禽流感病毒的免疫研究进展

禽流感(Avian In?uenza, AI)是由A型流感病毒引起的一种急性的禽类传染病。1878年首次在意大利发现该病后,慢慢从世界各地都开始出现了各种由不同毒株而引起的禽流感,导致禽类生产性能显著降低,甚至引起死亡。禽流感病毒(Avian In?uenza Virues, AIV)的暴发和流行给人类和家禽业都带来了巨大的健康危害及经济损失,有研究发现,不同种类的家禽对于相同亚型的AIV会产生不同的致病性,导致不同的临床表现。AIV的亚型较多,并且不同亚型之间也没有交叉防护作用,阻碍了AI的防治进程。基于此,为有效应对禽流感病毒,分析禽流感病毒的免疫研究进展。     

禽流感病毒的分子生物学特性及其检测技术的研究进展

禽流感（AI）是由A型流感病毒引起的一种禽类感染和/或疾病综合征,在许多国家给家禽养殖业带来巨大的经济损失,而且威胁到人类的健康和安全.从禽流感病毒（AIV）的分子生物学特性及检测技术的最新研究进展进行了概述,重点介绍了禽流感诊断技术的最新研究及进展.     

一株对小鼠具有高致病性的H5N1亚型禽流感病毒的拯救

禽流感病毒(Avianinfluenzavirus)正在逐渐获得突破种间屏障感染哺乳动物的能力,揭示其获得此种能力的分子机制已经成为禽流感病毒的研究热点。A/Chicken/Guangdong/04(H5N1)是一株高致病性禽流感病毒,同时对BALB/c小鼠也具有高致病力。实验通过反向遗传操作技术对该病毒进行拯救,获得了拯救毒R-A/Chicken/Guangdong/04(R-CG)。R-CG与其亲本毒A/Chicken/Guangdong/04(W-CG)在胚半数感染量(EID50)、细胞培养半数感染量(TCID50)、对SPF鸡和BALB/c小鼠致病力等生物学特性保持一致。即R-CG与W-CG对鸡都为高致病力,静脉接种指数分别为2.88和2.91;R-CG与W-CG一样,以106EID50鼻腔感染BALB/c小鼠后,均能引起小鼠死亡,在小鼠脑、肺、肾和脾脏中都能分离到病毒,说明拯救的病毒与亲本毒一样,都可在小鼠体内有效复制,对小鼠具有高致病性。本实验成功地拯救了A/Chicken/Guangdong/04,拯救病毒R-CG可作为背景毒株,为研究禽流感病毒突破种间屏障感染哺乳动物的分子机制奠定了实验基础。     

H5N1亚型高致病性禽流感病毒A/Duck/FuJian/01/02株感染性克隆构建

摘 要：1999-2002年本试验室从我国南方健康鸭体内分离到21株H5N1亚型禽流感病毒，对其进行系统地生物学特性和遗传演化分析发现，其中A/Duck/FuJian/01/02(简DKFJ)和A/Duck/Guangxi/53/02(简DKGX) 属于同一基因型, 对鸡都呈高致病性，但对哺乳动物模型Balb/c小鼠的致病性明显不同: DKGX对小鼠呈低致病性（MLD50>106.5），DKGX株反向基因操作系统本试验室已经建立，而DKFJ对小鼠呈高致病性（MLD50<100.5）。为了研究这两株病毒对哺乳动物模型Balb/c小鼠致病性差异的分子机制，本研究构建了对DKFJ的8质粒反向基因操作系统，并通过细胞转染技术成功拯救了该病毒（R-DKFJ）。R-DKFJ在对哺乳动物模型Balb/c小鼠的致病性保持了与亲本野生毒（W-DKFJ, MLD50<100.5）一致的生物学特性，并且对小鼠呈全身感染，即106EID50鼻腔感染小鼠后第三天在脑、脾、肾、肺脏等脏器检测到病毒。DKFJ反向基因操作系统的成功建立为阐明H5N1亚型禽流感病毒对哺乳动物模型Balb/c小鼠的致病机制等方面奠定了基础。     

家禽呼吸道疾病的治疗方式研究论述

家禽的呼吸道疾病具有发病快、传染性强、死亡率高等特点,在实际养殖过程中,呼吸道疾病一旦发生,会在某个区域内被迅速传染开,且难以治愈。禽类的呼吸道疾病主要有大肠杆菌病、传染性喉气管炎、禽流感等,这些疾病一般都是混合感染的形式发生的,所以在对禽类进行治疗时,一定要准确地判断,结合实际,采取适当的措施进行治疗和预防。本文简述禽类呼吸道疾病发生的原因和预防措施。     

新城疫病毒和减蛋综合征病毒同鸭胚增殖的研究

鸭源新城疫病毒 ( NDV D10 )和减蛋综合征病毒 ( EDSV)可以在鸭胚中同时良好增殖 ,两种病毒的血凝价分别与单独接种时一致 ;同胚增殖病毒对鸭胚或 SPF鸡胚的感染能力和致病性分别与单独接种组无显著差异 ;利用同鸭胚增殖病毒的尿囊液制备的二联油乳剂灭活疫苗接种免疫鸡可以分别抵抗 NDV强毒和 EDSV强毒的攻击     

两株H3N8亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性

H3N8亚型流感病毒宿主范围广泛,除了可以感染野鸟和家禽外,还可以感染多种哺乳动物,并且H3N8亚型流感病毒跨物种传播的现象也时有发生,对养殖业和人类生命健康都具有重要威胁.为了解H3N8亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的生物学特性,本研究对2013年贵州省分离的两株H3N8亚型AIV(A/duck/Guizhou/S 1092/2013(H3N8)(简称DK/GZ/S1092/2013)和A/duck/Guizhou/S1145/2013(H3N8)(简称DK/GZ/S1145/2013))进行了遗传演化分析、小鼠(Mus musculus)感染性实验和受体结合特异性实验.遗传演化分析结果表明,这两株病毒具有明显的遗传多样性,除了血凝素(hemagglutinin,HA)基因位于同一个进化分支外,其他7个基因片段均具有不同起源.感染性实验结果表明,这两株病毒不需要提前适应就可以在小鼠的肺脏和鼻甲内有效复制,对小鼠呈现低致病性,小鼠感染病毒后未出现明显临床症状,目.DK/GZ/S1092/2013仅引起小鼠的体重下降1.8％,DK/GZ/S 1145/2013仅引起小鼠的体重下降0.8％.受体结合特异性分析结果表明,这两株病毒同时具有结合禽源唾液酸(sialic acid,SA) α2,3-Gal受体和人源SA α2,6-Gal受体的能力,具有感染人类的潜在风险.本研究通过对两株H3N8亚型AIV的生物学特性进行系统分析,发现H3N8亚型AIV具有感染哺乳动物的潜在风险.研究结果对于H3N8亚型AIV的综合防控具有重要的指导意义.     

环境危机,“继续生存还是自我毁灭”

世界范围暴发的禽流感疫情愈来愈受到全世界的关注，人们的健康可能会受到极大威胁，各国政府及时有力的措施，目前已经使禽类疫情得到了很大程度的控制，所有与之相关的科研和预防工作都在积极主动地进行着，与之对比，在2003年SARS出现的时候，曾一度引起恐慌。可以设想，如果疫情没有受控，那么人类的生存安全将面临一场怎样的挑战。从更高层次的意义上来说．病毒的传播变异、疫情的扩散是人类的生存环境发生了变化而威胁到了人类的生存和发展，因而是—个环境安全问题。     

禽流感病毒H5亚型金标快速诊断技术方法的建立及试剂盒研制

应用纯化禽流感病毒(AIV)H5抗原免疫Balb/c小鼠,得到2株配对良好的抗AIV H5单抗;采用金标免疫层析法制备AIV H5亚型金标快速诊断试剂盒,并对试剂盒性能进行评价.实验结果表明,AIV-H5金标试剂盒与AIV H5以外其它亚型及其它禽类病毒不发生交叉反应,其灵敏度达1/27,稳定性良好:试剂盒检测人工感染AIV H5的鸡脏器组织,结果除心脏、泄殖腔拭子和喉拭子外,其余脏器均呈阳性,与鸡胚病毒分离培养结果相符;田间试验结果与荧光RT-PCR试剂盒检测符合率达100%.     

信息广场

<正>1欧洲:三国出现禽流感其家禽遭韩国全面禁止进口韩国农林畜产食品部(以下简称"农食品部")11月18日表示,近期德国、荷兰、英国等欧洲国家出现高致病性禽流感疫情,因此全面禁止进口这些国家的禽类及其产品。禁止进口对象包括鸡肉、鸭肉等畜产品以及鸡、鸭、鹦鹉等宠物鸟。2巴西:2020年前全球咖啡需求年均增长2.5%巴西《环球网》11月19日消息,国家咖啡组织(OIC)预测,受中国、俄罗斯等国强劲需求推动,预计未来6年全球咖啡需求年均增长2.5%。2020年的需求量将达到1.75亿袋(每袋60公斤),2014年全球需求量为1.4945亿袋。     

噬菌体靶向消减土壤生物污染的制约因素及提升策略

土壤中存在能够威胁植物、动物和人体健康的病原细菌，消减这类土壤生物污染是一体化健康（One Health）的重要任务。因具有宿主细菌专一性强、侵染效率高、环境扰动性小等特性，噬菌体成为生态消减土壤病原细菌生物污染的重要手段。然而，由于土壤生物和非生物环境的复杂性，提升噬菌体消减土壤生物污染的效果和稳定性仍是当前的重大挑战。本文从噬菌体在土壤中的生存以及与病原细菌互作等过程着手，分析总结影响噬菌体阻控土壤生物污染效果和稳定性的主要因素：1）噬菌体的宿主细菌谱和种群数量，2）土壤病原细菌的多态性，3）影响噬菌体与土壤病原细菌互作的环境因素。通过构建高效噬菌体鸡尾酒、改善噬菌体产品形式和优化噬菌体施用技术等措施，建立提升阻控土壤生物污染效果和稳定性的策略，为完善土壤生物污染噬菌体疗法提供科学支撑。     

H5N1亚型AIVHA抗原表位的高效表达及其抗原活性分析

血凝素（hemagglutinin,HA）蛋白是禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）的一个重要表面抗原性蛋白,在疾病诊断和防治上有重要意义。本研究为了探讨一种更为简便有效的HA重组蛋白表达途径,利用生物信息学软件,对H5N1亚型AIVHA基因编码的氨基酸序列进行分析,在分析其在大肠杆菌中的密码子偏好性、稀有密码子分布情况及有关蛋白的抗原性等重要特性后,构建了HA抗原表位重组表达质粒pET-32a（＋）-HA。经测试,该重组质粒在1mmol/LIPTG诱导剂作用下诱导过夜,能在大肠杆菌Rosetta-gami B（DE3）中高效表达,并得到48.1kD大小的目的重组表达蛋白。重组蛋白用6×His-tagged protein纯化试剂盒纯化后,与福氏佐剂等量混合制备成抗原,以200μg/鸡的剂量皮下注射2月龄SPF鸡3次,采血分离血清。Western-Blot试验结果表明,该重组表达蛋白能分别与所制备的高免鸡血清及H5N1亚型AIV阳性血清发生特异性反应,在硝酸纤维素膜上出现特异性杂交带。说明本试验研究的HA抗原重组表达蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,保留了HA蛋白的抗原活性,提示该重组蛋白在H5亚型AIV的防治技术研究中具有重要的实际应用价值。     

耐热链霉菌的分子育种改造

BIB0830是一株可将泰乐菌素转化为乙酰异戊酰泰乐菌素（AIV）的耐热链霉菌工业菌株。以pIJ8600为载体分别构建了acyB1-B2基因整合型表达载体pBIB425和带红霉素突变启动子ermEp*的红霉素抗性ermE基因整合型表达载体pBIB304。通过大肠杆菌-链霉菌属间接合转移分别将pBIB425、pBIB304和pBIB308（耐热链霉菌的nsdA基因中断载体，本实验室保存）导入工业菌株BIB0830，抗性筛选分别得到接合子BIB425、BIB304和BIB308。PCR验证均为阳性克隆。摇瓶发酵结果表明：与出发菌株BIB0830相比，BIB425和BIB308泰乐菌素转化率分别提高了14%和22%，BIB304无明显影响。     

解释结构模型在中国疯牛病风险识别中的应用研究

疯牛病是一种严重危害牛类健康的疾病，它的感染因子可以传染给人类。因此这种疾病也威胁着人类的健康。我国目前还没有检测到疯牛病的存在。本文利用解释结构模型对疯牛病风险因素进行了定性评估。通过对模型进行运算求解得出清晰的结论：评估国反刍动物饲料中含有PrP^BS因子、评估国羊只患痒病和评估国牛患疯牛病包含在同一强连通域。     

堆肥中大肠菌群等粪便污染指标菌的残留状况调查

从日本九州地区23处堆肥化设施采集了以牛粪、鸡粪、污泥和餐厨垃圾为原料的堆肥试样29个,调查了大肠菌群等粪便污染指标菌的残留状况。结果表明,使用DESO培养基有11个试样被检出大肠菌群,检出率达38%,菌数在102~106 cfu.g-1的范围。使用API 20E鉴定系统对4个试样中的21个分离纯化菌株进行了菌种鉴定,发现有大肠菌群属的Escherichia coli、Escherichiavulneris、Pantoea sp.和Buttiauxella agrestis,以及非大肠菌群属的Serratia marcescens等肠内细菌科细菌。采用血清凝集试验对5株E.coli的病原性检测结果均为阴性。进一步针对6处堆肥设施的堆肥发酵过程中大肠菌群的消长追踪发现,大肠菌群数从原料到成品出现了逐渐减少直至消失、暂时消失、未完全消失、完全未检出4种走势,显示即使堆肥发酵温度在60℃以上,大肠菌群也有可能通过交叉污染等途径残留在堆肥成品中。     

奶牛场恶臭污染物扩散规律研究

以山东省某县中等规模的3个奶牛养殖场为试验场地,以臭气浓度为监测指标,在下风向距恶臭排放源不同距离处设置采样点,对规模化奶牛养殖场恶臭污染物的下风向扩散规律及影响扩散规律的部分气象因素进行了研究,并通过数据回归得出了恶臭污染物水平扩散模型。结果表明,奶牛场恶臭污染物的排放浓度随距离的增加迅速减小,通过线性回归得出下风向同一高度处的臭气浓度与监测点距排放源的距离呈指数函数关系;对于气象条件,在27～37℃,风速小于5.4 m.s-1的范围内,风速、空气温度和空气相对湿度对恶臭污染物扩散规律的影响均显著,其中温度和风速对恶臭污染物扩散规律的影响较空气相对湿度大。     

不同类型农村住户生活垃圾特征识别

以京郊农村熊儿寨乡为例,依托该乡已建立的生活垃圾分类管理模式,分析全乡生活垃圾产生强度与组分特征;重点入户调查纯农户、农业兼业户、非农兼业户、非农户4类典型户,识别其生活垃圾产生强度,以及与经济、养殖、旅游接待等因素的关系,并用SPSS分析相关性与差异性。结果表明,全乡生活垃圾平均产生强度为379.5 g·d-1·人-1;4类典型户生活垃圾产生强度分别为335.3、403.8、414.6、350.7 g·d-1·人-1;生活垃圾产生强度与人均年收入呈极显著正相关（P〈0.01）,相关系数排序为非农户＞农业兼业户＞非农兼业户＞纯农户;不同类型住户中厨余垃圾产生强度为养殖户低于非养殖户,但差异不显著（P=0.053）,民俗旅游接待户明显高于非接待户,差异极显著（P〈0.01）;人均年收入水平和民俗旅游接待成为影响该乡生活垃圾产生强度的主要因素。     

基于ZINB模型和气象因素的禽霍乱发病预测

为了评估气象因素对禽霍乱流行的影响,实现对禽霍乱疾病的预警与可视化管理。该研究设计了基于季节、时间分析方法与零膨胀负二项式(zero-inflated negative binomial,ZINB)模型的禽霍乱风险分析方法。该方法利用季节性分析、时间序列分析方法,对中国禽霍乱的分布特征进行描述;通过构建ZINB模型,对气象因素与禽霍乱发生之间的关系进行评估。最终,利用模型分析结果与网络地理信息(Web GIS)技术建立禽霍乱监测预警系统。结果表明,中国禽霍乱发病存在明显的季节性并受上月发病数的影响,同时,较高的气温、空气湿度、较小的风速是促进禽霍乱发病的气象条件。利用该研究中的方法结合气象数据,对禽霍乱发病进行预测,预测值与实际值拟合结果ICC(组内相关系数)取值0.802,R2值为0.7853,表明模型预测精度较好,系统各功能模块运行正常。利用Web GIS技术与数学模型对禽霍乱进行监测预警,可以提高家禽养殖管理水平,降低发病风险,减少因动物疫病造成的经济损失。     

南水北调中线丹江口库区农业面源污染PSR评价与基于GIS的空间特征分析

丹江口水库是南水北调中线工程的水源地,其水体污染状况将直接影响调水水质,农业面源污染作为水源区主要污染之一,对其进行防治是调水安全的重要保障。采用等标污染负荷法在压力-状态-响应（PSR）概念模型下对水源区五市县禽畜养殖、土壤侵蚀、化肥流失、人粪尿、农村生活污水、水产养殖、生活垃圾进行了面污染源评价,并分析了其空间分布特征及重点区域污染特点。结果表明,水源区主要农业面污染源是畜禽养殖、土壤侵蚀和化肥流失;面源污染区域为淅川县〉郧县〉丹江口市〉郧西县〉西峡县;GIS空间分析能直观有效地反映各地区的污染情况,为有针对性地对污染治理提供依据。