一株番鸭细小病毒的分离鉴定及其对雏番鸭的致病性研究

某番鸭养殖场2周龄肉鸭发生以腹泻、呼吸困难及软脚为主要症状的疾病,鸭群整体精神沉郁,耗料量下降,结合流行病学调查、剖检病理变化等初步诊断为番鸭细小病毒(MDPV)感染.为进一步探明病因,本研究将采集的死亡鸭肝脏和胰脏组织处理后,用番鸭细小病毒、小鹅瘟等8种番鸭常见病毒特异性引物进行PCR/RT-PCR检测,结果仅番鸭细...     

鹅细小病毒广西株的分离鉴定

将广西某养鹅场5日龄发病的雏鹅肝脾处理后接种于10日龄的鹅胚,分离到一株病毒,对死胚收集的尿囊液进行荧光PCR确诊后,对其VP3基因进行扩增测序,通过与GDFSH株(Guangdong)、82-0308株(Taiwan)、HLJ01株(Heilongjiang)和HBZF07株(Hebei)VP3基因序列分析,核苷酸序列同源性在96.2%以上,从分子水平上鉴定该分离株是鹅细小病毒.     

鹅细小病毒HG5/82株的分离鉴定及生物学特性的研究

本研究通过对1982年黑龙江某鹅场发生的鹅细小病毒病疑似病例的肝病变组织病毒分离,进行回顾性研究.将肝脏加PBS研磨后,-70℃/37℃反复冻融三次,除菌过滤后接种12日龄鹅胚.发现病毒对鹅胚的致死时间为5～6 d,胚体体表有轻微出血点.鹅胚尿囊液经磷钨酸染色,可见具有典型特征的细小病毒粒子.将该病毒尿囊液在12日龄鹅胚中连续传16代,随着传代次数的增加,胚体多集中在3～4 d死亡.病毒传至第三代时死亡胚体头、颈、背部出现较为严重的出血点,体表有水肿.第五代病毒尿囊液(命名为HG5/82)对12日龄鹅胚的ELD50为10-5.92/0.1 mL.将20只12日龄雏鹅分为三个试验组和一个阴性对照组,各组分别接种鹅胚尿囊液104.92ELDso、103.92ELD50、102.92ELD50及生理盐水,发现雏鹅接种HG5/82后4 d出现轻微腹泻,随后恢复正常.用套式PCR检测雏鹅肛拭子病毒的体外排放情况.发现三个试验组在接种病毒后1～20 d用套式PCR均可检测到病毒.对照组及试验组接种后20～56d没有检测到病毒.将套式PCR产物进行序列测定并于参考毒株进行比较,表明该序列具有GPV相应区域的共同分子特征,与GPV参考毒株B的相应序列同源性达93.6%.本研究结果表明,该分离毒株为典型的鹅细小病毒(Goose Parvovirus,GPV),对雏鹅的致病力较弱.     

一株牛支原体的分离鉴定及致病性初步研究

对采集到的疑似牛支原体肺炎肺组织病料进行病原的分离,并对分离株进行形态学、生化和分子生物学鉴定,结果显示成功分离获得1株牛支原体,命名为NM001.该分离株的菌落形态呈典型的\"荷包蛋状\",不能发酵葡萄糖,不能水解精氨酸,不分解尿素.PCR能够扩增出牛支原体特异的P48基因条带,16S rRNA基因序列与Ningxia-...     

鹅细小病毒BC1105株的分离鉴定

2011年5月中旬在吉林省白城地区的某养鹅场疑似小鹅瘟病死雏鹅的肾脏、肝脏、脑和脾脏组织中分离到1株病毒,选用未免疫小鹅瘟疫苗的健康母鹅所产的14日龄鹅胚,进行鹅胚接种试验,连续传代、血凝试验、琼脂扩散试验、电镜观察、PCR鉴定和动物回归试验,初步确定该病毒为鹅细小病毒,命名为BC1105株。     

6株鹅细小病毒的分离鉴定及VP3基因序列分析

为了解吉林省不同地区小鹅瘟流行情况,从吉林省磐石、白城、九台、德惠、辽源、镇赉地区鹅养殖场采集疑似小鹅瘟病料,接种SPF鹅胚后分离到6株病毒(暂命名为PSH、BCH、JLJT、DH、LY、ZL株),经PCR鉴定为鹅细小病毒。VP3基因序列分析结果显示,分离到的6株病毒VP3基因、蛋白与近年来国内流行的鹅细小病毒同源性较高,分别为93.1%～99.6%与95.9%～99.4%。其中,BCH株、JLJT株、LY株属同一分支,与浙江、扬州等地区分离的鹅细小病毒相似性较高,达到99.4%-99.6%;ZL株、DH株、PSH株属同一分支,相似性较低。试验表明,吉林省流行的鹅细小病毒与我国南方地区流行毒株同源性较高,与其他地区流行毒株存在一定差异。     

鸡新城疫山东强毒株的分离鉴定及致病性研究

从山东省不同地区的发病鸡群中分离了6株病毒，经HA、HI试验、病毒回归试验和血清中和接种鸡胚试验确定所分离的毒株为新城疫病毒。分别对6个毒株MDT、ICPI和IVPI进行了测定，结果表明这些毒株为鸡新城疫强毒，但各个毒株的致病性有所差异。     

1株猪鼻支原体的分离鉴定及致病性

猪鼻支原体是猪场感染率极高的一种支原体,可引起多发性浆膜炎、关节炎等症状。目前尚未建立标准的猪鼻支原体发病模型,也缺乏标准强毒株。本研究从某猪场发病猪的关节液中分离得到一株支原体,通过PCR检测、菌落形态观察、菌体形态电镜分析、菌株MLST分型等方法对其进行了鉴定,确认其为猪鼻支原体。为评价菌株致病性,将该分离株接种1月龄自然分娩不吃初乳猪（SF-pCD猪）,试验猪在感染后出现关节肿胀、跛行等临床症状,日增重显著低于对照组,并出现部分死亡。剖检结果显示感染组出现胸膜炎、腹膜炎、心包炎及关节炎,肺部组织病理分析显示为间质增宽,无虾肉样病变。从发病猪的扁桃体、肺、心及关节积液中可再次分离到攻毒株。综上,本研究分离获得一株猪鼻支原体,人工感染猪后可出现典型的发病症状,猪鼻支原体发病模型的建立为致病机制及疫苗研究奠定了重要的基础。     

鹅细小病毒野毒株分离鉴定及致病力试验

从小鹅瘟疑似病料中分离出1株病毒,经电镜观察、血清保护试验鉴定为鹅细小病毒。动物回归试验表明,该病毒所致疾病的潜伏期为8d,病程为1~3 d,病死率达100%,对雏鹅半数致死量(LD50)为0.2 mL 10-5稀释的病毒液。     

1株羊源溶血性曼氏杆菌的分离鉴定、药敏试验及致病性研究

[目的] 对某养殖场由呼吸道症状引发的山羊死亡病例进行病原学诊断,并对分离到的病原进行药敏试验及致病性分析。[方法] 无菌条件下剖检并采集死亡羊只肺脏及气管组织,接种于TSA固体培养基,37 ℃培养22~24 h;挑取疑似菌落,纯化后进行革兰染色镜检和生化鉴定;对经表型鉴定的分离菌株进行16S rDNA PCR扩增、测序,并进行遗传进化树构建和同源性分析;采用微量肉汤稀释法对分离菌株进行药敏试验;利用动物攻毒试验确定分离菌株对羔羊的致病性。[结果] 从临床样本中分离到1株细菌,命名为DMQ-Y-Mh。纯化后的分离菌株镜检为革兰阴性短杆菌,经生化鉴定以及16S rDNA PCR扩增、测序、同源性分析,将分离菌株鉴定为溶血性曼氏杆菌（Mannheimia haemolytica）。分离菌株对环丙沙星、阿奇霉素、庆大霉素敏感,对左氧氟沙星、土霉素、氟苯尼考中度敏感,对替米考星、恩诺沙星、泰乐菌素耐药。攻毒羔羊于72 h内死亡,剖检眼观气管及肺脏支气管内有黏性分泌物;肺脏组织有深红色病灶,与正常肺脏组织界限明显,可再次从死亡羔羊肺脏及气管组织分离到溶血性曼氏杆菌。[结论] 溶血性曼氏杆菌是造成该养殖场发生羊只死亡的病原菌,药敏试验结果为指导临床用药提供了参考。     

Isolation,Identification and Related Pathogenicity Analysis of Duck Pathogenic E.coli

To analyze the pathogenicity and biological characteristics of duck E.coli, 27 strains of duck pathogenic E.coli were isolated from dead ducks with the typical characterize of colibacillosis by isolation and culture, physical and chemical properties identification in Xichang city.O serotype identification, drug sensitivity test and virulence associated genes were detected in 27 strains of duck pathogenic E.coli.The result showed that the predominant serotypes were O119, O86, O126, O142 and O44, which accounted for 55.56%.O119 was the epidemic and pathogenic serotype in this farm, which accounted for 40.74% in 27 strains of duck pathogenic E.coli.Through the drug sensitivity test of 20 kinds of clinical commonly used drugs, we found that all strains were sensitive to amikacin, gentamicin and polymyxin B.Besides, 10 drugs(ceftriaxone, etc) were lightly sensitive.However, these strains were resistant to 5 kinds of drugs(rifampicin, etc).The detection result of PCR about virulence associated genes indicated that the positive of iutA, hlyF, Iss, IroN, ompT, fyuA, irp 2, Tsh and papA genes were 100.00%, fimC and K 99 genes were 59.26% and 7.40%, respectively.The results provided an important reference for effective prevention and control of duck colibacillosis, and laid the foundation for further study of E.coli.     

Isolation,Identification and Pathogenicity Research of a Strain of Clostridium perfringens from Goat

A pathogenic bacteria was isolated from a dead goat,and it was identified as goat-pathogenic type A Clostridium perfringens by differential culture,biochemical test,molecular biological technology and animal pathogenicity test.Analysis results of toxin genes showed that this bacteria contained both α and β2 toxin genes.Animal pathogenicity test result showed that this bacteria was highly pathogenic to mice,and the same bacteria was isolated from dead mice as which was isolated from the dead goat,so it was certain that type A Clostridium perfringens was the main pathogenic bacteria which caused the goat dead.The results would provide scientific basis for the treatment and prevention of the disease caused by Clostridium perfringens in this goat farm.     

屠宰猪肠道沙门氏菌的分离鉴定、耐药性分析及致病性试验

为了解广西南宁市猪源沙门氏菌的污染状况、耐药状况及致病力情况,在南宁市某生猪屠宰场随机直接从131头屠宰猪的肠道采集样品,采用鉴别培养基分离,生化鉴定的方法对样品中的沙门氏菌进行分离鉴定,并采用标准K-B纸片法对分离菌株进行25种抗生素敏感试验,最后对分离株进行小白鼠致病性试验。结果从131份屠宰猪的肠道中共分离到沙门氏菌45株,检出率为34.35%;其中鼠伤寒沙门氏菌14株,甲型副伤寒杆菌2株,肠炎沙门氏菌3株。45株分离菌株全部耐药,耐药率高达100%,其中44株为多重耐药菌株,占97.78%。45株沙门氏菌中有40株对小白鼠具有致病性,致病率达88.89%。这表明南宁市的屠宰猪存在一定程度的沙门氏菌污染,并且分离菌株存在较严重的耐药现象以及具有较强的致病性。应采取有效措施控制沙门氏菌在猪群中的污染和限制抗生素在养猪过程中的使用并严格遵守休药期,以减少细菌耐药性的产生,保障猪肉及猪肉制品的食品安全。     

“高热病”病猪嗜麦芽窄食单胞菌的分离鉴定

从"高热病"猪的鼻液、支气管和肺组织分泌物的11份病料中,按常规方法进行病原菌分离鉴定,经亚胺培南分离筛选到7株疑似细菌.通过生化试验、16 S rDNA基因序列分析等,鉴定出其中2株为嗜麦芽窄食单胞菌(命名为PSM-1、PSM-2).与GenBank中临床和环境中分离的嗜麦芽窄食单胞菌分离株相比,两株菌的16 S rDNA基因扩增片段的核苷酸序列同源性均在99%以上.动物试验证实,2株细菌具有一定致病性;药敏试验表明,分离菌株对大多数抗生素具有较强耐药性且呈现多重耐药性.     

鹅源沙门氏菌的分离鉴定与药敏试验

为了对辽宁省某养鹅场10日龄患病鹅作出正确诊断和治疗,利用实验室诊断和药物敏感试验对病菌进行分离培养与鉴定。结果表明,该病病原为沙门氏菌,对培氟沙星、环丙沙星、痢特灵等药物高度敏感,对卡那霉素等药物中度敏感,对磺胺嘧啶钠等药物不敏感。选用敏感药物进行治疗,收到良好效果。     

鹅源新城疫病毒的分离鉴定及其致病性

从吉林省某发病鹅场分离到1株病毒,经血凝、血凝抑制试验和RT-PCR鉴定证实,该毒株为新城疫病毒,命名为MHK-1株.毒力测定结果表明,该病毒的鸡胚平均死亡时间(MDT)为43 h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1.63,鸡胚半数致死量(ELD50)为10-8.3/0.2 mL,表明该毒株为新城疫病毒强毒株.经致病性试验表明,该病毒对鹅有很强的致病性.分子病毒学分析表明,MHK-1株F基因裂解位点的氨基酸序列为112R-R-Q-K-R-F117,符合强毒株氨基酸序列特点.     

小鹅瘟病毒分离与初步鉴定

取死于具有小鹅瘟典型症状的 7日龄吉林白鹅脾脏 ,制成乳剂 ,接种于未免疫小鹅瘟疫苗的健康母鹅所产种蛋的 12日龄鹅胚尿囊腔。结果当盲传至第 3代 ,鹅胚死亡 ,电镜负染尿囊液观察到细小病毒样粒子。雏鹅接种试验结果表明 ,试验组雏鹅表现出小鹅瘟临床症状和剖检特征。由此证明 ,该雏鹅死于小鹅瘟     

A型塞内卡病毒CH-HNXC株的分离鉴定及其致病性研究

自2007年A型塞内卡病毒(SVA)在猪体内被发现以来,给全球养猪业造成了严重的经济损失,SVA感染的典型症状包括猪口鼻部囊泡的形成及破裂,以及蹄部冠状带水疱引起的跛行。用RT-PCR从河南某猪场具有水疱样病变的猪水疱皮或水疱液中检测到了SVA的特异性核酸片段,并通过IBRS-2细胞进行SVA的分离和传代,将分离得到的SVA命名为CH-HNXC,扩增和测定了VP1基因序列后分析发现,分离株CH-HNXC与之前报道的2017年河南和福建分离株位于较近的进化分支中,与加拿大和泰国分离株亲缘关系较远,表明SVA流行和进化中由相近时间点和较近地理位置带来高的同源性;分离株攻毒猪鼻吻部和蹄部可见水疱和溃烂、跛行等,表明本分离株能引起SVA所致的典型临床症状,为SVA在国内的流行提供了新的证据,为进一步研究SVA的致病机制、开发诊断试剂和疫苗奠定了基础。