胚胎因素对肉羊胚胎移植效果的影响

目的:观察分析胚胎因素对肉羊胚胎移植效果的影响.方法:选择258只已产1胎营养水平中上等的受体母肉羊为研究对象,对其移植A级胚胎,对比胚胎因素对肉羊胚胎移植效果的影响.结果:移植1枚桑椹胚的受胎率显著高于移植1枚囊胚者,不同体外保存时间的受体羊受胎率差异不具有统计学意义(P>0.05),随着胚胎移植数量的增长,受胎率明显提高(P<0.05).结论:胚胎因素与肉羊胚胎移植效果密切相关,其中胚胎发育阶段、移植胚胎数对受胎率有显著影响,胚胎体外保存时间对受胎率无显著影响,分析相应的影响因素对提高受胎率具有重要价值.     

胚胎质量和发育阶段对奶牛胚胎移植妊娠率的影响

[目的]为了评估胚胎质量和发育阶段对奶牛胚胎移植妊娠率的影响。[方法]使用63头青年奶牛作为供体进行超数排卵,评估回收胚胎质量和发育阶段。选择334头青年奶牛作为受体鲜胚移植不同质量和发育阶段胚胎。对胚胎质量分布、发育阶段分布、不同质量胚胎和不同发育阶段胚胎移植30 d妊娠率进行统计分析。[结果]可用胚胎中A级胚胎比例(60.78%)显著高于B级和C级胚胎比例(36.70%和2.52%)(P<0.05);致密桑椹胚比例(54.36%)显著高于早期囊胚,囊胚和扩张囊胚比例(18.35%,25.0%和2.29%)(P<0.05)。A级和B级胚胎移植30 d妊娠率(63.55%和64.35%)显著高于C级胚胎移植30 d妊娠率(44.44%)(P<0.05);致密桑椹胚、早期囊胚、囊胚和扩张囊胚移植30 d妊娠率差异不显著(P<0.05),早期囊胚、囊胚移植30 d妊娠率高于致密桑椹胚、扩张囊胚移植30 d妊娠率(P<0.05)。[结论]选择不同发育阶段的A级和B级胚胎能够获得较高胚胎移植妊娠率,增加早期囊胚和囊胚阶段胚胎移植数量能够提高胚胎移植妊娠率。     

提高波尔山羊胚胎移植妊娠率研究

本文就波尔山羊胚胎质量、胚胎发育阶段、胚胎数量、受体卵巢黄体数、受体注射LRH-A3、供、受体发情同期化程度以及胚胎移植的方向等因素与受体移植妊娠率的关系进行了研究。结果表明:移植囊胚较移植1枚B级桑椹胚妊娠率高;A级桑椹胚妊娠率显著高于移植1枚B级桑椹胚(P<0.05);移植2枚B级桑椹胚妊娠率比移植1枚B级桑椹胚的高39.4%(P<0.05);受体注射LRH-A3有助于提高妊娠率;供、受体发情同步差在48 h以上组妊娠率显著低于0~24 h和24~48 h组(P<0.05);向子宫角前端方向的移植妊娠率比向子宫角基部方向的高12.2个百分点。     

影响和牛双半胚移植妊娠率因素分析

研究和牛胚胎不同胚龄和移植方式对分割双半胚移植妊娠率的影响。结果表明:致密桑椹胚、早期囊胚、囊胚分割后双半胚移植妊娠率分别为60.2%、53.8%和50.0%,随着胚龄的上升妊娠率有下降趋势,各组间无显著差异(P0.05);移植到受体牛同侧子宫角双半胚妊娠率高于子宫角双侧各移植半枚分割胚和整胚(58.6%、41.7%、51.2%)(P0.05),双侧移植双犊率显著高于单侧移植和整胚移植(85.7%、36.9%、0%)(P0.01)。     

影响杜泊羊超数排卵和胚胎移植效果的因素研究

在生产条件下,探讨了胚胎回收部位、移植胚胎数量、胚胎发育阶段和季节等因素对杜泊羊超数排卵胚胎移植效果的影响.超数排卵处理了39只供体和移植了179只受体,结果表明,从输卵管平均回收胚胎数显著多于从子宫角平均回收胚胎数(10.57 vs 8.41)(P<0.05).移植2枚或3枚胚胎的妊娠率明显高于移植1枚胚胎的妊娠率(63.89% vs 66.67% vs 52.63%) (P<0.05).秋季、冬季和春季超排处理平均回收胚胎数(8.83 vs 9.50 vs 6.83)、平均可用胚胎数(7.92 vs 8.28 vs 5.17)和可用胚胎所占比例(88.68% vs 87.13% vs 75.61%)均显著高于春季(P<0.05).在秋季和冬季进行胚胎移植,妊娠率分别为57.89%和59.43%,高于春季移植的妊娠率(53.33%),但差异不显著(P>0.05).2～8-细胞胚胎的移植妊娠率与桑椹胚/囊胚移植妊娠率差异不显著(60.05% vs 57.47%)(P>0.05).     

黑萨福克和杜泊羊新鲜和冷冻胚胎移植效率的研究

为提高优质肉用种用绵羊胚胎移植的效率,试验选取76只黑萨福克羊和27只杜泊羊作为供体,采用"CIDR+FSH+PMSG"法进行超数排卵处理。选取384只小尾寒羊为受体,采用"CIDR+PMSG"法进行同期发情处理,以探索供体胚胎发育阶段、胚胎冷冻处理、胚胎体外停留时间以及移植给受体时移植侧黄体数量等因素对胚胎移植妊娠率的影响。结果表明:移植新鲜囊胚的妊娠率极显著高于桑椹胚(P0.01);冷冻/解冻囊胚移植妊娠率极显著低于新鲜囊胚(P0.01),而冷冻/解冻桑椹胚移植妊娠率与新鲜桑椹胚无显著差异(P0.05);此外,移植桑椹胚时,移植侧有1个黄体的受体妊娠率极显著低于有2~3个黄体受体妊娠率(P0.01),但移植囊胚时两者间差异不显著(P0.05)。综上可知,子宫角移植桑椹胚和囊胚时,移植新鲜囊胚、移植冷冻桑椹胚效率较高;将新鲜桑椹胚移植给移植侧有2~3个黄体受体效果好于1个黄体受体。     

绵羊体外受精卵冷冻解冻后的移植

以含有10％乙二醇的磷酸缓冲液对体外受精的绵羊桑椹胚及囊胚进行防冻和冷冻处理后保存于液氮中。解冻后将胚胎分别以去除防冻剂后移植和连同防冻剂直接移植两种方法,将30枚桑椹胚和19枚囊胚先后以外科手术法移植到28只受体母羊子宫内。结果共有8只受胎,其中4只足月妊娠后产羔4只(♀1,♂3),另外4只分别在移植后2～3个月妊娠中断,其原因尚不清楚。解冻后连同防冻剂直接移植后的受胎率为50％(4/8),明显高于去除防冻剂后移植的结果20％(4/20),(P<0.05)。受体的发情同步化程度不同(-1～+1日)对受胎率无明显影响。     

胚胎干细胞显微注射对小鼠和猪胚胎发育影响的研究

旨在为小鼠和猪多能性干细胞嵌合体制作提供参考,探讨胚胎干细胞(Embryonic stem cells或Embryonic germ cells,ES/EG)显微注射及受体胚胎发育时期等对胚胎发育的影响。对小鼠ES细胞和猪EG细胞分别进行研究:(1)将小鼠ES细胞分别注入小鼠桑椹胚和囊胚,比较不同发育时期受体胚胎体外培养的发育率和孵化率,以及注射胚胎和未注射胚胎体外培养的发育率和孵化率。结果表明,显微注射后的桑椹胚体外培养发育率和孵化率分别为94.7%和70.2%,囊胚率分别为84.6%和80.8%,注射后桑椹胚体外培养发育率极显著高于囊胚(P0.01),但注射后囊胚体外培养孵化率极显著高于桑椹胚(P0.01);未注射胚胎(注射胚胎)的体外培养发育率和孵化率分别为96.6%(89.9%)和67.8%(75.2%),未注射胚胎发育率极显著高于注射胚胎(P0.01),但注射胚胎孵化率极显著高于未注射胚胎(P0.01)。(2)将猪EG细胞分别注入猪桑椹胚、早囊、囊胚及孵化囊胚,比较不同发育时期受体胚胎移植后妊娠率以及注射胚胎和未注射胚胎体外培养的孵化率,并对猪EG细胞显微注射针和固定针的规格进行了探讨。结果表明,显微注射的桑椹胚、早囊及囊胚移植后妊娠率为67%,而显微注射的孵化囊胚移植妊娠率为0,桑椹胚、早囊及囊胚移植后受体母猪妊娠率极显著高于孵化囊胚(P0.01),由桑椹胚、早囊及囊胚注射后移植获得了两头嵌合体仔猪;显微注射和未显微注射的猪胚胎其孵化率分别为47.54%和72.97%,未注射胚胎孵化率极显著高于注射胚胎(P0.01)。确定猪EG嵌合体制作过程中,注射针外径约为30μm,内径约为25μm;固定针外直径约为130~150μm,内径约为40μm。嵌合体制作时,胚龄宜早不宜迟,桑椹胚显微注射更易操作,而且导入的时期较早,ES/EG细胞在嵌合体组织中可以有很高的贡献率,故选择桑椹胚进行注射。在本试验条件下,显微注射对小鼠胚胎发育影响不大,对猪胚胎影响较大,说明猪胚胎显微注射条件需要进一步优化。     

黑头萨福克绵羊胚胎玻璃化快速冻胚移植效果分析

本试验应用玻璃化胚胎冷冻方法进行黑头萨福克绵羊胚胎冷冻和移植,比较了受体羊卵巢上黄体数量、受体羊的体况、移植胚胎的数量对受体受胎率的影响。受体羊卵巢上有一个黄体的移植受胎率42.7%与有2~3个黄体受体羊移植受胎率44.4%无显著差异;受体的体况对受胎率有显著影响,中上等(含中等)体况水平的受体的受胎率47.2%显著高于中下等的受体的受胎率43.0%(P0.05);使用玻璃化胚胎冷冻法的冷冻解冻胚胎移植受胎率54.2%显著高于常规胚胎冷冻法的冻胚移植受胎率44.0%(P0.05);移植1枚桑葚胚(1M)的受胎率47.5%略高于移植1枚囊胚(1B)的受胎率44.3%(P0.05)。因此,受体羊黄体数、冷冻桑葚胚和囊胚对胚胎移植受胎率没有显著影响,而受体中上等(含中等)体况水平和玻璃化胚胎冷冻法冷冻解冻胚胎移植受胎率显著提高。     

Ops法玻璃化冷冻兔胚胎的试验报告

采集中国大白兔的桑椹胚共545枚,采用OPS法,配制VSⅠ和VSⅡ两种冷冻液,分别冷冻兔的桑椹胚265枚和280枚,解冻后胚胎回收率分别为93.6%(248/265)和92.8%(260/280),两者差异不显著(P>0.05);解冻后胚胎形态良好率分别为95.2%(236/248)和94.2%(245/260),两者差异显著(P<0.05)。将解冻后形态良好的210枚桑椹胚分别移植到15只受体母兔体内,结果有8只母兔妊娠,妊娠率为53.3%(8/15),妊娠受体内移植胚胎数为110枚,产仔数占移植胚胎数的33.6%(37/110)。用VSⅠ冷冻的100枚桑椹胚移植到7只受体母兔体内,妊娠率为57.1%(4/7),产仔率为35.7%(20/56);用VSⅡ冷冻的110枚桑椹胚移植到8只受体母兔体内,妊娠率为50.0%(4/8),产仔率为31.5%(17/54)。无论妊娠率还是产仔率,VSⅠ都高于VSⅡ,但差异均不显著(P>0.05)。     

黄芩苷、川芎嗪对小鼠体外培养胚胎冷冻-解冻及移植效果的研究

将中药有效成分黄芩苷(Baicalin,Bai)和川芎嗪(Ligustrazine,Lig)添加到小鼠2-细胞胚胎培养液中进行体外培养,比较其体外发育能力,并将体外发育的桑椹胚、囊胚进行2种程序常规冷冻.解冻后形态正常的桑椹胚、囊胚分别培养8～14 h、6～8 h,比较各组胚胎的冷冻-解冻发育效果及冷冻胚胎移植妊娠率和产仔率等.结果各试验组胚胎孵化率,Bai组(80.6%)、Lig组(78.3%)极显著高于对照组(51.8%)(P＜0.01).孵化胚胎细胞计数结果显示, Bai组(81.9±6.2)和Lig组(83.9±7.7)与对照组(77.4±5.6)差异极显著(P＜0.01);程序1和2的桑椹胚解冻囊胚发育率,以Bai、Lig组显著高于对照组;其囊胚解冻存活率,2个试验组均好于对照组.受体妊娠率、产仔率以及初生仔鼠、离窝仔鼠平均体重、离窝成活率等指标,各组间均无显著差异(P＞0.05),但以中药有效成分各组别均好于对照组.结果表明中药有效成分Bai和Lig能显著地提高小鼠 2-细胞胚胎体外发育能力,并有利于提高冷冻-解冻后移植胚胎的发育潜力.     

肉羊体外胚胎高效生产技术的优化研究

为了探讨放线菌酮(CHX)对卵母细胞预成熟的影响及囊胚滋养层细胞囊泡(TVS)、维生素C对肉羊体外胚胎质量的影响,试验采用从屠宰厂(场)收集的肉羊卵巢,抽取卵巢表面2~8 mm的卵泡卵母细胞进行体外成熟、体外受精和早期胚胎体外培养。结果表明:经过5%CHX预成熟的卵母细胞卵裂率、桑葚胚率、囊胚率显著高于对照组(P0.05);在体外受精及早期胚胎培养液(SOFaa)中添加1%维生素C组与TVS共培养组的卵裂率和囊胚发育率均高于其他试验组(P0.05);体外胚胎与TVS共移植受胎率显著高于对照组(P0.05)。说明核质同期成熟处理及抗氧化剂可以用于高效生产体外胚胎。     

不同品种绵羔羊超数排卵及胚胎体外生产技术研究

探讨品种对羔羊超数排卵效果和卵母细胞发育能力的影响,并将体外受精胚胎进行了移植,为研究利用绵羊羔羊卵母细胞生产后代提供理论和技术方法。对4～8周龄不同品种羔羊用FSH+PSMG处理后获得的平均卵母细胞数量和体外胚胎卵裂率和囊胚率进行了比较,并比较成熟液中有无β-巯基乙醇对胚胎卵裂率和囊胚率的影响。结果:各品种获得的平均卵母细胞数分别为:哈萨克为210.22枚,湖羊为0枚,美利奴为135.80枚,湖羊与哈萨克的杂交后代为37.80枚,湖羊羔羊和湖羊与哈萨克羊的杂交羔羊获得的平均卵母细胞数显著低于哈萨克羔羊(P<0.01,P<0.05)。哈萨克羔羊卵裂率(69.0%)显著高于湖羊与哈萨克羊杂交羔羊(66.4%,P<0.05);哈萨克羔羊囊胚率(17.5%)和美利奴羔羊囊胚率(16.2%)显著高于湖羊×哈萨克羔羊(13.8%)(P<0.01,P<0.05)。β-巯基乙醇对羔羊胚胎卵裂率影响不显著,对囊胚率影响极显著(P<0.01)。哈萨克羔羊卵子体外受精获得的2-8细胞胚胎进行输卵管移植,14只受体羊中7只妊娠,妊娠率为50.0%;共产羔9只,其中8只存活。     

不同分割液对水牛胚胎分割效果的影响

探讨了3种不同分割液PBS、PBS+0.2 mol/L蔗糖和PBS+5%聚乙稀吡咯烷酮(PVP)对水牛胚胎分割效果的影响。借助显微操作仪,将体外受精培养的水牛桑椹胚(第5天)和囊胚(第6～7天)分割,体外培养半胚,观察其发育情况。结果显示:在PBS+0.2 mol/L蔗糖与PBS+5%PVP中分割桑椹胚,其分割成功率显著高于PBS(71.67%,67.26%,55.44%)(P<0.05),而半胚的囊胚发育率及囊胚细胞数三者均无差异显著性(P>0.05);在PBS+0.2 mol/L蔗糖与PBS+5%PVP中分割囊胚,其分割成功率显著高于PBS(79.13%,76.73%,65.25%)(P<0.05),而半胚培养的囊胚发育率及囊胚细胞数三者差异均无显著性(P>0.05)。说明在PBS中分别添加0.2 mol/L的蔗糖和5%的PVP有利于提高水牛桑椹胚和囊胚的分割成功率。     

牛早期胚胎取样对移植妊娠率的影响

为了研究牛早期胚胎取样对移植妊娠率的影响,本试验从胚胎类型、胚胎质量、胚胎发育阶段、取样细胞数及体外放置时间五个方面进行分析。结果表明,整胚与取样性鉴胚胎之间移植妊娠率差异不显著(P0.05);取样后1级胚胎的移植妊娠率极显著高于取样后的2级胚胎(P0.01);扩张囊胚的移植妊娠率显著高于早期囊胚和桑葚胚的移植妊娠率(P0.05)。1级和2级胚胎均在取样4～6个细胞时,获得最高移植妊娠率,但与其他组别差异均不显著(P0.05)。随着胚胎在体外放置时间的延长,移植妊娠率呈现下降的趋势。     

牛磺酸对牛体外受精早期胚胎发育的影响

研究了牛体外受精后早期胚胎体外发育时向其基础培养液中加入牛磺酸对胚胎桑椹胚率、囊胚率和孵化囊胚率的影响.试验1:以TCM-199 10?S为基础培养液(对照组),再加入7、14 mmol/L的牛磺酸(试验组),试验组与对照组的桑椹胚率分别为48.1%、47.4%和43.2%;囊胚率分别为26.4%、22.3%和21.0%;孵化囊胚率分别为21.8%、18.7%和0.试验2:IVF后2细胞、4～8细胞及8～16细胞期,在基础培养液中分别添加7 mmol/L的牛磺酸时,桑椹胚率分别为48.7%、57.1%和52.0%,囊胚率分别为25.1%、30.7%和27.9%,孵化囊胚率分别为25.9%、28.6%和25.0%;而添加14 mmol/L牛磺酸时,桑椹胚率分别为50.4%、56.4%和55.4%,囊胚率分别为26.5%、31.3%和27.7%,孵化囊胚率分别为27.5%、31.1%和29.9%.结果表明,体外发育培养液中添加7 mmol/L牛磺酸可显著提高桑椹胚率和囊胚率(P＜0.05),并且在4～8细胞期添加14 mmol/L牛磺酸最为合适.     

进口优质肉羊胚胎的移植试验

对从澳大利亚进口的304枚德克赛尔肉羊冷冻胚胎进行移植,产羔178只,产羔率为5855%.并对冷冻胚胎解冻、移植过程中的主要环节进行研究,其结果如下①解冻后的A、B级孵化囊胚所占比例为(43.75%)、桑椹胚--扩张囊胚解冻后的A、B级胚胎所占比例为(84.02%),两者有显著差异;②解冻后的A、B级桑椹胚--扩张囊胚移植产羔率(64.88%)显著高于解冻后的A、B级孵化囊胚移植产羔率(42.85%);解冻后的C级胚胎移植后也能得到一定的产羔率;③经产母羊胚胎移植产羔率(68.62%),显著高于育成母羊产羔率(51.85%).     

波尔山羊胚胎移植影响因素的研究

试验就胚胎的发育阶段、胚胎保存时间及移植胚胎数等因素对胚胎移植效果的影响情况进行了研究.结果表明,胚胎发育日龄对受体妊娠率没有显著影响(P＞0.05),但移植8～16细胞的胚胎的妊娠率略高于2～4细胞(58.49% vs 61.47%).人员不是影响受体妊娠率的主要因素.胚胎在体外保存0～120 min对妊娠率没有显著影响,但以在体外保存0～30 min内移植的妊娠率最高(65.61%).黄体与移植胚胎的相对位置对受体的妊娠率没有显著影响(P＞0.05),但移植双胚的受体的妊娠率较移植单胚高(61.76% vs 45.17%).同时,试验统计了经胚胎移植产生的羔羊和自然繁殖羔羊之间的差异,发现经胚胎移植产生的波尔山羊母羔的初生重极显著地高于自然繁殖的母羔(P＜0.01),但公羔间的初生重以及公、母羔间的体高、体长、胸围、死亡率和性别比例与自然繁殖羔羊差异不显著(P＞0.05).     

不同发育阶段圭山山羊胚胎常规冷冻保存研究

采用常规冷冻法冷冻保存圭山山羊桑椹胚、囊胚、扩张囊胚期胚胎,解冻后体外发育率分别为41.94%、67.50%、84.09%,桑椹胚与囊胚、扩张囊胚间差异显著(P<0.05),囊胚和扩张囊胚间虽无显著性差异(P>0.05),但扩张囊胚体外发育率高于囊胚.在胚胎的冷冻-解冻过程中,桑椹胚、囊胚、扩张囊胚的透明带受损伤率分别为6.45%、20.00%、31.82%,透明带受损的桑椹胚、囊胚、扩张囊胚体外发育率分别为0%、50.00%、78.57%.初步说明发育程度越高的胚胎,在冷冻-解冻过程中其透明带越易受到损伤,但随发育程度的加深,胚胎生长发育时对透明带的依赖程度也变得越来越弱,表明圭山山羊早期扩张囊胚最适宜进行冷冻保存.     

Leptin和ITS对牛卵母细胞体外培养和胚胎生产的影响

利用Leptin和ITS促进体外成熟和体外培养的牛卵母细胞的发育和质量,探讨提高胚胎体外生产的质量和数量的方法和技术。试验1：体外受精胚胎的培养液：添加BSA的KSOM中添加10mL/L浓度的ITS,结果使胚胎的桑椹胚率和囊胚率显著（P〈0.05）高于培养液中不加ITS的对照组（桑椹胚率：43.48%vs29.07%,囊胚率：22.83%vs11.63%）,卵裂率、正常分裂率和8细胞率与对照组差异不显著（P〉0.05）。试验2：在卵母细胞的体外成熟液中添加10μg/L具有生物学活性的重组鸡Leptin成熟肽融合蛋白,Leptin处理组和对照组卵母细胞经体外成熟、受精后转入加有10mL/LITS的KSOM培养液进行体外培养。试验组卵裂率和正常分裂率极显著（P〈0.01）高于对照组（88.96%vs66.81%和61.11%vs29.36%）,8细胞率显著（P〈0.05）高于对照组（84.84%vs69.57%）。Leptin处理的卵母细胞在受精后的桑椹胚率和囊胚率与对照组差异不显著,但最后的囊胚数量较对照组增加1倍多,分别为IVF卵母细胞总数的14.8%和6.4%（P〈0.01）。这说明,添加Leptin对牛卵母细胞体外成熟有促进作用,可显著提高卵母细胞受精后早期胚胎的卵裂率、正常分裂率和8细胞率;加入ITS则能提高桑椹胚率和囊胚率;而Leptin和ITS的按顺序结合使用,则能大大增加体外生产胚胎的桑椹胚和囊胚的数量,从而提高胚胎体外生产的效率。