转Hu-IFN-a基因草鱼的雌核发育及生理转雄性研究

为快速获得转Hu-IFN-a基因抗病草鱼纯系,从转Hu-IFN-a基因草鱼中,挑选9尾高表达水平的雌鱼作为亲本,经人工雌核发育,得到子一代水花89尾,与普通草鱼的雌核发育结果相比,两者孵化率差异不显著,但畸形率前者比后者高.从雌核发育子一代鱼苗中随机选取45尾鱼苗投喂含甲基睾丸素的饲料,进行生理转雄性试验,获得生理转雄性鱼苗21尾.     

转Hu-IFN-α基因草鱼的遗传研究

为了分析外源基因在转基因鱼F1中的遗传特征和规律，采用PCR检测技术对Hu-IFN-α基因在转基因草鱼及其杂交F1，雌核发育F1中的遗传表达情况进行检测．检测结果为：对1120尾转基因草鱼的PCR阳性检测，检出率为60％；258尾转基因草鱼杂交F1，阳性检测率为53．8％；36尾转基因草鱼雌核发育F1，阳性率为91．7％，说明Hu-IFN-α基因成功导入草鱼中，并能遗传给F1．     

转Hu-IFN-α基因草鱼F1代人α-干扰素表达水平的研究

为探明人α-干扰素在转Hu-IFN-α基因草鱼F1代中的表达水平,以转Hu-IFN-α基因草鱼F1群体为材料,随机抽取332尾鱼分离其血清后,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测人α-干扰素基因在转基因草鱼F1代中的表达情况.结果表明:转人α-干扰素基因草鱼F1代表达率为52.1%,表达水平偏低,其表达水平受外界因素影响.     

转hu-IFN-α基因草鱼血液生理生化指标的分析

采用先进的人体血液测定仪，测定了转hu-IFN-α基因草鱼和普通草鱼血液的各项生理生化指标，统计分析结果表明，转h-IFN-α基因草鱼与普通草鱼血指标值（红细胞数，白细胞数，血红蛋白，红细胞压积）之间没有明显差异，但血浆生化指标中白蛋白，白蛋白／球蛋白比值转基因鱼高于普通草鱼，在转基因组内，血常规的歧值较高，说明转基因在个体中可能存在着不同的表达水平。     

人α-干扰素基因在转基因草鱼中的表达

为提高草鱼对出血病的抗性，采用显微注射法，将克隆在鲤β－肌动蛋白基因启动子下游的人α－干扰素基因转移到草鱼受精卵中，获得了大量转基因个体。抽取转基因鱼血浆，以酶联免疫吸附法检测了转基因草鱼中人α－干扰素基因的表达情况。从672尾转基因草鱼中检测出158尾有α－干扰素的表达，阳性率为23．51％，其中表达水平最高个体血浆中α－干扰素质量浓度为1450pg/mL。基因表达量随季节和个体发育时期有所变化。     

转人-α-干扰素基因草鱼饲喂大鼠的安全性研究

为研究转人-α-干扰素基因草鱼的食用安全性,以转人-α-干扰素基因草鱼肉糜饲喂大鼠，在30d内对试验鼠进行了临床观察，试验结束时，对试验鼠进行了血液学检测、解剖学观察和组织学检查，结果表明，饲喂转人－α干扰素基因草鱼肉糜的大鼠临床表现正常，血液学指标，解剖学形态和重要器官功能组织学图像与对照组动物没有显著差别。     

人工雌核发育草鱼性腺早期发育状况的初步观察

观察了人工雌核发育草鱼性腺的早期发育情况。所检查的草鱼都是雌鱼,大部分性腺发育正常,少数性腺数发育畸形或发育迟缓。     

转Hu-IFN-α基因草鱼的分子验证及抗性研究

采用显微注射法将人α-干扰素抗病基因转移到草鱼受精卵中,获得转基因群体,通过PCR及Southern杂交对转基因草鱼进行分子水平的检测,以进一步验证外源人α-干扰素是否整合入草鱼基因组.结果表明,外源人α-干扰素抗病基因已整合人草鱼基因组中.采用腹腔注射法,对转基因鱼进行草鱼出血病病毒接种攻毒试验,结果显示转基因草鱼比对照组的抗病毒能力有显著提高.     

转Hu—IFN—α仅基因草鱼的分子验证及抗性研究

采用显微注射法将人α-干扰素抗病基因转移到草鱼受精卵中，获得转基因群体，通过PCR及Southern杂交对转基因草鱼进行分子水平的检测，以进一步验证外源人α-干扰素是否整合入草鱼基因组。结果表明，外源人α-干扰素抗病基因已整合入草鱼基因组中，采用腹腔注射法，对转基因鱼进行草鱼出血病病毒接种攻毒试验，结果显示转基因草鱼比对照组的抗病毒能力有显著提高。     

草鱼母源免疫的初步研究

用酚灭活的柱状嗜纤维菌对草鱼雌亲鱼每月注射１次，连续注射７次。通过检测草鱼雌亲鱼血液中吞噬细胞的吞噬活性、血清中凝集抗体效价、受精卵和鱼苗中凝集抗体效价，首先证明了草鱼雌亲鱼对免疫原能产生较强的免疫应答，其凝集抗体可以通过受精卵而传递给仔代，而且这种凝集抗体能在孵化后的鱼苗体内持续存在２７ｄ以上。然而，用活菌对１７４日龄的鱼种攻毒的试验结果表明，免疫组与对照不存在显著差异。