不同保存方式对扁桃花粉保存效果的影响

采用干燥法和玻璃化法2种方法,对新疆莎车县扁桃品种晚丰18号花粉进行了超低温保存研究。结果表明:晚丰18号花粉最佳干燥方式为4℃硅胶干燥,适宜干燥时间为6⁸ h,干燥6h和8 h的花粉含水量分别为53.74%、52.74%,超低温保存后花粉萌发率为61.22%、63.77%,相对保存率为91.68%、97.13%;在室温(20±1)℃下以玻璃化液PVS2(30%甘油+15%乙二醇+15%二甲基亚砜+0.4 mol/L蔗糖)处理208 h,干燥6h和8 h的花粉含水量分别为53.74%、52.74%,超低温保存后花粉萌发率为61.22%、63.77%,相对保存率为91.68%、97.13%;在室温(20±1)℃下以玻璃化液PVS2(30%甘油+15%乙二醇+15%二甲基亚砜+0.4 mol/L蔗糖)处理20³0 min后,超低温保存的花粉萌发率最高,为40.88%30 min后,超低温保存的花粉萌发率最高,为40.88%⁴1.53%;不同解冻方式间花粉萌发率差异极显著,以35℃解冻70 s的萌发效果最好;干燥法保存效果较玻璃化法保存好,超低温保存时间对花粉萌发率无显著影响。     

百合花粉超低温保存方法研究

以“索邦”和“西伯利亚”百合为试材,研究了不同干燥时间和不同预处理温度及不同化冻方式对花粉超低温保存后百合花粉萌发率的影响.结果表明:不同干燥时间和不同预处理温度对超低温保存后花粉的萌发率有显著影响.与对照相比,2h干燥预处理(即花粉的含水量分别为7.67％和7.27％)后百合花粉的萌发率显著高于1、3、4h处理的;-20℃低温预冻处理后百合花粉的萌发率显著高于CK(室温)、0℃、-70℃处理的;超低温保存后40℃水浴化冻效果最佳.     

不同干燥法与贮藏温度对玉兰花粉萌发的影响

以5～7a生玉兰为试材,研究了日晒干燥法、阴干干燥法、灯照干燥法、恒温干燥法4种干燥方法和室温、4、0、-20、-40、-80℃6个贮藏温度对玉兰花粉萌发的影响。结果表明:玉兰花粉采用阴干干燥法干燥优于日晒、灯照和恒温干燥法。阴干后的花粉分别在室温、4、0、-20、-40、-80℃贮藏10、20、30和40d,玉兰花粉的离体萌发率均降低。室温下,玉兰花粉的萌发率随贮藏时间的增加降低得最快,贮藏前(0d)玉兰花粉的萌发率为73.3%,至40d萌发率已降为0%。4和0℃条件下,花粉萌发率的降低速度相近。-40和-80℃花粉的贮藏效果最好,保存至40d时,花粉萌发率仍然在50%以上。     

杏树花粉保存研究初报

供试品种为12年生梅杏花粉,经五个处理保存后观察,其效果差异很大。①在室温自然条件下,萌发率随保存天数的增加下降很快,保存4天后萌发率下降至原来的22.8%,6天后仅为原来的16.8%,总的寿命不足10天,③室温下干燥保存与自然条件下相似,萌发率下降也很快,6天后萌发率下降至原来的17.10%,10天后完全不能萌发。说明仅靠干燥处理并不能延长杏花粉的寿命。③在7℃下干燥保存的花粉寿命保持时间较长,萌发率下降比室温保存下降的慢,15天后萌发率为原来的30.4%,35天后仍能保持原来花粉萌发率的22.6%。④在7℃下干燥保存1天后置-20℃低温下冷冻保存,3…     

扁桃小滴玻璃化超低温保存研究

【目的】以扁桃休眠茎尖为试材,探讨小滴玻璃化法对扁桃离体超低温保存的影响,为扁桃种质资源的长期保存提供有效途径。【方法】采用小滴玻璃化法,通过正交设计试验和单因素试验对预培养蔗糖浓度、预培养时间、装载时间和PVS2[30%(ω,后同)甘油+15%二甲基亚砜+15%乙二醇+0.4 mol·L~(-1)蔗糖]脱水处理时间这4个因素影响扁桃休眠茎尖超低温保存后成活率的情况进行分析。【结果】预培养时间对休眠茎尖超低温保存后成活率的影响极显著(P<0.01),而预培养蔗糖浓度、装载时间和PVS2处理时间的影响不显著。建立了以‘莎车14号’为代表的扁桃茎尖小滴玻璃化法超低温保存体系,最佳处理方案是:用0.5 mol·L~(-1)预培养蔗糖液处理2 d,装载液处理20 min,PVS2脱水处理120min,放入含新鲜PVS2小滴的铝箔纸上投入液氮24 h后,浸入用40℃温水预热过的洗涤液(1.2 mol·L~(-1)蔗糖的MS)中30 s,然后再将休眠茎尖转入新鲜的洗涤液中洗涤30 min。恢复后接种在MS+0.3 mg·L~(-1)6-BA+0.5 mg·L~(-1)IAA+0.3 mg·L~(-1)GA3培养基上,扁桃成活率达80.44%。运用优化的方案对‘莎车1号’‘莎车11号’和‘莎车18号’3个扁桃品种进行超低温保存,平均成活率分别为87.41%、85.44%和83.02%。【结论】利用小滴玻璃化法可提高扁桃超低温保存成活率,建立了适合扁桃休眠芽超低温保存技术方法,为扁桃种质资源的长期保存提供理论和实践借鉴。     

马铃薯(Solanum tuberosum L.)茎尖超低温保存的研究

以克新8号为试验材料,通过优化超低温保存马铃薯茎尖中影响成活及再生的几个关键因素,成功建立了基于玻璃化法的马铃薯茎尖超低温保存体系。茎尖在MS+0.3M蔗糖的培养基上预培养1天后,经2M甘油+0.4M蔗糖的加载液室温加载30 min,浸入到PVS2溶液中(00C)处理60 min,将处理后的茎尖转至含有0.05 mg/L GA3的MS后培养基上培养,成活率和再生率达到94.8%和78.1%。并将建立的玻璃化法应用到其它4个品种,平均再生率为65.5%,研究结果可为中国马铃薯种质资源的超低温保存提供技术支持。     

玻璃化法超低温保存猕猴桃离体茎尖及其植株再生

 以中华猕猴桃矮型种质为离体培养材料, 建立试管无性系, 对其离体茎尖的玻璃化法超低温保存技术进行研究, 探讨猕猴桃种质长期保存的适宜途径。结果表明, 含1～2个叶原基(1.5～2.5 mm) 的茎尖, 在5%二甲基亚砜(DMSO) + 5%蔗糖+MS培养基上预培养4 d后, 于室温下用2 mol/L甘油+ 0.4 mol/L蔗糖预处理30 min, 再在0℃下用玻璃化液(PVS2 ) 脱水处理40 min并迅速投入液氮中, 保存24 h后接种至继代培养基上再培养, 成活率和再生率分别为56.7%和51.6%。再生植株生根后可移栽成活。     

五叶草莓超低温保存及遗传稳定性分析

【目的】为了找出野生种质资源五叶草莓(Fragaria pentapylla)的超低温保存方法和分析超低温保存后五叶草莓的遗传信息稳定性,【方法】运用玻璃化法对五叶草莓离体茎尖超低温保存技术进行了研究,并采用AFLP和MSAP技术对其遗传稳定性作了探讨。【结果】结果表明,不同的低温锻炼时间、预培养时间、预处理时间、玻璃化溶液(PVS2)处理时间和液氮保存时间对五叶草莓超低温保存后成活率的影响各不相同,经优化后,低温锻炼3周,预培养3 d,预处理30 min,PVS2处理60 min时,超低温保存的最高成活率可达79.7%,液氮处理时间对成活率影响不明显;运用AFLP技术对超低温后成活生长120 d的材料及对照材料基因组DNA进行了分析,超低温前后带型一致,未发现明显差异片段;进一步用MSAP技术分析了超低温保存后成活的材料和对照材料DNA甲基化水平差异,结果表明超低温保存后五叶草莓DNA甲基化与去甲基化分别为5.70%和12.43%。【结论】玻璃化法超低温保存技术可以有效的保存五叶草莓种质资源,超低保存前后的五叶草莓基因组DNA没有发生多态性变化,但DNA甲基化水平降低。     

怀地黄玻璃化和包埋玻璃化法超低温保存

比较了玻璃化与包埋玻璃化超低温保存怀地黄（Rehmannia glutinosa(Gaertn.) Libosch）‘85-5’带芽茎段的效果。结果表明：4 ℃低温锻炼5 d,在添加二甲基亚砜（DMSO）和乙酰胺的预培养基中预培养3 d,60 % PVS₂室温装载25 min,PVS₂ 0 ℃脱水30 min时,玻璃化和包埋玻璃化两种保存方法均达到本试验条件下最佳结果;两种方法相比,玻璃化法的存活率和再生率均较包埋玻璃化法高,前者的存活率（88.92 %）和再生率（64.29 %）分别是后者的1.38倍和2.41倍。可见,采用超低温保存怀地黄种质资源是可行的,且玻璃化法优于包埋玻璃化法。     

魔芋花粉的低温和超低温保存

利用干燥法和玻璃化法，魔芋花粉能够在4℃下保存1个月，－20℃下保存6个月；魔芋花粉经液氮超低温（－196℃）保存后，有明显的“冷刺激”现象，即保存花粉比新鲜花粉有更高的离体萌发率。     

大蒜茎尖玻璃化法超低温保存技术研究

 用山东‘苍山大蒜’进行了茎尖玻璃化法超低温保存技术的研究。5～8 mm大蒜茎尖在MS +0.7 mol/L蔗糖的固体培养基上预培养7 d, 切取3.0～3.5 mm的茎尖, 在20℃下经60% PVS2 处理60 min,再于0℃下用PVS2 处理5～60 min后, 换适量新鲜PVS2 , 浸入液氮。保存2 d或1个月后取出, 在37℃水浴中解冻2 min, 用MS + 1.2 mol/L蔗糖液体培养基洗涤2次, 每次10 min, 经过恢复培养, 茎尖成活率最高可达到100%。     

番木瓜茎尖的玻璃化法超低温保存及其植株再生

 研究了番木瓜( Carica papaya L. ) 茎尖玻璃化法超低温保存的一些影响因素。结果表明: 无菌试管苗在MS + BA 0.5 mg/L + NAA 0.1 mg/L + GA₃ 1.0 mg/L 的培养基上生长较好。番木瓜茎尖超低温保存较佳体系是: 3～5 cm的茎尖在含有5 %二甲基亚砜(DMSO) 培养基上预培养3 d , 解剖镜下剥取含1～2 个叶原基的茎尖(1.5～2.5 mm长) , 先在室温下于60 %的玻璃化溶液(PVS2) 中装载40～50 min , 再用PVS2于0 ℃下处理30 min , 换1 次PVS2 溶液后迅速投入液氮。保存24 h 后, 在40 ℃水浴中化冻, 用1.2 mol/L 的蔗糖培养液洗涤两次, 转入继代培养基上再培养, 成活率和再生率分别达53.7 %和52.6 %。再生植株生根后可移栽成活。     

玻璃化法超低温保存柑桔茎尖及植株再生

 采用玻璃化法对柑桔茎尖的离体超低温保存进行了研究。约10 mm 长的柑桔茎尖于含5 %二甲基亚砜(DMSO) 的培养基上预培养3 d , 切取2～2. 5 mm 长的茎尖, 室温下60 %玻璃化溶液2 (PVS2) 装载20～30 min , 然后用PVS2 于0 ℃处理50～60 min , 换入新鲜的PVS2 , 迅速投入液氮中, 24 h 后在40 ℃水浴中迅速化冻, 再用1. 2 mol/L 蔗糖培养基洗涤2次, 接种于含BA 1. 0 mg/L 的MT培养基上, 26 ℃暗培养1 周后转于正常光下培养。枳壳茎尖超低温保存后用氯化三苯基四氮唑(TTC) 法检测, 成活率为100 % , 培养再生率达到90 % ,再生后的苗能正常生根, 与对照没有形态上的变异, 移栽可成活。     

特早熟杏种子直播育苗技术研究

采用特早熟杏二花槽、金日等品种的新鲜种子，经低温贮存后，剥取种仁，用100mg/L GA3处理10分种，然后直接播种子温室土壤，20天后出苗率达到49．9％～69．8％，解决了特早熟种子常规层积不发芽的问题，为杂交育种开拓了一条捷径。     

不同条件下牡丹花粉的贮藏寿命

以2个牡丹品种“凤丹白”和“鲁荷红”为试材,以花粉萌发率和授粉结实率为依据,研究了室温(25℃)、4、-20、-86℃条件下的牡丹花粉贮藏寿命,以建立花粉贮藏技术.结果表明:牡丹花粉室温下保存7d、4℃下保存90 d、-20℃下保存180 d仍有很高的萌发率,-86℃下贮藏la,花粉萌发率没有明显下降、授粉结实率高.室温干燥24 h花粉贮藏后萌发率显著高于未干燥花粉.温度和含水量是影响牡丹花粉贮藏寿命的重要因素.自来水冲洗解冻效果最好.4℃和-86℃贮藏是解决牡丹育种花期不遏的有效措施.     

香蕉茎尖的玻璃化法超低温保存及其植株再生

 以香蕉(Musa spp. ) 为试材, 对其离体培养茎尖玻璃化法超低温保存影响因素进行研究。结果表明, 不定芽在MS + 3.0～5.0 mg/L 6-BA + 0.1 mg/L NAA的培养基上分化较好。香蕉茎尖超低温保存较佳体系是: 2.0～3.0 cm的茎尖在含0.4 mol/L蔗糖培养基上预培养2 d, 剥取带1～2个叶原基的茎尖(长1.0～1.5 mm) , 室温(25℃) 下装载液(MS + 2 mol/L甘油+ 0.4 mol/L蔗糖) 装载20～30 min, 然后用玻璃化溶液( PVS2 ) 于0℃下处理40 min, 换1次PVS2后迅速投入液氮。保存至少1 h后, 在40℃水浴中化冻90 s, 用1.2 mol/L蔗糖培养液洗涤2次, 每次10 min, 然后转入含0.3 mol /L蔗糖的MS培养基上,暗培养10～15 h后转移到含0.5 mg/L 62BA的MS培养基中, 暗培养1周后转移到正常光下, 3个香蕉品种(巴西蕉、广东香蕉2 号、广东粉蕉1 号) 的成活率分别为75.9%、40.0%和69.6% , 再生率分别为63.4%、35.0%和63.4%。再生植株生长和分化正常, 生根后可移栽成活。     

不同保存因子对早佳西瓜花粉活力的影响

研究了西瓜花粉低温保存及授粉技术，结果表明：早佳西瓜花粉在-18 ℃或-25 ℃的温度下，
真空保存186～223 d 仍有50% 以上的活力。花粉活力因花粉保存条件不同有较大差异，-25 ℃比-18 ℃
保存的时间长、活力高。保存花粉使用前应在25 ℃条件下放置30 min 激活活力，以取得较高的坐果率。
使用保存花粉授粉不影响西瓜品质。     

马铃薯茎尖小滴玻璃化法超低温保存及其再生植株的遗传稳定性

以马铃薯试管苗为试材,对其茎尖小滴玻璃化法超低温保存的影响因素进行了研究,并对再生植株进行了遗传稳定性检测。结果表明,马铃薯茎尖依次在含有0.3 mol · L-1和0.5 mol · L-1蔗糖的液体MS培养基中预培养各1 d后,在0 ℃下PVS2处理30 min,转到铝箔条上PVS2小滴上（约15 μL）,将粘有茎尖的铝箔条在液氮里蘸一下,然后直接装入盛满液氮的冷冻管中,投入液氮至少保持1 h。室温下用含有1.2 mol · L-1蔗糖的MS液体培养基解冻并洗涤30 min后,接种到MS + 0.5 mg · L-1 Zeatin + 0.1 mg · L-1 NAA＋1.0 mg · L-1 GA3恢复培养基上,存活率和再生率最高达79.91%和62.52%。通过SSR分子标记检测,再生植株的遗传稳定性没有发生改变。     

苦瓜的开花习性及影响其花粉萌发率的因素

对苦瓜的开花习性、花粉萌发及贮藏适宜条件进行了研究。结果表明,苦瓜雌花开放时间从２∶００至６∶００,雄花开放时间从２∶００至７∶００;１０％蔗糖添加０．０１％硼酸的液体培养基对苦瓜成熟花粉的萌发最适宜;在０℃温度下,苦瓜花粉可贮藏３６小时;但在４０℃温度下,贮藏４小时后,苦瓜花粉萌发率就降至１８．４％;一天中（从５∶００至１７∶００）植株上已开放的苦瓜花的花粉萌发率均高于８０％,９∶００为最高。