利用BNYVV CP蛋白研制甜菜坏死黄脉病毒诊断试剂盒

将ＢＮＹＶＶ ＣＰ蛋白作为抗原，免疫家兔制备出了特异性强的ＢＮＹＶＶ抗血清，采用微量沉淀法测定其效价为１：１２０４。用改进的戊二醛二步法将ＨＲＰ酶标记到纯化的抗体上，得到了高质量的酶标抗体。在国内首次研制便于携带、易于操作和具有实用价值的ＢＮＹＶＶ ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒。     

不同剂量CpG-ODN佐剂与ALV-Jgp85重组蛋白联合免疫诱导种母鸡血清抗体和母源抗体的比较

为比较不同剂量非甲基化寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)免疫佐剂与J亚群禽白血病病毒(Subgroup J Avian leukosis virus,ALV-J)gp85重组蛋白联合免疫后诱导母鸡血清抗体和母源抗体的效果,利用原核表达系统制备包含gp85基因的重组蛋白作为免疫原,与不同剂量CpG免疫佐剂联合接种成年海兰褐父母代种母鸡(Gallus domesticus),首免后2周加强免疫一次,于接种前和接种后每周动态检测血清抗体,接种后部分鸡只每周收集种蛋,检测卵黄抗体。结果显示,利用原核表达系统制备的gp85重组蛋白能与ALV-J单克隆抗体JE9特异性结合;与3个不同剂量CpG联合免疫成年种母鸡后均诱导鸡只产生一定效价的血清抗体,首免后28 d效价最高;所诱导的卵黄抗体效价首免后第4周最高。其中以50μg/羽剂量的CpG联合重组蛋白接种鸡只诱导的血清抗体和卵黄抗体效价和阳性比例最佳,100μg/羽剂量的CpG次之。3个不同剂量的CpG与ALV-J gp85重组蛋白联合免疫均能诱导母鸡产生一定的血清抗体和卵黄抗体,50μg/羽剂量的CpG联合免疫的效果明显优于较高剂量的免疫效果。本研究为使用CpG联合ALV-J gp85重组蛋白诱导母鸡产生母源抗体,阻断ALV-J早期感染提供科学依据。     

含禽源启动子的禽流感病毒核蛋白表达载体的构建及其免疫原性的检测

为了研究禽流感病毒核蛋白（nucleoprotein,NP）在鸡体内所引起的免疫反应,将其NP基因从重组质粒pVAX-NP上酶切后亚克隆至含禽源启动子的真核表达载体pCAGGS中,经筛选鉴定后获得重组子pCAGGS-NP,将鉴定正确的阳性重组子体外转染真核细胞,利用间接免疫荧光法检测目的基因的瞬时表达;采用腿部肌肉注射途径将重组子免疫SPF鸡,利用ELISA检测免疫后血清抗NP蛋白抗体效价。结果表明,该重组子无论在体外还是体内均能正确表达禽流感NP蛋白,且所表达的蛋白均具有良好的免疫原性。     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因在大肠杆菌中的表达及其抗原性的初步鉴定

利用基因重组技术将鸡传染性支气管炎病毒（IBV）S1基因分段（A和B段）克隆到pGEX—6p-1载体中，用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳结果显示有明显的融合蛋白表达条带。通过IBV特异性抗体的Western blot检测，两段表达产物均能与抗体发生特异性反应，证明表达产物具有部分抗原性。用Glutathione Sepharose 4B纯化出A段和B段的GST融合蛋白。将纯化得到的融合蛋白免疫家兔。连续免疫3次，将得到的抗体与200 TOCID50（气管环半数感染）/0．1mL病毒工作液在37℃温育1h进行TOC试验。经计算A段抗体的50%血清中和终点为1：18，而B段抗体的50％血清中和终点为1：53，表明这两段的表达产物具有较好的免疫原性，B段表达产物更具有良好的抗原性，适合作为免疫抗原和诊断抗原，具有一定的临床应用价值。     

水牛免疫奶的研究

以人用的疫苗强化免疫奶水牛和奶牛之后，分泌的免疫乳中，甲肝抗体的相对活性效价峰值维持了1周。峰值期的最大相对活性效价值在1．7左右，甲抗的相对活性效价在完成全程免疫之后。除峰值期外，维持在一个较低的水平。相对活性效价在1．2～1．5之问变动。霍乱孤菌抗体、伤寒杆菌抗体、痢疾杆菌抗体在乳汁中出现的时间要比甲抗出现的时间迟，且维持的时间很短。霍乱孤菌抗体和伤寒杆菌抗体在乳汁中能维持5周左右，痢疾杆菌抗体在乳汁中维持的时间为l周。以奶水牛免疫乳的抗体提取物进行抑菌试验，免疫乳中的抗体表现出较强的抑菌效果。当提取物中的免疫球蛋白(Ig)以终浓度为1．0mg／mL加入到霍乱孤菌和伤寒杆菌的培养液中时，能有效地抑制霍乱孤菌和伤寒杆菌的生长。     

鸡γ干扰素对H5亚型禽流感疫苗的免疫增强作用

利用表达鸡γ干扰素的重组鸡痘病毒(rFPV-IFN-γ)与表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒(rFPV-HA)或灭活疫苗联合应用，接种SPE鸡、无母源抗体商品鸡和含有母源抗体商品鸡，研究鸡γ干扰素的免疫增强作用。结果发现，rFPV-IFN-γ和rFPV-HA联合应用诱导的HI抗体应答水平同rFPV-HA单独免疫相近；rFPV-IFN-γ和灭活疫苗联合应用后HI抗体应答水平略低于灭活疫苗单独免疫组。攻毒后，对于SPF鸡和无母源抗体商品鸡，rFPV-IFN-γ与rFPV-HA或灭活疫苗联合免疫诱导的保护率同相应疫苗单独免疫相当，均为95％～100％；对含有母源抗体的商品鸡，10^6PFU的rFPV-HA与10^5PFU的rFPV-IFN-γ联合免疫组保护率(33．5％)高于rFPV-HA单独免疫组(11．4％～16．8％)，而其它剂量组合的rFPV-HA与rFPV-IFN-γ联合应用不能提高免疫保护效力；rFPV-IFN-γ与灭活疫苗联合免疫含母源抗体商品鸡诱导的保护率同灭活疫苗单独免疫组相近。结果表明，rFPV-IFN-γ不能促进疫苗诱导的HI抗体应答；适当剂量组合的rFPV-HA与rFPV-IFN-γ联合免疫含有母源抗体的商品鸡，可提高免疫保护效力，发挥免疫增强作用。     

抗鸡贫血病毒结构蛋白单克隆抗体制备及其对应抗原表位分析

以纯化的原核表达的鸡贫血病毒结构蛋白为抗原，免疫6-8w的雌性Balb/c鼠, 经过三次免疫后，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，以纯化的蛋白为抗原进行ELISA检测，将阳性细胞孔经过三次有限稀释，共获得6株能稳定分泌特异性抗体的阳性细胞株。间接免疫荧光试验证实6株单抗可以与鸡贫血病毒感染的MDCC-MSB1细胞发生特异性反应，Western blot结果显示单抗与杆状病毒表达的VP1重组蛋白可以发生特异性反应。利用单克隆抗体亚型鉴定试剂盒进行亚型鉴定，结果表明6株单抗均为IgG1亚型，且所有单抗的轻链均为κ链。用单克隆抗体对分段表达的VP1蛋白进行免疫印迹分析，初步鉴定了筛选出的单抗所对应的抗原表位，其中有四株单抗识别的表位位于VP1 218-274位氨基酸之间，另外两株单抗识别的表位分别位于275-301位、324-369位氨基酸之间。     

鸡传染性喉气管炎的研究 Ⅰ．应用间接ELISA法检测鸡传染性喉气管炎病毒抗体

采用原代鸡胚肾（ＣＥＫ）细胞增殖鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ），并用ＰＥＧ－２００００粗提病毒蛋白抗原，建立了用来检测抗ＩＬＴＶ抗体的间接酶联免疫吸附试验。应用该法检测从广西９个大、中型鸡场采集的２３９份未免疫鸡血清样品，结果血清样品阳性率为４５．１９％，各个鸡场均为阳性场（１００％），首次证实广西存在ＴＬＴＶ抗体阳性鸡群．     

玉米和花生中黄曲霉素B1酶联免疫快速分析方法

将黄曲霉素Ｂ１衍生成胺氧乙酸肟，然后分别同牛血清白蛋白和辣根过氧化物酶进行化学交联而制得结合物。前者用来免疫新西兰大白兔，后者用作免疫反应的示踪物。将所得抗体和示踪物在免疫反应中进行浓度优化，开发出ＡＦＢ１酶联免疫分析直接竞争抑制法。     

免疫电镜技术在植物病毒研究中的应用

免疫电镜技术通过将免疫学与超微结构形态学相结合,利用抗原—抗体的专化性反应对抗原或抗体进行精确定位。介绍免疫电镜技术的原理、发展阶段及其在植物病毒研究中的应用。