苹果原生质体培养再生愈伤组织

以苹果试管苗叶片为原生质体分离材料,对影响原生质体分离和培养的因素进行了研究。结果表明适合叶片酶解的酶液组成是Cellulase-Onzuka R-10 0.8% + Pectinase 0.5% + PVP 1% + 甘露醇 0.65 mol/L + MES0.1%;以改良MT + BA 1.0 mg/L + 2,4-D 0.2 mg/L + 甘露醇0.65 mol/L + Vc 5.0 mg/L + Glu 500 mg/L + CH 100 mg/L + ME 500 mg/L + Arg 50 mg/L为培养基对原生质体进行培养,固液双层培养效果较好,最适培养密度为1×105 (个/ml),培养1-2 d原生质体变形,3-4 d第一次分裂,2 w分裂3-5次。平邑甜茶原生质体一个月后形成微细胞团,两个半月形成肉眼可见的微愈伤组织。鲁加5号和M7均只形成7-10个细胞的细胞团,嘎拉未见细胞分裂。     

二倍体野生种马铃薯Solanum pinnatisectmum原生质体分离纯化与培养的研究

为获得较好的原生质体分离和原生质体纯度,试验以野生种马铃薯(S.pinnatisectmum)试管苗叶片为材料,进行了原生质体分离和纯化的研究。结果表明:培养3周左右的试管苗叶片均在含有0.4%纤维素酶+0.7%果胶酶+0.1%离析酶,渗透压为0.3 mol/L的酶解液中解离效果最好,原生质体产量为1.93×106/g FW;在(25±1)℃酶解温度条件下静置14 h,可促进叶片原生质体的大量释放。而且,外源激素组合0.5 mg/L IAA+2.5 mg/L Zeatin有利于S.pinnatisectmum叶片原生质体的分裂,原生质体一次分裂频率达到6.32%。研究获得了稳定的原生质体分离体系以及较好的原生质体培养条件,为马铃薯野生种Solanum pinnatisectmum的体细胞融合提供了依据。     

冬枣花药愈伤组织的诱导及原生质体分离

【研究目的】研究冬枣花药愈伤组织的诱导,悬浮系的建立和培养及愈伤悬浮系原生质体的分离。【方法】以冬枣花药为试材,通过选择愈伤诱导培养基和原生质体分离所用酶的浓度找到最佳诱导和分离条件。【结论】使用1/2MS基本培养基附加TDZ0.2mg/L、NAA0.5 mg/L和 PVP2.0g/L,对诱导冬枣花药愈伤组织有较好效果;愈伤组织增殖采用培养基1/2MS+TDZ0.4 mg/L +NAA0.2 mg/L;悬浮细胞系培养采用1/2MS+TDZ0.4 mg/L +NAA0.2mg/L液体培养基;冬枣花药愈伤组织悬浮系原生质体分离时以0.6M甘露醇+0.1%MES+20~25 g/L纤维素酶,酶解时间为16h时得到的原生质体产量和活力较高。     

花生原生质体分离与培养

以花生品种花育20为材料,探讨不同的酶液浓度、酶解时间及渗透压对花生原生质体分离的影响。结果表明:原生质体分离的适宜酶液配比是2%纤维素酶（Cellulase Onozuka RS）、0.2%果胶酶(Pectolyase Y-23),甘露醇渗透压调节剂的浓度为0.7 mol/L,暗处理10 h,叶片原生质体产量为4.86×105/ml,存活率75.6％,愈伤组织原生质体产量为4.97×105/ml,存活率75.4％。将分离的原生质体培养在添加1mg/LNAA和4mg/LBAP的改良MS液体培养基中。培养约2～3d后,细胞开始分裂。然后部分细胞继续分裂,并形成细胞团。培养5～6周后,将培养物转移到添加2mg/L2,4-D和3mg/LBAP的MS液体培养基（pH 5.8）中进行培养。7～8周后,将形成的直径为1～2mm的小愈伤组织转移到添加1mg/LNAA和5mg/LBAP的MS固体培养基上培养,小愈伤组织迅速生长。转移3～4周后,愈伤组织长至7～9mm。     

辣根叶片原生质体分离条件的研究

分离优质原生质体是进行细胞功能性以及生物膜特性研究的基础,建立适宜的"酶液浓度与酶解时间以及酶液渗透压"组合是获得高产优质原生质体的重要条件.本实验以辣根叶片为材料,研究了不同酶液浓度、溶液渗透压以及酶解时间对其原生质体分离的影响.结果表明,用浓度为1%纤维素酶+0.1%果胶酶+0.9mol/L甘露醇组成的混合酶液,在28.5℃条件下,pH为5.8的酶液组合中酶解50min时,可获得较高的原生质体产量,且原生质体活力较高.     

小青杨叶肉原生质体分离条件的研究

为获得大量、有活力的原生质体,建立起高效的小青杨（Populus pseudo-simonii Kitag.）原生体分离体系,本研究以小青杨无菌苗叶片为材料进行原生质体分离条件的研究。结果表明：酶的种类和浓度、渗透压稳定剂浓度、酶解时间、叶龄是影响原生质体分离的重要因素;将叶龄35天的无菌苗第2~3片叶片置于酶液组成为CPW+3.0% 纤维素酶R-10+0.5% 离析酶 R-10+0.1% 果胶酶Y-23+0.6 mol/L甘露醇+0.6 g/L MES+1 g/L BSA中酶解8 h,原生质体产量和活力分别为2.44×107个/g和78.7%。通过该分离体系稳定的获得了高产量、高活力的原生质体,可以满足进一步的原生质体培养等技术的要求。     

马铃薯叶片原生质体的培养

以马铃薯四倍体普通栽培种品系俄8和双单倍体品系讷16-3和讷16-14脱毒试管苗叶片为材料,通过对预处理、酶解时间及培养基激素配比等因素的研究,优化了原生质体游离纯化和培养体系。试验结果表明:低温预处理有助于提高原生质体的产量和质量,最适酶解时间分别为12.5h(四倍体栽培种)和12h(双单倍体),MS+NAA1.0mg/L+6-BA0.5mg/L为最佳愈伤增殖培养基,MS+ZT2.5mg/L+IAA0.5mg/L为最佳愈伤分化培养基。     

4个优良石榴品种叶片高频再生体系的建立

为提高石榴叶片再生率,增加再生芽数量及缩短再生周期,以‘泰山红’‘、泰山三白甜’‘、皮亚曼’‘、牡丹’4个石榴品种盆栽苗和无菌苗叶片为试材,研究培养基类型、生长调节剂配比、叶片来源和培养步骤对不定芽再生的影响。结果表明：MS是叶片再生最适培养基类型;无菌苗叶片比盆栽苗叶片更易再生不定芽;BA3.0mg/L+KT1.0mg/L+IBA0.3mg/L是叶片愈伤组织诱导、分化和不定芽形成过程中生长调节剂最佳配比;先在液体培养基上培养3~5天,再转至固体培养基比仅在固体培养基上效果更好,叶片再生率最高达98.47%,出芽数达7.51个。叶片不定芽的最佳单芽培养基和增殖培养基分别为B5+BA0.6mg/L+IBA0.5mg/L+椰汁100mL/L+PVP2.0g/L+GA31.0mg/L和B5+BA0.8mg/L+IBA0.5mg/L+椰汁100mL/L+PVP2.0g/L,增殖系数为5.56。适宜的生根培养基为B5+IBA1.0mg/L+椰汁100mL/L,生根率为89.63%。由此建立了石榴叶片高频再生体系。     

苎麻叶片组织培养再生植株的研究

摘要：以中苎一号叶片为外植体,研究了外植体消毒时间、培养基、生长调节物质对苎麻品种中苎一号叶片愈伤诱导、分化不定芽和生根的影响。其结果表明：先用75%酒精消毒10秒,再用0.1%升汞灭菌8分钟,同时滴入1-2滴1% HCL效果最好。中苎一号最佳叶片愈伤组织诱导基本培养基为1/2MS;最佳叶片愈伤组织诱导培养基组合为:1/2MS+0.05mg/L TDZ+0.01mg/L IAA+0.03mg/L 2,4-D;最佳愈伤分化培养基为: 1/2MS+0.5mg/L TDZ+0.02mg/L 2,4-D+0.03mg/L IAA;最佳生根培养基为:1/2MS+0.02mg/L TDZ+O.O5mg/L NAA+0.02mg/L IAA, 形成了较为完善的组织培养再生体系,再生率达到了26%以上     

条叶唇柱苣苔组织培养研究

以条叶唇柱苣苔(Chirita ophiopogoidesDFang etW T Wang)的幼嫩叶片、种子为外植体,以MS为基本培养基,建立了条叶唇柱苣苔的组织培养和再生体系.试验结果表明:条叶唇柱苣苔叶片诱导不定芽的最佳培养基为MS +2,4-D0.5 mg/L+ IAA 0.5 mg/L+ NAA 0.2 mg/L,丛生芽分化的最佳培养基为MS+ KT 1.0 mg/L+ IAA 3.0 mg/L+ NAA 0.5mg/L; MS+ NAA 0.5 mg/L+ 6-BA 1.5 mg/L的培养基最适合继代,MS+ IBA 2.0 mg/L+ AC 0.5 mg/L培养基的生根效果最好,平均根长为4.67 cm,生根率达100％.