海带和条斑紫菜凝集素提取液对刺参体壁主要免疫酶活性的影响

为探讨凝集素提取液对刺参Apostichopus japonicus免疫的影响,将刺参基础饲料中分别添加质量分数为0·64%、1·28%、2·56%的海带凝集素提取液,或质量分数为1·88%、3·76%、7·52%的条斑紫菜凝集素提取液,分别投喂6个试验组刺参(体质量为3·50 g ±1·95 g),以基础饲料饲养组为对照,分别于投喂凝集素提取液后第4、8、12、17天时,检测各组刺参体壁中过氧化氢酶( CAT)、溶菌酶( LSZ)、碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)的活性。结果表明：投喂海带凝集素提取液后,各浓度组刺参CAT、 LSZ活性在第8、12、17天时均有显著或极显著提高(P<0·05或P<0·01),0·64%组ACP活性在第8、17天时有显著提高(P<0·05);投喂条斑紫菜凝集素提取液后,各浓度组刺参CAT活性在第8、12、17天时有显著或极显著提高( P<0·05或P<0·01),7·52%组LSZ活性在第8天时有显著提高( P<0·05), AKP活性在第4、17天时有极显著提高( P<0·01), ACP活性在第12天时7·52%组有极显著提高( P<0·01),第17天时各浓度组均有显著或极显著提高(P<0·05或P<0·01)。研究表明,海带和条斑紫菜凝集素提取液均能提高剌参体壁中CAT、 LSZ、 AKP、 ACP的活性,显著增强剌参非特异性免疫水平,将其作为刺参免疫增强剂具有广阔的应用前景。     

壳寡糖对三疣梭子蟹免疫力的影响

为研究壳寡糖对三疣梭子蟹免疫功能的影响,设置了含壳寡糖0.0、0.5、1.0、1.5和2.0 g/kg（分别为T0、T1、T2、T3和T4组）的5组试验饲料饲喂三疣梭子蟹,分别在第10 d、20 d和30 d取血清进行酚氧化酶（PO）、酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、溶菌酶（LSZ）和过氧化物酶（POD）活性的测定,试验结束时测定血细胞的密度。结果显示,在基础饲料中添加适量的壳寡糖可以显著性提高ACP、T-SOD、LSZ、POD活力（P〈0.05）,对PO和AKP活力促进效果不显著（P〉0.05）。壳寡糖可以显著提高三疣梭子蟹血细胞密度（P〈0.05）,对3种血细胞所占比例有一定的影响（P〉0.05）。综合考虑,T2、T3组对三疣梭子蟹免疫促进效果较好,建议基础饲料中壳寡糖添加量为1.0～1.5 g/kg。     

大黄对仿刺参体腔液中非特异性免疫的影响

[目的]研究大黄对仿刺参非特异性免疫的影响。[方法]通过在饵料中添加2%、5%和10%不同比例的大黄粉来投喂仿刺参,分析其体腔液中溶菌酶(LSZ)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)及酸性磷酸酶(ACP)的酶活变化情况。[结果]LSZ活性在第21天时,3个剂量组分别较空白组提高了92.86%、96.43%和90.10%,酶活达到最高;SOD活性在第7天时,3个剂量组分别较空白组提高了4.36%、8.87%和9.28%;AKP活性,2%和5%剂量组均低于空白组,10%剂量组在第21天时达到最高值,其酶活与空白组差异极显著(P0.01);2%和5%剂量组分别在第21、28天时ACP酶活达到最高,但与空白组间的差异不显著(P0.05),10%剂量组在第14天时酶活达到最高,与空白组间的差异极显著(P0.01),大黄对ACP活性的影响与添加剂量不呈正相关。[结论]拌饵投喂不同剂量的大黄对仿刺参体腔液中4种酶的影响不同:10%剂量组提高酶活的时间要早于2%和5%剂量组,因此建议拌饵投喂2%和5%大黄的饲料21 d或10%大黄的饲料14 d,可提高仿刺参的非特异性免疫,但持续投喂时间不宜过长,停止投喂14 d左右各免疫指标可恢复至平常水平。     

不同盐度对脊尾白虾非特异性免疫及抗氧化酶活性的影响

为了研究不同盐度对脊尾白虾免疫水平的影响,实验对5个盐度组脊尾白虾的肝胰腺和肌肉组织中的非特异性免疫及抗氧化酶相关的酶活性进行了比较分析。结果表明,除LSZ酶活外,不同酶活在肝胰腺中的分布均高于肌肉;除肌肉中的LSZ酶活外,不同盐度组间的免疫酶活性有显著差异。ACP、AKP酶活在肝胰腺中分布以26.6盐度组最高,显著高于11.0、16.2、21.4盐度组（P〈0.05）;不同盐度间脊尾白虾肝胰腺中LSZ酶活差异显著（P〈0.05）,以26.6盐度组酶活最高;T-AOC、SOD酶活在肝胰腺中的分布差异显著（P〈0.05）,以31.8盐度组最高,21.4盐度组最低。     

复合益生菌对刺参非特异性免疫和抗病力的影响

[目的]研究复合益生菌粉对刺参非特异性免疫和抗病力的影响。[方法]选择体重相近的450头刺参并随机分为5组,分别在其基础日粮中添加含有0(A组)、0.2%(B组)、0.4%(C组)、0.6%(D组)、0.8%(E组)的复合益生菌粉(106CFU/g),进行饲喂试验,研究复合益生菌粉对刺参非特异性免疫和抗病力的影响。[结果]复合益生菌对刺参碱性磷酸酶(AKP)和超氧化物歧化酶(SOD)活性无显著影响;与其他试验组和对照组相比,0.6%的复合益生菌提高了刺参的酸性磷酸酶(ACP)活性,0.4%、0.6%和0.8%的复合益生菌显著提高了刺参过氧化氢酶(CAT)活性(P0.05),而0.6%和0.8%的复合益生菌则显著提高了刺参溶菌酶(LSZ)活性(P0.05)。在攻毒6 d和攻毒10 d后,各试验组的AKP、LSZ、SOD活性均与对照组没有显著差异。攻毒6 d后,E组ACP活性显著低于对照组(P0.05)。攻毒10 d后,C、D、E组ACP活性均极显著低于对照组(P0.01)。[结论]在基础饲料中添加复合益生菌能增强刺参的非特性免疫能力,其添加量以0.6%为。     

盐度胁迫对刺参非特异性免疫酶的影响

盐胁迫后刺参的行为表现及免疫酶活性会发生相应变化,以达到适应盐度变化的目的。设定5个盐度梯度(18、23、33、36和40),分析盐度胁迫后刺参行为变化及不同响应时间下体腔液中碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）、溶菌酶（LSZ）、超氧化物歧化酶（SOD）的活力变化。实验结果发现盐度增加和降低都使刺参的活动受到影响,低盐度胁迫比高盐度胁迫对刺参的影响大。碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性总体呈现先降低后升高,随着时间的延长逐渐恢复适应的趋势。盐度23溶菌酶活力显著高于盐度32的对照组;盐度为36时,溶菌酶活力在第1天最高,随后降低,维持2 d后,酶活力又开始升高,并高于盐度32的对照组水平;盐度为18、40时,酶活力显著低于对照组,并一直维持在较低水平。低盐18、23胁迫时,超氧化物歧化酶SOD酶活力明显低于对照组,且最低点均出现在第8 d。高盐36、40胁迫时,酶活力明显高于对照组,最高点分别出现在第5 d和第8 d。研究结果为刺参机体在盐度胁迫下的调节适应机制研究工作奠定一定的基础。     

术前饥饿处理对马氏珠母贝血淋巴免疫机能的影响

在室内养殖条件下研究了术前限食处理对马氏珠母贝血淋巴细胞密度、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、溶菌酶(LSZ)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)活性的影响。实验设置每天投喂一次和两天投喂一次两个处理组,每天投喂两次为对照组,分别在实验开始和第1、2、3和4周取样检测血淋巴免疫功能。结果显示:限食1周后,马氏珠母贝血细胞密度、SOD、CAT、LSZ、ACP和AKP等酶活性均随限食程度的增加呈下降趋势,2个限食处理组的免疫参数较对照组明显下降,并表现出显著性差异(P0.05),两天投喂一次处理组的各项免疫机能均显著低于对照组,且这种趋势一直延续至第4周。据此推断,限食可以显著降低插核手术贝的生理机能和免疫活性,为马氏珠母贝育珠术前处理提供理论依据。     

5种微生态制剂对刺参幼参的生态安全性

研究了5种微生态制剂对刺参Apostichopus japonicus幼参的生态安全性,包括耐受性、生长免疫和对养殖水体的调控。结果表明：幼参对5种微生态制剂耐受性的顺序为试剂五〉试剂一〉试剂四〉试剂三〉试剂二,其中幼参对试剂五的耐受性最大,幼参对试剂二耐受性远小于其它各组;5种微生态制剂对幼参特定生长率的影响差异不显著,但与对照组差异显著（P〈0.05）,表明微生态制剂能促进刺参的生长,特定生长率为1～2%/d;5种微生态制剂均能提高幼参超氧化物歧化酶（SOD）、溶菌酶（LSZ）及过氧化物酶（POD）的活性,其活性值均与对照组差异显著（除试剂一组0.5 mg/L和试剂三0.5μL/L的POD外）（P〈0.05）。对静水每24 h进行一次监测,结果表明：48 h时,DO〈4 mg/L,NO2--N含量在24 h达到最低,随后逐渐上升;各组的DO值随时间的延长逐步降低;对照组的NO2--N、NH4＋-N含量随时间的延长逐步升高。在充气条件下每隔5 d进行一次监测,结果表明：第20天时,试剂一组和试剂四组的NH4＋-N含量〉0.02 mg/L,显著高于其它组（P〈0.05）,试剂四组和对照组的NO2--N含量显著高于其它组（P〈0.05）;第20天之前,各组NO2--N、NH4＋-N含量（NH4＋-N组15 d除外）的差异均不显著（P〉0.05）。     

乙酰甲喹对刺参幼参非特异性免疫、生长及抗应激能力的影响

选用初始体重为0.6 g左右的幼参,水体中分别添加0(对照组)、0.5、1.0、2.0、4.0和6.0 mg/L的乙酰甲喹。前69天每两天全部换水后,按照用药浓度泼洒药物一次。停药两周后经长途运输,考察其抗应激能力。实验结果表明:前30 d,各组刺参体壁中SOD酶活性都呈现增高趋势,2.0 mg/L组SOD活性达到最高,之后又呈现降低趋势;随着乙酰甲喹浓度的增加,各实验组刺参体壁中AKP和ACP酶活性呈现先增加后降低的趋势,2.0 mg/L和4.0mg/L组刺参酶活性最高;40 d后各实验组刺参体壁酶活性逐渐与对照组持平。所有实验组刺参的末体重、增重率和特定生长率均显著高于对照组(P0.05),4.0 mg/L组刺参末体重、增重率和特定生长率最高,显著高于其他各组(P0.05);4.0 mg/L组成活率为90.6%,显著高于其他各组(P0.05)。高浓度(6.0 mg/L)的乙酰甲喹导致幼参抗应激能力差。综合以上分析,认为刺参保苗期间,乙酰甲喹的适宜添加量为2.0~4.0 mg/L。     

氨氮胁迫对刺参“鲁海1号”非特异性免疫的影响

【目的】研究氨氮胁迫对刺非特异性免疫的影响,为探明刺参新品种对环境中氨氮变动的适应性提供依据。【方法】探究0（氨氮质量浓度低于0.05 mg/L的自然海水）,2,4,6,8和10 mg/L氨氮胁迫下体质量分别为(30.2±0.2) g/头(A 组)、(59.2±0.8) g/头（B组）刺参“鲁海1号”存活、生长及体腔液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)活性的变化。【结果】氨氮胁迫对刺参的存活与生长影响显著,当氨氮质量浓度为10 mg/L时,2组刺参均出现排脏、化皮和死亡个体,A组刺参存活率最低,为87.2%。刺参体质量与特定生长率(SGR)随着氨氮质量浓度的升高呈下降趋势,当氨氮质量浓度为4,6,8和10 mg/L时A、B组刺参SGR均显著低于对照组(P<0.05)。随着胁迫时间的延长,不同氨氮质量浓度下刺参SOD、CAT、ACP和AKP活性总体呈先升高后降低趋势。氨氮胁迫第5天,氨氮质量浓度为2,4 mg/L时部分试验组SOD、CAT活性达到峰值。氨氮胁迫第15天,氨氮质量浓度为8,10 mg/L的试验组SOD、CAT、ACP和AKP酶活性均低于对照组,且多数出现显著差异(P<0.05)。【结论】刺参养殖过程中的水环境氨氮质量浓度应控制在6 mg/L以下,以降低其对刺参造成的不良影响。     

饲料中β-胡萝卜素和虾青素添加量对仿刺参幼参生长及抗氧化能力的影响

在水温11．0～20．0℃、盐度35、pH7．5的实验室条件下,将初始平均体质量为3．89g的仿刺参Apostichopusjaponicus幼参放养在60L的塑料水槽中,投喂添加30、60、90mg／kg β-胡萝卜素和虾青素的饲料,分别记为A、B、C、D、E、F组,以不添加此物质的基础饲料作为对照（G组）,每组设3个重复,饲养80d后测定幼参的生长和几种抗氧化酶的活性。结果表明：摄食添加β-胡萝卜素的饲料时,仿刺参的特定生长率随添加量的增加而升高,A、B、C组分别比对照组提高6．67％、73．33％和100．0％,但仅C组与对照组差异显著（P〈0．05）;摄食添加60mg／kg和90mg／kg虾青素的饲料时,仿刺参的特定生长率比对照组提高113．33％和66．67％,但仅E组与对照组差异显著（P〈0．05）;试验组仿刺参体腔液中的总抗氧化能力（T-AOC）随饲料中β-胡萝卜素和虾青素含量的增加而升高,除A、B组外其余各试验组均显著高于对照组（P〈0．05）,饲料中添加虾青素的各组仿刺参体腔液的平均总抗氧化能力（12．77U／mL）比添加β-胡萝卜素的各组平均值（8．77U／mL）高45．61％,表明虾青素的抗氧化能力高于β-胡萝卜素;C、E、F组仿刺参体腔液中的SOD和CAT活性均显著低于对照组（P〈0．05）,而A、B、D组与对照组差异不显著（P〉0．05）;试验组仿刺参肠道蛋白酶和淀粉酶活力及体壁成分较对照组均无显著差异（P〉0．05）。     

饲料中不同类型的硒对仿刺参幼参生长和免疫指标的影响

在水温为13.0~20.0℃、盐度为31.0~32.0和pH为7.5的条件下,将初始体质量为5.36~5.57 g的仿刺参Apostichopus japonicus幼参放养在塑料水槽中（40 L）,每箱15头,分别投喂在基础饲料中添加0.4 mg/kg硒粉、富硒酵母、蛋氨酸硒和亚硒酸钠的试验饲料,以未添加硒的基础饲料作为对照组,每个试验组设3个重复。60 d的饲养结果表明：摄食添加硒饲料的仿刺参的增重率、体壁的粗蛋白含量和对饲料中粗蛋白的表观消化率均显著高于对照组（P〈0.05）,其中摄食添加蛋氨酸硒一组的仿刺参增重最大,摄食添加富硒酵母的次之;摄食添加硒饲料的仿刺参体腔液中超氧化物岐化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的活性均高于对照组,但差异不显著（P〉0.05）,而摄食添加酵母硒组的仿刺参体腔液中酸性磷酸酶（ACP）的活性显著高于对照组（P〈0.05）。饲料硒能促进仿刺参的生长,可能与提高饲料蛋白质的消化率有关;饲料硒能提高仿刺参的成活,可能与提高体腔中SOD、CAT和ACP的活性有关。试验表明,饲料中的有机硒能促进仿刺参对饲料蛋白质的消化和积累,进而促进其生长的效果优于无机硒。     

异戊二烯对刺参急性毒性及其抗氧化酶和免疫酶活性的影响

为研究有机污染物对海洋生物的毒性影响,选择海洋环境中典型的异戊二烯作为暴露污染物,研究其对体质量为(5.23±0.96)g刺参Apostichopus japonicus的急性毒性及其体腔液中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)活性的影响,并在实验室条件下,采用静水式生物毒性试验法开展了急性毒性试验,以及96 h亚致死效应的毒性试验。结果表明:异戊二烯对刺参的24、48、72、96 h半致死质量浓度分别为83.00、78.09、72.93、69.77 mg/L,安全质量浓度为6.98 mg/L;亚致死试验中,CAT活性受到的影响最大,表现为受到抑制作用,存在良好的剂量-效应和时间-效应正相关性;96 h时,中、低浓度异戊二烯对SOD活性具有显著的诱导作用(P0.05),而高浓度异戊二烯对SOD活性具有极显著的抑制作用(P0.01);ACP和AKP活性受到的影响较小,但48 h时两种酶均受到极显著的诱导作用(P0.01),96 h时AKP活性受到显著的诱导作用(P0.05);随着异戊二烯质量浓度的增加和时间的延长,刺参体腔液中4种酶活性受到不同程度的影响,因此,异戊二烯胁迫对刺参体内产生自由基导致氧化胁迫效应,以及对消化、能量代谢系统的影响可能是其重要的致毒原因,刺参体腔液中4种酶的变化体现了异戊二烯的致毒机制。本研究结果可为异戊二烯对海洋生物的生态毒理学方面的研究提供参考依据。     

黄芪皂甙对斑点叉尾鮰非特异性免疫和抗病力的影响

分别向基础饲料中添加黄芪皂甙Astragalus membranaceus0（对照组）、300（低剂量组）、500（中剂量组）、800 mg/kg（高剂量组）制备4种试验饲料,饲喂同一家系的1龄斑点叉尾鮰Ictalures punctatus,饲喂期为60 d。以斑点叉尾鮰血清溶菌酶（LSZ）、碱性磷酸酶（AKP）、超氧化物歧化酶（SOD）活性以及肝脏、脾、头肾组织中Toll样受体——TLR2、TLR3表达水平为指标,结合嗜水气单胞菌攻毒试验,探讨了不同剂量的黄芪皂甙对斑点叉尾鮰免疫抗病力的影响。结果表明：中、高剂量组斑点叉尾鮰血清中LSZ、AKP活力均显著高于对照组和低剂量组（P〈0.05）,其中高剂量组血清LSZ活力显著高于其它各组（P〈0.05）,具有明显的剂量效应;与对照组相比,各试验组斑点叉尾鮰血清中SOD活力有所提高,但无显著性差异（P〉0.05）;黄芪皂甙可以显著提高TLR3基因在肝脏中的表达量,低、中、高剂量组斑点叉尾鮰肝脏中TLR3基因的表达量均显著高于对照组（P〈0.05）;高剂量黄芪皂甙可以显著提高TLR3基因在脾、头肾组织中的表达量（P〈0.05）,呈现较为明显的剂量效应;与对照组相比,黄芪皂甙中、高剂量组斑点叉尾鮰脾中TLR5表达量均有显著性提高（P〈0.05）;黄芪皂甙对TLR5基因在肝脏、头肾组织中的表达具有剂量效应,中、高剂量黄芪皂甙可以显著提高TLR5基因的表达水平（P〈0.05）,低剂量组与对照组相比无显著性差异（P〉0.05）。攻毒后试验鱼累积死亡率表明,摄食含有不同剂量的黄芪皂甙饲料以后,斑点叉尾鮰抵抗嗜水气单胞菌感染的能力显著增强,对照组斑点叉尾鮰的最终累积死亡率（61.11%±6.94%）显著高于中、高剂量组（31.11%±3.75%、30.01%±5.34%）（P〈0.05）。上述结果说明：特定剂量的黄芪皂甙可以显著提高斑点叉尾鮰机体的非特异性免疫力,黄芪皂甙可以作为一种安全高效的口服免疫增强剂应用于斑点叉尾鮰健康养殖及病害防治。     

镉对黄金鲫部分生化指标的影响

为研究腹腔注射Cd2+对黄金鲫血液生化指标的影响,试验将300尾健康黄金鲫随机分为4组,分别为对照K组、A组、B组和C组,其中Cd2+的注射浓度依次为0、1.25、2.50、3.75 mg/kg,测定注射后0、1、3、5、7 d时的血清超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、过氧化氢酶(CAT)和丙二醛(MDA)的变化。结果表明,鱼体血液中各指标的变化与注射镉元素密切相关。与对照组相比,A组血清中SOD活力在前3天显著升高(P0.05),在第5、7天时差异不显著(P0.05),B组和C组中SOD活力在整个试验期间显著降低(P0.05);A组、B组和C组血清中CAT、ACP活性和MDA含量与对照相比均显著增加(P0.05);A组AKP活性在第1天时与对照组无显著差异,之后显著降低,B组和C组均显著低于对照组(P0.05)。     

人工感染3种弧菌对鲻鱼血清酶活力的影响

[目的]了解病原菌对鲻鱼非特异性免疫功能的影响,为鲻鱼细菌性疾病的免疫防治提供参考依据.[方法]采用腹腔注射法将等比例混合浓度为4.5× 106 CFU/mL的副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、创伤弧菌（Vibriiovulnificus）和哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）混合菌悬液人工感染鲻鱼,对照组注射等量灭菌生理盐水,分别在感染后第0、1、3、7、11、15、19、23、27、31和35 d采集血样测定血清中酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、溶菌酶（LSZ）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、谷草转氨酶（GOT）和谷丙转氨酶（GPT）活力的变化.[结果]鲻鱼在感染3种弧菌混合悬液后第3d开始出现发病症状,其血清中的溶酶体酶（ACP、AKP和LSZ）活力总体上呈先降低后升高再降低的变化趋势;抗氧化酶（SOD和POD）活力也呈先降低后升高再降低的变化趋势;氨基转移酶（GOT和GPT）活力在感染初期呈急剧上升态势,而后下降回归至正常水平.[结论]鲻鱼受到外源微生物（弧菌混合悬液）刺激后,其体内非特异免疫系统被激活、组织（肝脏）受到损伤,即血清中非特异免疫酶可作为鉴定鱼体健康状况的指标.     

温度胁迫对三疣梭子蟹血清中非特异性免疫因子的影响

以同期普通三疣梭子蟹Portunus trituberculatus（以下简称普通蟹RS）为对照,研究了低温（8℃）和高温（34℃）胁迫12 h内经溶藻弧菌感染后筛选的抗病候选群G2代三疣梭子蟹（以下简称筛选蟹G2S）的血蓝蛋白含量,以及血清中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）、碱性磷酸酶（AKP）和酸性磷酸酶（ACP）活力的变化。结果表明：温度骤变后,筛选蟹G2S和普通蟹RS的血蓝蛋白含量在3 h时均达到峰值（P〈0.05）,随后又逐渐下降,到3～12 h时已基本恢复到0 h的水平（P〉0.05）。两组蟹的SOD和AKP在低温、高温胁迫3 h内也均显著下降（P〈0.05）,到3～12 h达到稳定的低水平（P〉0.05）;在温度骤变的胁迫下,POD、CAT和ACP活力随时间变化也基本呈峰值变化,但达到峰值和趋于稳定的时间不具同步性。方差分析结果显示,筛选蟹G2S的免疫指标值均显著高于普通蟹RS（P〈0.05）,说明筛选蟹G2比普通蟹RS在非特异性免疫因子方面更具免疫优势。以上结果表明：温度骤变的短期胁迫会影响机体的生理功能和机体的免疫防御能力,导致自由基代谢紊乱,从而诱导病害发生。