石刁柏花药离体培养及单倍体植株再生的研究

1988至1990年进行了石刁柏花药离体培养,将采集不同时期花蕾接种,低温处理,激素配比,花药培养过程中形态学及花粉粒发育途径,愈伤组织诱导及其类型,花药愈伤组织再分化和染色体倍性,单倍体植株的再生及染色体加倍后入土移栽等方面,均做了较深入的研究,并获得了超雄株即纯合二倍体。     

“凤丹白”胚离体培养和植株再生研究

摘　要:以牡丹品种“凤丹白”的胚为外植体,研究了层积时间、基本培养基、植物激素等因素对胚愈伤组织的诱导及不定芽分化的影响。结果表明:40d层积时间对胚萌发的效果最好,MS+Ca2++2 mg•Ｌ-12,4-D+30ｇ•Ｌ-1蔗糖是胚诱导愈伤组织的最佳培养基,诱导率为85%;MS+ Ca2++1.0 mg•Ｌ-16-BA+0.5 mg•Ｌ-12,4-D+20ｇ•Ｌ-1。蔗糖是诱导不定芽发生的最佳培养基;高约1.5cm的不定芽转入生根培养基,生根率可达80%。     

不同激素配比对番茄叶片外植体分化的影响

培养基是调控番茄叶片外植体分化途径的一个重要因素,用不同激素配比的培养基比较其对番茄叶片外植体分化的影响,结果是在MS基本培养基中附加BA和IAA,外植体主要向叶、芽原基方向分化;附加KT和NAA,则有利于根原基的形成;附加BA和NAA,外植体形成丰满的愈伤组织.此外还比较了13种番茄基因型的叶片外植体分化能力的强弱.     

提高春小麦幼胚离体培养中愈伤组织诱导及分化效率的研究

以甘肃省7个春小麦品种为试验材料,探讨了接种方式、基因型、胚龄、植物生长调节剂等因素对幼胚培养中愈伤组织诱导及分化的影响.结果表明:供试春小麦品种出愈率不受盾片放置方向的影响,而盾片向上放置的分化率明显大于盾片向下放置的;春小麦幼胚离体培养的有效胚龄期为14～20 d,最适宜的胚龄期为16 d;基因型对愈伤组织诱导无影响,但对愈伤组织再生能力有极其重要的影响;随2,4-D浓度的增加春小麦幼胚分化率呈单峰曲线变化,且品种间差异很大,对大多数品种而言,适宜的2,4-D浓度为1～6 mg/L.0.2 mg/L NAA和0.2 mg/LIAA能有效地诱导芽快速生根,生根率分别达到83.8%和55.1%.     

二氧化氯消毒外植体提高玉露愈伤分化再生效率

本研究拟评价环境友好型消毒剂二氧化氯消毒外植体对玉露组织培养的影响。以常规次氯酸钠消毒方法为对照,采用83 mg/L和111 mg/L液体二氧化氯对姬玉露叶片进行消毒,后用于愈伤组织诱导和分化再生研究。结果发现,二氧化氯具有与次氯酸钠相似的消毒效果,外植体污染率均低于3%;二者的愈伤组织诱导率均超过95%,但二氧化氯消毒组出愈时间比对照组提前4 d。二氧化氯消毒与对照组最适愈伤分化培养基均为1/2MS+3%蔗糖+3%甘露醇+5 mg/L硫酸铜+0.5 mg/L BAP+0.2 mg/L IAA+0.25%植物凝胶,愈伤分化率分别为92.8%和93.4%(p>0.05),但二氧化氯消毒组平均绿芽数比对照组高出46%(p<0.05)。不添加任何植物激素的1/2MS培养基最适合生根培养,在二氧化氯消毒组和对照组中生根率分别为87.9%和83.3%。农家肥和蛭石按1∶1比例混合的基质有利于玉露的移栽,存活率达到90%。本研究表明二氧化氯能用于玉露组织培养,且提高其繁殖效率。     

唐菖蒲愈伤组织的诱导及植株再生

本试验以唐菖蒲无菌试管苗叶片、茎段、幼芽为外植体,探讨其愈伤组织诱导及植株再生情况。结果表明叶片愈伤组织诱导率极低。茎段愈伤多为黄色致密的非胚性愈伤,幼芽愈伤多为乳白色胚性愈伤。幼芽的愈伤组织诱导率和分化率以及分化速度也均高于茎段外植体。初步表明幼芽是建立愈伤组织再生体系的良好外植体。最佳愈伤组织诱导培养基为MS 2,4-D4．0 6BA0．5。     

板栗短雄花序芽变的离体培养研究

本文以板栗短雄花序芽变为材料,研究了以MS为基本培养基,采取不同外植体、不同激素配比对其愈伤组织诱导的影响,结果表明,其最适宜的诱导培养基为MS + 0.5 mg/L 6-BA + 0.2 mg/L NAA。茎段、嫩叶两种外植体中,以其茎段培养的诱导率较高,成愈率为65.0%。继代培养的适宜培养基为MS + 0.5～1.0mg/L 6-BA + 0.2mg/L NAA。     

苜蓿不同外植体愈伤组织诱导效果及其相关性分析

以4种苜蓿的下胚轴、叶片、子叶和茎为外植体,分析同一品种间和不同品种间不同外植体愈伤组织的诱导成果.结果表明:同一外植体不同基因型的培养效果无显著差异,而同一基因型不同外植体的培养效果存在显著差异.不同外植体都可以诱导产生愈伤组织,其中相同品种的不同外植体愈伤组织的诱导率和褐化率均存在显著差异(p＜0.01),效果最佳的是下胚轴所诱导的愈伤组织,诱导率平均达99.4％,褐化率最低;叶片的诱导率最低,平均为84.3％,褐化率最高.苜蓿不同外植体愈伤组织诱导率的高低为:下胚轴＞子叶＞茎＞叶片.茎和子叶之间的愈伤组织诱导率存在极显著负相关.     

油菜外植体离体培养的细胞分化研究

为了探索油菜外植体分化再生的机理．利用扫描电镜技术对芥菜型油菜DB3的下胚轴、子叶在不同的离体培养时期的细胞分化和形态变化进行了研究。结果表明,下胚轴外植体是切面上的维管柬薄壁细胞和距离切面400～600μm的薄壁细胞脱分化,然后再分化形成芽。而子叶仅仅是距离切面400-600μm的薄壁细胞脱分化后再分化成芽的。     

迷迭香叶片愈伤组织诱导及再分化培养

本研究以迷迭香叶片为外植体,探索愈伤组织形成及再分化条件。结果表明:蔗糖含量较高的培养基可促进愈伤组织形成,其中以MS+蔗糖50g/L+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L效果最好,诱导率可达88%;愈伤组织再分化形成不定芽时,以MS+6-BA1.5mg/L+KT0.5mg/L+NAA0.5mg/L效果较好,再分化率达50%;MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.5mg/L诱导不定芽增殖,增殖率可达到300%多;不定芽生根时,MS+NAA0.1mg/L效果较好,生根率可达65%。同时,研究发现,尽管外植体被消毒至无菌,但75%乙醇复合其它灭菌剂共同灭菌时,会导致外植体大量死亡。     

中国粗榧愈伤组织诱导及再生体系的建立

（郑州大学生物工程系,郑州 450001）     

不同生长调节物质对丹参愈伤组织的诱导效应

以丹参(SalviamiltiorrhizaBunge)无菌苗的茎、叶为外植体,接种于附加2,4-D、NAA、6-BA及其组合的MS固体培养基上。结果表明:单独使用三种植物生长调节物质在一定浓度范围内均能产生愈伤组织;配合使用外源生长素和细胞分裂素,能获得出愈率高、生长快、质量好的愈伤组织;最佳组合的诱导培养基为MS 2,4-D2．0mg／L 6-BA1．0mg／L;2,4-D对丹参愈伤组织的诱导有促进作用;但当2,4-D的浓度在4mg／L以上时,对愈伤组织的生长有抑制作用。     

甘啤4号大麦幼胚愈伤组织诱导及植株再生的研究

本研究以甘啤4号的幼胚为外植体材料,以模式品种Golden promise为对照,研究了不同培养基和激素配比对甘啤4号幼胚愈伤组织的诱导及植株再生的影响。研究结果表明,在同一培养基上,甘啤4号出愈率低于Golden promise,但都达到50%以上;在诱导愈伤组织的过程中,甘啤4号在IM2培养基上的出愈率较高,达71%,IM1与IM2培养基上形成的愈伤质量较IM3好,说明培养基对愈伤组织的出愈率起决定作用;且研究发现dicamba较2,4-D能提高大麦幼胚的出愈率。在相同的培养基上,Golden promise的诱导率明显高于甘啤4号,可见基因型对大麦愈伤组织的诱导率起决定作用。且不同的培养基和不同激素配比对幼胚愈伤组织的诱导率及分化率不同,分化培养基DM1的分化率高于DM2,这说明除基因型外,激素也对植株再生产生重要影响。研究证明甘啤4号愈伤组织诱导率及分化率均较高,适合于作为遗传转化的受体材料。     

大葱成熟胚愈伤组织诱导及植株再生

为了建立大葱组培高频再生体系,以‘铁杆大葱’的成熟胚为材料,探讨培养基种类、植物生长调节剂浓度等因素对大葱成熟胚愈伤组织诱导及再生的影响。结果表明,MS培养基适合大葱成熟胚愈伤组织诱导,大葱成熟胚愈伤组织诱导最适宜的培养基为MS+2,4-D (2~3 mg/L)。大葱成熟胚愈伤组织分化培养最适培养基为MS+6-BA (1.0 mg/L)+KT (1.0 mg/L)+NAA (0.1 mg/L),分化率达90%;对分化的再生苗移植于1/2 MS培养基上进行生根及壮苗培养,生根率达到100%,炼苗移栽后小苗的成活率达到90%以上。本研究为进一步优化大葱再生体系提供了依据,为后续大葱的遗传转化的研究起了推动作用。     

不同抗生素对韭菜根愈伤组织诱导及再生的影响

本研究以汉中冬韭韭菜品种为试验材料,研究了韭菜根尖及愈伤组织对抑菌性和选择性抗生素的抗性。研究结果表明,选择性抗生素对韭菜再生的影响极显著,以PPT作为选择抗生素时,愈伤生长及不定芽分化阶段PPT适宜浓度为1mg/L,而生根阶段PPT最适浓度为0.5mg/L。当潮霉素浓度为1mg/L时,根尖愈伤组织分化率达到了8%,而浓度为2mg/L时根尖已不能分化,以1mg/LHyg为最佳浓度。用头孢霉素作为抑菌剂时,愈伤生长及不定芽分化阶段,最适浓度为400mg/L,而生根阶段适宜浓度为200mg/L;以Timentin作为抑菌剂时,最适浓度在400mg/L以内,韭菜外植体的分化没有受到影响,随着浓度的增加抑制作用越来越明显,以400mg/LTimentin为最适抑菌抗生素浓度,这为农杆菌介导韭菜遗传转化奠定基础。     

白术叶片再生植株和丛生芽快繁的研究

白术是菊科的一种重要药用植物。为满足白术的药用需求，扩大其资源供应，避免传统开荒育苗种植模式对生态环境的破坏，为白术的大规模工厂化育苗及获取药用次生代谢产物提供有效的途径和方法，笔者以白术叶片为外植体经愈伤组织再生植株和丛生芽增殖两种方式建立了白术无菌苗的快速繁殖技术，分析了不同植物激素种类和浓度对白术叶片再生植株及丛生芽增殖的影响，研究了温度和光照条件对白术叶片愈伤组织褐变的影响。研究结果显示在培养基MS+ 6-BA1 mg/L+NAA0.2 mg/L上白术丛生芽增殖倍数最高，可达4.45倍；以白术的叶片愈伤组织诱导及再生植株的最佳培养基为MS +KT 1mg/L+NAA0.2 mg/L，愈伤组织诱导率可达96.7%；芽分化率为90%。不同的细胞分裂素种类与浓度处理差异显著，在白术叶片的愈伤组织诱导中，KT的效果要优于6-BA，但在丛生芽增殖中则表现出高浓度的6-BA要优于KT。白术叶片愈伤组织继代培养中褐变程度与温度、光照条件有关，1000 lx光照强度，20±0.5℃的温度条件下继代培养能有效控制褐变。     

紫花苜蓿愈伤组织诱导和分化研究

以紫花苜蓿SANDITI无菌苗下胚轴、茎、叶3种不同外植体,在附加不同激素浓度的MS培养基上诱导愈伤组织。结果表明,SANDIT最佳外植体为下胚轴,最佳下胚轴愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 0.5mg/L。15 d继代1次,或适当降低2,4-D浓度,提高6-BA或KT浓度,可以降低愈伤组织褐化率。愈伤组织在6-BA0.5 mg/L,NAA 0.1 mg/L,GA31.0 mg/L,YE 250 mg/L,CH 250 mg/L的MS培养基上,可获得较高的分化率。