大白菜基因组DNA的提取及AFLP反应体系的建立

以大白菜嫩叶为材料,利用改进的CTAB法,提取到高质量的大白菜叶片总DNA,通过优化酶切、连接、预扩增、选择性扩增等试验条件,建立了大白菜AFLP银染反应体系,得到了清晰的大白菜AFLP指纹图谱为大白菜品种的分子标记和大白菜品种间亲缘关系等研究奠定了基础.研究结果表明:(1)DNA模板的质量影响酶切以及后续的连接扩增反应,改良的CTAB提取法可用于大白菜AFLP分析,形成清晰的AFLP指纹.(2)大白菜基因组DNA最佳酶切反应体系为:模板DNA总量150ng,反应体积为12.5μL,EcoR I 1.25 U,Mse I 1.25U,5xReaction Buffer,最佳酶切时间为:37℃酶切4h.连接反应于20℃连接2.5h即达最佳效果.(3)6对引物组合(E-AAC/M-CAG、E-AAG/M-CAC、E-ACA/M-CTG、E-ACT/M-CAC、E-ACT/M-CTT、E-ACT/M-CTC)均获得稳定、清晰的扩增图谱,可进行中国大白菜的遗传变异分析.     

大白菜基因组DNA快速提取方法的研究

快速高效的DNA提取是作物大规模分子育种的关键一步。旨为构建一种快速提取大白菜基因组DNA的方法,以大白菜叶片为试验材料,比较了CTAB法、二步CTAB法以及4种碱裂解法提取DNA的质量,分析了不同方法提取的DNA为模板的PCR扩增效果,还对不同方法提取的基因组DNA的保存时间和保存条件进行了比较,选择最优的方法在抗根肿病基因分子标记辅助选择中进行了应用。结果表明,CTAB法和3种碱裂解法提取的基因组DNA作为模板的PCR扩增产物,都可以通过8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测到清晰的条带。其中碱裂解法Ⅲ,不仅提取质量好,而且提取过程简单、快速,能够满足大白菜高通量DNA提取的需要,提取的DNA在4℃和-20℃的条件下保存,将保存至30 d的基因组DNA作为模板进行PCR扩增,产物仍然可以通过聚丙烯酰胺凝胶电泳检测到清晰的条带,说明这种方法保存时间较长,经验证,该方法在抗根肿病基因分子标记辅助选择中的应用效果也较好。碱裂解法Ⅲ显著提高了大白菜分子标记辅助筛选的效率,可广泛应用于大白菜分子标记辅助选择育种。     

短短芽孢杆菌JK-2(Brevibacillus brevis)胞外物质抗香蕉枯萎病菌的稳定性

研究温度、光照、紫外辐射、蛋白酶K、pH对生防菌短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)JK-2胞外物质抗香蕉枯萎病菌稳定性的影响,为香蕉枯萎病生防菌剂的研制提供理论依据。在30℃,170r/min的条件下,恒温振荡培养36h采样制备生防菌短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis)JK-2胞外物质,以香蕉枯萎病菌为指示菌,对胞外物质的抑菌特性进行研究。结果表明:该胞外物质具有一定的热稳定性,60~80℃温育1h保持88.5%以上活性,在100℃放置1h后无抑菌活性;在酸性pH3.0~5.0和碱性pH9.0~11.0条件下,抑菌活性保持在77.2%以上,对光照、蛋白酶K、紫外照射均不敏感。其抑菌作用的最适温度为30℃,最适pH为7.0。     

大白菜单拷贝序列的长片段PCR体系优化

目的序列长片段PCR产物可作为FISH技术的有效探针进行分子细胞遗传学研究。然而,传统PCR技术对于5 kb以上的长片段进行有效扩增很难。合适的反应条件及反应体系是进行长片段PCR有效扩增的必要前提。为了获得目的序列长片段PCR产物以用于FISH研究,根据大白菜A03染色体顶端无重复序列区段设计了80对长片段PCR引物,从基因组DNA模板质量、d NTPs浓度以及退火温度和延伸时间方面对PCR技术体系进行了优化。试验证明,选用幼苗嫩叶的基因组DNA和LA Taq DNA聚合酶可以提高长片段PCR引物的扩增质量和扩增效率;确定了适合5~15 kb长片段PCR的反应体系为20μL:50 ng/μL模板DNA 2μL,2.5 mmol/L d NTPs 1.6μL,10μmol/μL正反引物各1μL,10×LA PCR BufferⅡ(含Mg2+)2μL,5 U/μL LA Taq酶0.2μL;反应条件为98℃变性15 s;58~64℃退火10 s,68℃延伸5 min,35个循环;68℃延伸10 min,4℃保存。在大白菜基因组中成功获得了60对5~15 kb的扩增片段。为在大白菜粗线期染色体上开展长片段PCR-FISH技术研究及在近缘种间开展比较染色体涂染揭示进化关系奠定了理论基础。     

人工养殖鲟鱼脊骨硫酸软骨素提取工艺研究

以人工养殖达氏鳇脊骨为原料,按碱提-酶解-乙醇沉淀工艺流程提取硫酸软骨素的工艺条件进行研究。通过单因素及正交试验,得出碱提的最佳条件是碱液质量分数为6%,料液比为1∶7,提取温度为40℃,提取时间为4.5 h。酶解的最佳条件为浸提液pH值调至8~9,采用质量比1∶1的木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的混合酶,按质量分数2.5%加入,55℃水浴酶解5 h。通过单因素试验,得出乙醇沉淀的最佳条件为滤液pH值调为6.5,加入无水乙醇至醇沉体积分数70%,室温静置过夜。在最佳工艺条件下硫酸软骨素得率为40.65%,D-葡萄糖醛酸含量为22.15%。     

人工养殖鲟鱼脊骨硫酸软骨素提取工艺研究

以人工养殖达氏鳇脊骨为原料,按碱提-酶解-乙醇沉淀工艺流程提取硫酸软骨素的工艺条件进行研究。通过单因素及正交试验,得出碱提的最佳条件是碱液质量分数为6%,料液比为1∶7,提取温度为40℃,提取时间为4.5 h。酶解的最佳条件为浸提液pH值调至8~9,采用质量比1∶1的木瓜蛋白酶和胰蛋白酶的混合酶,按质量分数2.5%加入,55℃水浴酶解5 h。通过单因素试验,得出乙醇沉淀的最佳条件为滤液pH值调为6.5,加入无水乙醇至醇沉体积分数70%,室温静置过夜。在最佳工艺条件下硫酸软骨素得率为40.65%,D-葡萄糖醛酸含量为22.15%。     

大白菜春季播期与抽薹比较试验研究

为探讨早熟大白菜新品种播种期和抽薹的关系,通过对10个不同的早熟大白菜品种,在自然气候条件下,不同时期种植,测定早熟大白菜在春季早播受低温影响通过春化作用,影响商品菜的低温界限,筛选出适合春季早播的大白菜品种.     

大白菜菌核病病原菌鉴定及其主要生物学特性

为明确大白菜菌核病病原菌的种类及其主要生物学特性,以大白菜菌核病病株上分离获得的菌株XN001为试验材料,对菌株进行致病性检测和形态学观察,并结合病原菌ITS区序列分析鉴定病原菌的种类,此外,通过改变病原菌菌丝和菌核的培养条件,研究病原菌的主要生物学特性。结果表明:大白菜菌核病病原菌与油菜菌核病相同都是核盘菌;菌株XN001在p H值4~11菌丝均可生长,p H值4时生长最快;菌丝生长最适温度为20~25℃;诱导菌核萌发的最适温度为4~10℃,菌核在4℃下处理3~5周,萌发效果最好;菌核经低温诱导后,培养温度在15~25℃,最适宜菌核萌发。可见,大白菜菌核病病原菌为核盘菌,适宜在酸性常温条件下生长,菌核的萌发需要低温诱导。     

温度对窖藏大白菜主要真菌分离特侵染的影响

在０，５，１０℃下人工接种８种大白菜贮藏期主要真菌分离物。结果有５种可在１０℃的条件下侵染大白菜。其中甘蓝链格孢，希金斯刺盘孢及灰葡萄孢可在０－５℃下产孢。而芸薹链格孢，萝卜链格孢则仅在１０℃条件下可以产孢。鉴于管理正常的正常的传统及及强制通风型大白菜窖的窖温一般不超过５℃，故带入窖中的芸菇葑链格孢及萝卜链格孢可侵染白菜而不能产孢。因此在北京郊区引起大白菜烂窖的黑斑病的发生程度，主要决定于田间携入     

1-MCP对猕猴桃果实品质和细胞氧化还原水平的影响

以中华猕猴桃为试材,分别于0、10、20、30℃条件下采用1μL/L的1-甲基环丙烯(1-MCP)处理12h和24 h后,在20℃条件下贮藏,研究不同1-MCP处理温度和时间对中华猕猴桃果实贮藏品质及其细胞氧化还原水平的影响.结果表明,1-MCP处理12h可显著降低猕猴桃果实的呼吸强度和乙烯释放量,其中在30℃下的处理...