SSR分子标记技术在杂交油菜种子纯度鉴定中的应用初探

采用形态学方法和SSR分子标记技术，对甘蓝型杂交油菜贵杂4号及其亲本进行杂种性状表现、DNA指纹图谱和种子纯度的研究结果表明：田间形态学观测结果杂种性状表现亲子间存在明显亲子关系和母本效应，利用作物的这一共性特点可对作物种子真实性和纯度进行鉴定；采用SSR分析从100对SSR引物中筛选出5对多态性很强且极易识别的特殊引物，通过这5对特殊引物的指纹组合构建了贵杂4号及其亲本的DNA指纹图谱；利用遗传决定的蛋白质组分不受环境影响和其在组分上的差异性反映的是基因型的原理，通过特殊引物组合对种子的扩增图，可快速有效的对种子真实性和纯度进行鉴定。     

利用SSR指纹图谱技术对杂交油菜种质鉴定的研究

在利用SSR标记构建53份甘蓝型黄籽油菜种质资源的DNA指纹图谱的基础上,筛选出一个对黄籽油菜杂种贵油519及亲本具有共显性的SSR引物Ra2A05b,鉴定大田生产F1杂种群体的纯度,经与大田对比鉴定结果表明：SSR标记鉴定可以更多的识别非杂交种单株。     

甜瓜品种SSR指纹图谱的构建

为实现对甜瓜品种快速准确鉴定,利用SSR分子标记技术对6个甜瓜品种及其亲本共18份材料构建指纹图谱。通过利用50对多态性好的甜瓜SSR引物,经扩增电泳分析得到C17、C21、C30共3对引物,可用于构建18份材料的指纹图谱,实现了对这些材料的分子鉴定。另外利用C21引物对材料M324的杂种品种进行纯度鉴定,结果纯度为89%,与田间性状统计结果 90%相符。     

青研系列大白菜杂交种及亲本指纹图谱构建和杂种纯度鉴定

利用SSR分子标记技术构建了青研系列7份大白菜杂交种及其11个亲本的DNA指纹图谱,筛选出5对具有较高多态性的SSR核心引物,核心引物组合扩增,可以鉴别亲本及其杂交种的真伪。利用其中一对共显性SSR标记P3鉴定青研早9号、青研桔15和青研春白一号三个杂交种的纯度。对比苗期性状调查结果表明,SSR分子标记用于杂交种纯度鉴定结果是可靠的。本试验为大白菜杂交种纯度鉴定提供了可靠的方法,对亲本保护及杂交种推广具有重要意义。     

SSR标记与形态学方法鉴定杂交油菜纯度的比较研究

为了探讨SSR标记技术在油菜杂交种纯度鉴定中应用的可行性,本文采用SSR标记技术和形态学方法鉴定油菜杂交种纯度以比较两者的差异,用406对微卫星引物分别对杂交油菜品种"蜀杂六号"核不育系156AB的可育株及不育株、恢复系86Y17和杂种1代各自的形态学正常植株及杂株,进行了鉴定.首先从406对SSR引物中筛选出了多态性强且易识别的14对SSR引物.采用选出的14对引物能稳定扩增出蜀杂六号父母本的多态性,能够鉴定油菜杂种中的杂株,但结果表明SSR标记鉴定的杂株与形态学方法鉴定的杂株存在较大差异.     

甘蓝型双低油菜杂交种丰油10号纯度的SSR鉴定

品种纯度影响品种的一致性和稳定性,是品种鉴定的一项重要指标。为建立甘蓝型油菜杂交种丰油10号的SSR标记纯度鉴定方法,以丰油10号及其亲本为材料,利用SSR荧光标记与毛细管电泳相结合的方法,在128对SSR引物中筛选出2对可用于丰油10号纯度鉴定的引物。2对SSR引物对丰油10号的纯度鉴定结果为85.64%,与田间表型纯度鉴定的结果87.18%相比,纯度值非常接近,说明筛选的SSR标记可用于丰油10号杂交种纯度鉴定。     

甘蓝型CMS杂交油菜品种种子纯度的分子鉴定及其吻合率研究

本研究在大量引物筛选和重复验证的基础上对目前生产上大面积推广的CMS杂交油菜品种秦优7号、秦杂优1号及其对应亲本进行了RAPD标准图谱的构建,并规模化的对该两杂交种的生产商品用种种子纯度进行了检测。对所检样品所代表的种子群体进行了大田吻合率比对研究和群体纯度跟踪,结果显示两品种的室内检测结果和田间表现的单株育性吻合率皆在97%以上,这表明利用该技术进行杂交油菜种子纯度分析方法是可靠的,该方法在连续5年上百份样品、数万单株和20多万公斤的杂交油菜种子纯度分析应用实践中得到检验和证明。     

SSR分子标记技术在甘蓝型油菜杂交种陕油16纯度鉴定中的应用

利用微卫星(SSR)分子标记技术对甘蓝型油菜杂交种陕油16及其双亲进行了引物筛选和纯度鉴定技术研究.结果表明:在已筛选的80对SSR引物中,分别有3对引物SSR313、SSR354、SSR359表现稳定的共显性,利用这3对引物对陕油16杂交种进行纯度鉴定结果均低于田间鉴定结果,说明SSR分子标记技术的鉴定结果比田间鉴定结果更准确、可靠,SSR分子标记技术可以应用于杂交种陕油16的纯度鉴定.     

花生新品种汕油21种子纯度SSR标记鉴定体系的建立和应用

为探索花生品种纯度的分子标记鉴定方法,采用SSR标记构建不同花生品种的指纹图谱。结果表明:利用3对SSR标记引物构建20个花生品种的指纹图谱,该图谱可以将汕油21与其它19个花生品种进行区分,这些品种包括汕油162、汕油212、汕油31、汕油33、汕油71、粤油5号、粤油7号、粤油29、粤油32、汕油27、汕油523、粤油9号、粤油13、粤油14、粤油79、粤油114、J11、仲恺花1号和泉608等;以3对SSR引物对汕油21繁育种子60个样品进行种子纯度检测,共有2对标记引物检测到3个杂株样品,该种子批的纯度为95.0%。因此,利用SSR标记构建花生品种指纹图谱并应用于汕油21品种纯度鉴定是可行的。     

双低甘蓝型油菜杂交种亲本指纹图谱构建和杂交种纯度鉴定

利用SSR分子标记构建了18份恢复系和21份不育系共39份甘蓝型油菜杂交种亲本的DNA指纹图谱,筛选出H9901和H9905两个杂交种亲本的共显性SSR标记Na10G08,并用其鉴定了H9901、H9905两个大田生产F1杂种群体的纯度。对比SSR和田间调查的鉴定结果表明,SSR标记鉴定可以识别更多的非杂交种单株,如母本因微粉导致的自交、花粉污染、     

基于SSR标记的5个西瓜新品种纯度鉴定及特异性分析的研究

为建立西瓜杂交种品种纯度的快速、准确、高效鉴定体系,利用SSR分子标记,对5个西瓜新品种纯度进行鉴定,并构建亲本的分子指纹图谱。以上海市农业科学院育成的5个西瓜新品种‘申选958’、‘双色冰淇淋’、‘黄晶’、‘圣女红2号’与‘圣女红3号’及其亲本的种子为试材,采用CTAB法从发芽种子的根尖中提取DNA。根据杂交种带型双亲互补的原则,利用SSR标记进行杂交种纯度及特异性鉴定研究。从28对SSR核心引物中筛选出5对特异性引物(引物BVWS00106、BVWS00209、BVWS0036、BVWS01734、BVWS00826),鉴定到这5个新品种的杂交种纯度均达到98%,并与各品种的大田植物学形态特征鉴定结果相比较,符合率高达98%以上。分析比较各亲本材料的SSR引物的多态性表现,构建了9份亲本材料的DNA指纹图谱。研究为西瓜杂交品种纯度快速检测和品种权保护提供了理论依据与技术支撑。     

番茄品种SSR指纹图谱的构建

为实现对番茄品种快速准确鉴定,利用SSR分子标记技术对7个番茄品种及其亲本共21份材料构建指纹图谱.通过利用50对多态性好的番茄SSR引物,经扩增电泳分析得到T23、T34、T49共3对引物,可用于构建21份材料的指纹图谱,实现了对这些材料的分子鉴定.另外利用T 34引物对材料T223、T 255的杂交种品种进行纯度鉴定,结果纯度分别为93.22％、93.75％,与田间性状统计结果(93.8％、93.8％)相符.     

SSR标记对甜瓜杂交种‘玉贵人’纯度的鉴定

为了精准快速地筛选出鉴定甜瓜杂交种纯度的SSR引物,本研究利用18对甜瓜SSR核心引物对甜瓜杂交种‘玉贵人’及其亲本进行引物筛选和种子纯度鉴定。结果筛选出2对引物(CmS57和CmS59)在子代中兼具双亲条带并且在亲本间具有多态性,且条带清晰,间隔明显,并利用这2对引物在杂交群体中进行验证,纯度鉴定结果为97.8%和100.0%;SSR分子标记的鉴定结果与田间调查结果的误差为1.1%。表明本研究筛选出的引物CmS57和CmS59能够作为特异引物对甜瓜杂交种‘玉贵人’进行种子纯度检测,也说明应用SSR分子标记技术对甜瓜种子的纯度鉴定是可行的。     

基于油菜F1杂种种皮鉴别其母本的SSR检测方法及应用

甘蓝型油菜杂交种中雄性不育母本假杂种是影响种子纯度的关键。为了探索一种能准确鉴定油菜杂交种中母本假杂种的方法,利用CTAB小样法分别提取油菜F1杂种种皮和幼苗的总DNA,进而筛选种皮与幼苗的SSR谱带存在差异的引物,并用于鉴别杂交种制种样品中母本基因型假杂种。结果表明：F1杂种种皮的SSR电泳谱带与其母本相同,利用筛选到的多态性SSR引物对2个国审品种的6份杂交制种样品中母本基因型假杂种鉴定的结果与田间单株鉴定吻合率达98%以上,说明利用F1杂种种皮与幼胚存在多态性的SSR标记鉴定杂交种的母本基因型假杂种是可靠的。该技术方法可以克服目前油菜杂交种SSR纯度鉴定对亲本的依赖,为种子生产、管理和经营部门种子纯度质量的有效监控提供技术参考。     

西瓜新品种‘抗病948’和‘申抗988’杂交种纯度及其遗传特异性的SSR标记鉴定

本研究以西瓜杂交新品种‘抗病948’和‘申抗988’及其亲本种质为试验材料,采用SSR分子标记检测技术对其种子纯度及遗传特异性进行了鉴定研究。从38对SSR引物中筛选得到2对特异性引物(引物BVWS00209和BVWS00233)可以鉴定出‘抗病948’和‘申抗988’杂交种的纯度,结果表明:‘抗病948’与‘申抗988’的种子纯度分别为97%和98%。SSR标记鉴定结果与‘抗病948’和‘申抗988’的大田植物学形态特征鉴定结果符合率高达99%以上,并通过分析比较各亲本种质的SSR引物的多态性表现,构建出‘抗病948’和‘申抗988’亲本的DNA指纹图谱。本研究可为开展‘抗病948’和‘申抗988’西瓜新品种的杂交种纯度室内快速检测提供技术支撑。     

利用SSR标记鉴定甘蓝型油菜秦优11号种子纯度

本研究利用SSR分子标记技术,对甘蓝型杂交油菜秦优11号的双亲及F1之间的多态性进行了引物筛选和纯度检测技术研究。结果表明,在已筛选的150对引物中,有2对引物(BN12和BN1)表现为稳定的共显性,即杂种表现为父母本互补的带型。利用这2对引物对4四个杂交油菜样品秦优11号进行纯度鉴定,结果分别为79.1%、81.6%、85.5%和86.7%,对应样品田间正季鉴定结果为83.0%、84.8%、87.8%和89.5%,样本株数为200时,误差均在容许误差范围内,这表明筛选的SSR分子标记可以用于秦优11号杂交种纯度的快速、准确鉴定。     

应用SSR标记技术鉴定马铃薯杂交实生种子的纯度

以昆明市农科所提供的2003年收获的B16、B19、B20及其亲本CIP004（♂）、CIP008（B16♀）、CIP009（B19♀）、CIP010（B20♀）为材料,利用9对SSR引物对其进行分析,筛选出适合用于马铃薯杂交实生种子纯度鉴定的SSR位点引物并初步测定其纯度。分析结果表明,STM002和STM009引物的扩增产物呈现双亲互补的特征谱带,易于区分杂交种和亲本自交系,并初步确定B、B和B纯度分别为86%、90%和85%。     

湘杂棉SSR指纹图谱的构建及应用

 利用SSR分子标记方法对长江流域大面积推广种植的湘杂棉系列及其中部分湘杂棉亲本材料进行研究。筛选出了一批在湘杂棉及其亲本上具有较高多态性的SSR引物,构建了湘杂棉系列品种的指纹图谱,并将其应用于湘杂棉种子纯度的检测和未知种身份的识别。     

秋红萝卜SSR指纹图谱构建及其应用

本研究利用SSR分子标记技术,对6个秋红萝卜杂交种及其亲本构建指纹图谱,并根据上述材料对来源于萝卜标记数据库的160对SSR引物进行筛选,获得扩增稳定、条带清晰且在杂交种及其双亲间具有互补带型的引物37对。选取PR104、RSS987、RSS2491、RSS3328、RSS3540和RSS3830等6对引物构建了16份秋红萝卜材料的指纹图谱,实现了对秋红萝卜品种的快速精准分子鉴定。同时,利用引物PR104对来自制种基地的10户‘京红3号’杂交种进行纯度鉴定,结果显示该批次种子纯度为99.2%,与田间性状鉴定结果一致。本研究结果为秋红萝卜杂交种纯度鉴定提供了快速、可靠的方法,对品种保护及杂交种的进一步推广应用有重要意义。     

SSR标记技术在杂交水稻和杂交玉米种子质量鉴定中的应用研究

SSR标记具有快速、稳定、准确的技术优势,已经在品种鉴定等方面得到广泛的应用。为了鉴定生产用“两杂”种子样品的遗传多样性及纯度,利用36对SSR引物对39份杂交水稻样品进行了遗传多样性鉴定,其中2个样品为“同名异种”（遗传距离为0.11）,有2个样品疑似“异名同种”;利用33对SSR引物对36份杂交玉米样品进行了遗传多样性鉴定,同样存在“同名异种”和“异名同种”现象。在人为混杂的杂交水稻样本中,SSR标记检测值与实际混杂率u测验没有显著性差异;同时利用SSR标记和田间鉴定方法比较种子公司提供的10个杂交水稻样品纯度,尽管有3个样品SSR标记检测结果低于田间鉴定,但由于田间纯度鉴定以农艺性状为标准,遗传背景相似的单株难以区分,因此从加强种子质量监管角度考虑,SSR分子标记鉴定技术更为有利。