直径显著大于WD-2，从花粉直径分布可推测出WT-21能产生少量未减数花粉；WT-21的花粉生活力为（1.08 ± 0.44）%，显著低于二倍体WD-2（28.67% ± 2.04%）。结论由于倍性效应和杂合性的双重影响，青黑杨杂种三倍体的花粉母细胞减数分裂存在复杂的染色体行为，并对配子发育造成影响；利用三倍体的花粉进行授粉，可能获得非整倍体和四倍体后代，为杨树染色体操作奠定基础。