拯救鸡传染性贫血突变株对宿主细胞生长周期及凋亡的影响

目的：通过流式细胞术观察拯救CIAV M突变株对宿主细胞MSB1的生长周期及凋亡的影响。方法：拯救CIAV M突变株接于MDCC-MSB1细胞系（试验组）,并相应设立阴性组（正常SPF鸡肝脏细胞液）,阳性组（CUX-1标准毒株）,进行培养24hr-48hr。用PI及FITC Annexin V染色方法,用流式细胞仪测定宿主细胞生长周期及凋亡,并用SPSS13.0进行结果统计学分析。结果：接种拯救CIAV M突变株的宿主细胞G0/G1期的累积细胞百分率为59.33%±4.04%,S期为32.92%±3.65%,G2/M期为7.75%±3.11%,与阴性组相比,G0/G1期细胞累积百分率有所上升;与CUX组相比,G0/G1期有所下降,但结果经统计学分析,差异均不显著（P>0.05）。试验组宿主细胞凋亡率为37.00%±4.65%,与阴性组相比,凋亡率上升,统计学差异显著（P<0.05）;与阳性组相比,凋亡率下降,统计学差异显著（P<0.05）。结论：本次试验结果显示,经过VP3基因突变的CIAV M突变株,经过病毒拯救并回归本动物后,对宿主细胞MSB1的生长周期没有显著的抑制,但能引起宿主细胞的显著性凋亡,且凋亡程度与CUX-1引起的宿主细胞凋亡率相比有所降低。可以表明,通过VP3密码子移位的基因突变,能够将CIAV的致凋亡作用降低,从而相应降低病毒的致病性,为以后构建CIAV减毒疫苗株奠定理论基础。     

施用不同氮源对球等鞭金藻3011生长的影响

本实验通过以硝酸钠为氮源作为对照,研究施用氯化铵、硝酸铵和尿素对等鞭金藻3011生长的影响。从等鞭金藻的两个生长指标：藻细胞密度、pH来反映等鞭金藻3011的生长情况。经生物统计分析表明,在培养的前3天实验组和对照组的细胞密度差异性不显著（P>0.05）,第4天到后期阶段天两组的细胞密度差异性显著（P<0.05）。由此结果表明以硝酸铵做氮源时对球等鞭金藻3011生长的效果最佳,藻细胞密度显著高于其他氮源,其次为硝酸钠和尿素,氯化铵的效果最差（P<0.05）。     

大豆异黄酮对奶牛脾脏与肠系淋巴结中淋巴细胞增殖的影响

为了研究大豆异黄酮对奶牛脾脏与肠系淋巴结中淋巴细胞增殖与活化的影响,并揭示大豆异黄酮提高奶牛免疫性能的作用机理。试验采用6×2（浓度×时间）实验设计,各浓度梯度的大豆异黄酮 (100.00、25.00、5.00、1.00、0.25、0.05 μg/mL)与淋巴细胞共育培养48 h和60 h后,用酶标仪在570 nm处测得各孔的OD值。结果表明：（1）添加0.05~25 μg/mL大豆异黄酮能够促进奶牛肠系淋巴结中淋巴细胞的增殖,在添加量为5 μg/mL时达到极显著的促进作用,但大豆异黄酮添加剂量达100 μg/mL时显著抑制肠系淋巴结淋巴细胞的增殖;（2）100 μg/mL和25 μg/mL大豆异黄酮添加组极显著抑制奶牛脾脏淋巴细胞的增殖(P<0.01),而1 μg/mL浓度组则显著促进奶牛脾脏淋巴细胞的增殖(P<0.05),其余各浓度组对奶牛脾脏淋巴细胞有抑制作用,但差异不显著。     

甜菜碱对三黄鸡胚胎原代成纤维细胞生长和增殖的影响

【研究目的】研究了不同剂量甜菜碱对三黄鸡胚胎原代成纤维细胞微核和增殖的影响,在细胞水平上揭示甜菜碱对三黄鸡生长影响的机理,为甜菜碱在动物生产中的应用提供依据。【方法】体外分离培养三黄鸡胚胎成纤维细胞,在培养液中添加不同剂量甜菜碱,观察细胞生长及分裂。【结果】①在基础培养液（DMEM+15%NBS）中添加10mM,20mM甜菜碱对三黄鸡胚胎原代成纤维细胞微核率无显著影响;添加30mM,40mM,50mM甜菜碱显著提高三黄鸡胚胎原代成纤维细胞的微核率。②在基础培养液（DMEM+15%NBS）中添加10mM、20mM甜菜碱能促进三黄鸡胚胎原代成纤维细胞的生长和增殖,以在培养液中添加20mM甜菜碱时三黄鸡原代成纤维细胞增殖速度最快。添加50mM甜菜碱时抑制了三黄鸡胚胎原代成纤维细胞的生长和增殖。【结论】低剂量甜菜碱可促进三黄鸡胚胎原代成纤维细胞的生长和增殖,高剂量甜菜碱对细胞分裂构成危害。     

精氨酸和谷氨酰胺对猪小肠上皮细胞增殖的影响及机理探讨

摘要：为研究精氨酸和谷氨酰胺对猪小肠上皮细胞增殖的影响及并探讨精氨酸和谷氨酰胺在小肠上皮细胞内的相互转化关系,本试验在猪小肠上皮细胞培养液中添加不同剂量的精氨酸和谷氨酰胺,测定了细胞增殖、细胞中精氨酸合成代谢途径关键酶（P5CS、NAGS、NOS）基因mRNA表达量以及细胞上清液中精氨酸代谢产物（谷氨酰胺、精氨酸、精胺、一氧化氮）含量。结果表明：添加谷氨酰胺提高了细胞中NAGS基因mRNA表达量,有效提高了细胞中精氨酸含量,促进细胞了增殖; 添加精氨酸降低了细胞中P5CS和NAGS基因mRNA表达量,抑制了猪肠上皮细胞中谷氨酰胺向精氨酸转化,并且,高剂量精氨酸显著降低了细胞上清液中谷氨酰胺含量; 精氨酸与谷氨酰胺同时添加,对猪小肠上皮细胞增殖的促进效果优于两者单独添加。表明在猪小肠上皮细胞中,外源添加的精氨酸不能转化为谷氨酰胺,外源添加的谷氨酰胺可以转化为精氨酸并部分替代精氨酸发挥作用。关键词：猪 小肠上皮细胞 精氨酸 谷氨酰胺     

发酵豆粕对肉鸡生长性能和屠宰性能的影响

为了探索发酵豆粕对肉鸡生产性能和屠宰性能的影响。1日龄雏鸡250只,随机分为5组,每组5个重复,每个重复10只。Ⅰ组为空白对照组,饲喂基础日粮;Ⅱ组为抗生素对照组,在基础日粮中添加30 mg/kg的杆菌肽锌和6 mg/kg的硫酸抗敌素;Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组分别在基础日粮中用3%、6%、9%的发酵豆粕替代普通豆粕。结果表明：体增重以空白对照组（组Ⅰ）最低,较空白对照组,9%组（组Ⅴ）显著提高(P<0.05),其余各组极显著提高(P<0.01);料重比6%组（组Ⅳ）最低,与空白对照组差异极显著(P<0.01),其他各组间差异均不显著(P>0.05);成活率空白对照组最低,抗生素组（组Ⅱ）、9%组与空白对照组差异极显著(P<0.01),6%组差异显著(P<0.05)。6%组半净膛率显著高于空白对照组和抗生素组(P<0.05);各组全净膛率均高于空白对照组(P<0.05),6%组差异极显著(P<0.01);3%组（组Ⅲ）腿肌率最高,与空白对照组差异极显著(P<0.01),其他各组间差异不显著(P>0.05)。试验结果表明,肉鸡配合饲料中用6%发酵豆粕替代普通豆粕最为适宜,可提高肉鸡生长性能,极显著降低料重比,但与抗生素组相比差异不显著。     

不同氧气浓度对绵羊体外受精胚胎凋亡的影响

为了研究培养环境中的氧气浓度对绵羊体外受精胚胎发育的影响。比较了低氧环境(5%O2)和高氧环境(20%O2)中绵羊体外受精胚胎的发育能力和凋亡发生情况,同时利用Real-time PCR技术检测这两种氧气浓度下绵羊体外受精胚胎中凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达水平。结果表明：在这两种氧气浓度下发育的绵羊体外受精胚胎,细胞凋亡信号都起始于16-细胞期,且在胚胎各发育阶段发生凋亡的比率没有明显差异,但低氧环境组的囊胚发育率和囊胚细胞数都显著高于高氧环境组的（分别为45.9%、134;14.6%、106,P＜0.05）,且其囊胚细胞的凋亡指数也显著低于高氧环境组（分别为0.053、0.066,P＜0.05）;PCR的研究结果表明：不论是高氧环境还是低氧环境,在绵羊体外受精胚胎的各阶段都能检测到Bax和Bcl-2的表达。而且在囊胚阶段,低氧环境下的Bcl-2基因表达量明显高于高氧环境下的。低氧环境可以抑制绵羊胚胎细胞的凋亡,更有利于绵羊胚胎的发育。     

不同浓度赖氨酸对猪IEC碱性氨基酸转运载体mRNA表达的影响

本研究通过建立猪肠粘膜上皮细胞（Intestinal epithelial cells, IEC）原代培养的方法,研究了赖氨酸对体外培养的猪小肠粘膜上皮细胞碱性氨基酸转运载体mRNA表达的影响。用机械刮取初生仔猪小肠粘膜加胶原酶Ⅱ消化的方法,成功地在体外培养了新生仔猪IEC;分别用浓度为0.5 mM、2 mM、8 mM赖氨酸处理细胞96 h,提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR方法,检测了碱性氨基酸转运载体在不同处理细胞中的表达丰度。结果表明：高浓度的赖氨酸对CAT-1 mRNA的表达有上调作用,差异极显著(P<0.01),并且呈剂量依赖效应;不同浓度的赖氨酸对CAT-2 mRNA的表达影响不大,8 mM和2 mM赖氨酸组CAT-2 mRNA的表达丰度均有低于0.5 mM的趋势,但二者之间差异不显著(P>0.05);不同浓度的赖氨酸对y+LAT1 mRNA表达影响差异不显著(P>0.05);高浓度的赖氨酸可提高4F2hc mRNA的表达;0.5 mM和2 mM赖氨酸组4F2hc mRNA的表达丰度均低于8 mM,且差异显著(P<0.05);0.5 mM和2 mM赖氨酸组之间差异不显著(P>0.05)。     

不同NDF水平开食料对羔羊生长轴及十二指肠生长相关基因表达的影响

旨在研究不同NDF水平开食料对羔羊生长轴及十二指肠生长相关基因表达的影响，以期为羔羊开食料适宜NDF水平提供参考。选用36只湖羊公羔，随机分为15%和25%NDF水平组。56日龄时，每组选择6只羔羊屠宰，称量组织器官质量，并测定相关基因的表达量。结果表明：不同NDF水平开食料对组织器官的质量和指数均无显著影响(P>0.05);NDF水平15%组羔羊下丘脑生长激素释放激素(GHRH)、肝脏胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、十二指肠IGF-1和十二指肠胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)表达量均显著高于25%组(P<0.05);NDF水平25%组垂体生长激素(GH)和十二指肠生长激素受体(GHR)表达量极显著高于15%组(P<0.01);羔羊平均日增质量与下丘脑GHRH表达量极显著负相关(P<0.01)、与肝脏GHR、十二指肠IGF-1表达量显著负相关(P<0.05),与垂体GH、十二指肠GHR表达量显著正相关(P<0.05);垂体GH与肝脏GHR、IGF-1、十二指肠IGF-1、IGF-1R表达量显著或极显著负相关(P<0.05或P<0...     

猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2的克隆表达

为了研究不同时间段细胞MHC分子表达的变化情况,从分子水平上说明E2基因与NHC之间的关系,本研究克隆了中国猪瘟病毒强毒石门毒株E2基因,构建了pcDNA3.0真核表达质粒P-E2基因。限制性内切酶进行双酶切和序列分析鉴定E2基因插入位置、方向和读码框架的正确性。构建成功的真核表达质粒P-E2,用脂质体转染方法瞬时转染进行体外细胞表达,转染后24,48 h后用Western-blot和间接免疫荧光技术检测P-E2基因质粒在PK-15细胞内的表达情况。结果表明：用His抗体进行间接免疫荧光检测发现E2基因得到表达,并定位于细胞浆,同时Western-blot检测后发现重组质粒P-E2转染后也在PK-15细胞中得到了表达。为进一步研究猪瘟病毒与宿主细胞之间的关系,病毒的致病机理提供了基础材料。     

家鸽消化道生长抑素免疫活性内分泌细胞的研究

摘要: 应用卵白素-生物素-过氧化物酶复合物( avidin-biotin-peroxidase complex,ABC)免疫组织化学方法对家鸽（columbae livia domesticus）消化道生长抑素细胞的分布密度和形态学特点进行了观察。结果表明: 生长抑素(somatostatin , 简称SS)细胞主要分布于胃体及其以下部位, 其中胃体部的分布密度最高,小肠各段的分布密度较低,且小肠各部位间差异不显著。而在食管和嗉囊中均未发现ss细胞 。SS细胞的形态多样,主要有圆形﹑椭圆形和锥体形等。主要分布在上皮细胞基部、上皮细胞之间和腺泡上皮细胞之间。通过形态学观察认为：家鸽消化道生长抑素细胞的分布与其消化道各部位的功能有关。     

豌豆根瘤侵染细胞发育中造粉体的研究

透射电镜研究表明,在豌豆根瘤侵染细胞发育过程中,造粉体的形态结构处在变化之中.在发育早期,造粉体较多,分布在细胞壁附近.它的基质很少,多含有呈长梭形的、电子密度非常低的淀粉粒,并有一些电子密度较高的条带结构.随着细胞的发育,造粉体逐渐移至胞间隙周围,不断变小,切面近似椭圆形或圆形.进一步发育时,造粉体中的淀粉粒越     

豌豆根瘤发育中侵染细胞核的超微结构变化

用透射电镜研究了豌豆根瘤发育中侵染细胞的核超微结构变化。早期发育的侵染细胞核较大，近似圆形或椭圆形，核膜开始内陷。随着细胞的发育，细胞核变小，形状趋向扁平，核膜内陷增加，逐渐出现浓的染色质。在细胞衰老后，细胞核再度减小，核膜内陷加剧，浓的染色质增多。在早期的解体细胞中，虽然细胞质、细胞器和类菌体已经     

仔猪感染猪等孢球虫后T细胞亚群的动态变化

为了研究仔猪感染猪等孢球虫后T细胞亚群的变化规律,应用纯种猪等孢球虫孢子化卵囊人工感染9头6日龄仔猪,分别检测了感染前1d和感染后1、3、6、9、11d(DPI)外周血中CD3 、CD4 、CD8 T细胞。结果显示,DPI3,CD3 、CD4 T细胞增加,之后下降,但差异均不显著(p>0.05);CD8 T细胞在DPI6增加,DPI 9达峰值(P<0.05)。CD4 /CD8 值在DPI 6下降,DPI 11达到最低点。表明DPI 3感染仔猪的免疫功能有所增强,而DPI 8后仔猪免疫功能受到抑制。     

高纯度牦牛子宫内膜基质细胞的分离培养及其鉴定

为获得高纯度的牦牛子宫内膜基质细胞,对牦牛子宫内膜使用胶原酶消化,分离基质细胞进行体外培养,研究其生长特性,并对其进行免疫细胞化学染色鉴定。结果,牦牛子宫内膜在37℃条件下,以2 g/L的胶原酶Ⅱ消化2.5 h,更换新鲜消化液继续消化2.5 h,消化效果好;用74 μm滤网过滤,再经400 r/min离心和自然沉降去除上皮细胞,可分离得到大量的单个细胞,所得细胞贴壁后可见梭形和多角形2种形态,免疫细胞化学染色显示这2种形态的细胞均表达波形蛋白,阳性率可达95%以上,不表达角蛋白。结果证明已成功分离到高纯度的牦牛子宫内膜基质细胞。     

高粱幼叶细胞悬浮系的建立

以高粱无菌苗幼叶为试验材料,对颗粒状胚性愈伤组织的获得、细胞悬浮系的建立及影响悬浮细胞生长的主要因素进行了研究。结果表明：幼叶在MS（Murashige and Skoog）+2mg/L 2,4-D培养基上诱导出的愈伤组织,经2~3次继代筛选后获得了浅黄色、颗粒状胚性愈伤组织;胚性愈伤组织接种于液体培养基中,于25±1℃、黑暗条件下,经45~60d的悬浮震荡培养建立了高质量的细胞悬浮系,细胞生长曲线呈“S”型,细胞密度可达6.45×10 ⁵~5.08×10 ⁶个/mL以上,活细胞率可达72.76%,近圆细胞率可达87.50%;培养基的基本成分、激素种类和水平对悬浮细胞生长状态有很大的影响,相比1/2MS培养基,MS培养基为适宜的培养基,2,4-D对保持细胞系的稳定增殖至关重要,适宜的浓度为1mg/L;培养液中加入0.5mg/L KT或6-BA会造成悬浮液褐化,影响悬浮细胞的生长;最适宜的细胞悬浮培养基为L2培养基（MS+1mg/L 2,4-D,30g/L蔗糖,pH5.8）,震荡培养转速为110~120r/min,继代周期为7d,新旧培养基的接种比例为2∶1。     

马立克氏病肿瘤细胞表面抗原的提取与鉴定

用MDVGA株感染1日龄SPF雏鸡,饲养至发病后获得MD肿瘤细胞,采用木瓜蛋白酶消化法从MD肿瘤细胞上提取马立克氏病肿瘤相关的表面抗原,经间接荧光抗体染色和间接ELISA鉴定,证明获得的粗提物中含有马立克氏病肿瘤相关的表面抗原,为进行马立克氏病肿瘤相关的表面抗原的进一步研究奠定了基础。     

猪附红细胞体感染BALB/c小鼠试验研究

为了解现阶段延边地区猪附红细胞体的致病性。本试验以注射地塞米松和摘除脾脏的BALB/c小鼠为实验动物,以腹腔注射方式人工感染猪附红细胞体,通过临床症状观察、血液涂片姬姆萨染色镜检及PCR方法对BALB/c小鼠感染猪附红细胞体情况进行了鉴定,并进行了血液常规检测。结果表明：注射地塞米松组、摘除脾脏组和正常感染组BALB/c小鼠在感染后8~10天相继达到高峰,正常感染组BALB/c小鼠在感染后第24天猪附红细胞体消失,注射地塞米松组在感染后第32天消失,而摘除脾脏组在试验结束时仍具有较高的感染率。经血液常规检测,各组BALB/c小鼠在感染猪附红细胞体后,白细胞总数显著升高(P<0.01),淋巴细胞总数、红细胞总数、血红蛋白含量均显著下降(P<0.05),红细胞比容显著下降(P<0.01)。本试验证实猪附红细胞体对低免疫力的BALB/c小鼠具有一定感染性,并表现出典型临床症状。     

甘蔗茎解剖生理研究Ⅰ.不同品种茎贮藏组织解剖特征及其对糖分的影响

用细胞离析法和冰冻切片技术,研究了10个甘蔗品种的茎贮藏细胞和维管束的解剖特征。甘蔗不同品种茎贮藏细胞体积存在极显著差异。所有品种茎贮藏组织皆有柱状和球状两种贮藏薄壁细胞,高糖品种这两种细胞各约占50%。茎贮藏细胞体积跟蔗糖含量存在极显著负相关、跟锤度存在显著负相关,尤以后期的细胞体积跟蔗糖含量的负相关关系     

胎生蜥蜴消化道生长抑素免疫活性内分泌细胞的研究

为研究胎生蜥蜴消化道内生长抑素的分泌对动物整体营养及代谢水平的影响,应用免疫酶标技术 (ABC)法和胃肠激素抗血清,对胎生蜥蜴（Lacerta vivipara）消化道生长抑素细胞进行免疫组织化学定位研究和形态学观察。结果显示,生长抑素（SS）细胞分布广泛,除食管和直肠未检测到,整个消化道中均有分布,胃体和幽门分布密度最高,回肠最少,总体来说在胎生蜥消化道中SS细胞的分布密度胃部较高而小肠部较低。SS细胞以圆形和锥体形为主,还有梭形和椭圆形,它们分布于消化道粘膜、消化上皮细胞基部和腺泡上皮之间。根据其内分泌细胞的结构形态可以认为胎生蜥蜴消化道内的内分泌细胞兼具内分泌与外分泌2种功能。胎生蜥蜴消化道SS细胞的分布型与其他内分泌细胞抑制协调相关与其取食方式、食物成分及生活环境相关。