深度氟中毒家蚕幼虫中肠吸收磷的研究

与健康的５龄家蚕幼虫不同，添食Ｐｉ的深度氟中毒家蚕幼虫的血淋巴和中肠内的总Ｐｉ，无机＋易变Ｐｉ，酸溶性磷和类脂磷的浓度不随时间改变而变化。这可能是高氟饲料阻碍中肠对Ｐｉ吸收和传输的结果。     

萘胺类化合物对氟中毒家蚕幼虫血液H2O2酶活性的影响

用 Na F、萘胺类化合物 CRL和增效剂处理 5龄用桑 ,氟中毒的蚕其血液过氧化氢酶活性大小依次为 :Na F处理区 >Na F CRL处理区 >Na F CRL 增效剂处理区 >对照 CK区 .说明 CRL和增效剂有明显的缓解家蚕氟中毒作用     

萘胺类化合物对氟中毒家蚕幼虫血淋巴中GSH-Px活性的影响

为了解萘胺类化合物 CRL缓解家蚕氟中毒的机理 ,研究了 CRL对氟中毒家蚕幼虫血淋巴中谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)活性的影响 .正常的家蚕 5龄幼虫血淋巴 GSH- Px在龄的中期活性较强 ,龄初和龄末活性较弱 .幼虫添食 15mmol/L的 Na F溶液后 ,GSH- Px活性显著增强 ,经 CRL添食处理后 ,GSH- Px的活性有所下降 .经 CRL和增效剂协同处理后 GSH- Px的活性会进一步下降     

氟对家蚕血液及中肠磷酸酶活性的影响

运用人工饲料中定量添加氟化物的方法,探讨了氟对家蚕中肠碱性磷酸酶(AKP)、血液酸性磷酸酶(ACP)活性的影响。结果表明,氟对家蚕中肠AKP、血液ACP的活性有明显的抑制作用,并随着添氟浓度的增加而增强,间隔添氟、停止添氟不能减轻这种抑制作用。添食石灰能减轻氟对中肠AKP、血液ACP活性的影响。     

萘胺类化合物对氟中毒家蚕幼虫血淋巴中GSH-Px活性的影响

为了解萘胺类化合物CRL缓解家蚕氟中毒的机理,研究了CRL对氟中毒家蚕幼虫血淋巴中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性的影响。正常的家蚕5龄幼虫血淋巴GSH-Px在龄的中期活性较强,龄初和龄末活性较弱。幼虫添食15 mmol/L的NaF溶液后,GSH-Px活性显著增强,经CRL添食处理后,GSH-Px的活性有所下降。经CRL和增效剂协同处理后GSH-Px的活性会进一步下降。     

家蚕5龄幼虫中肠磷酸酶活性分析

以家蚕为试验材料,调查了5龄幼虫从起蚕到熟蚕中肠酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)酶活性变化。结果表明,AKP酶活性呈现出先升高后降低的趋势,其中在5龄起蚕和熟蚕时酶活性较低,而在盛食期(5龄第5天)活性最高;而ACP在5龄初期酶活性较低,从5龄第4天开始升高,随后维持在一个较高的水平上。     

桑蚕幼虫中肠对亮氨酸和尿嘧啶的吸收

应用示踪法和体外培养技术,研究了桑蚕幼虫中肠各部位对亮氨酸和尿嘧啶吸收作用的差异。在体外培养中,中肠各部位对亮氨酸的吸收作用以中肠中部最强,对尿嘧啶的吸收作用以中肠后部最强,同时培养液的pH对中肠吸收尿嘧啶有一定的影响。     

萘胺类化合物对氟中毒家蚕幼虫血液H2O2酶活性的影响

用NaF、萘胺类化合物CRL和增效剂处理5龄用桑,氟中毒的蚕其血液过氧化氢酶活性大小依次为：NaF处理区＞NaF＋CRL处理区＞NaF＋CRL＋增效剂处理区＞对照CK区。说明CRL和增效剂有明显的缓解家蚕氟中毒作用。     

家蚕氟中毒的解毒效果试验

采用三因子三水平有重复试验的正交设计方案,研究了不同解氟剂、不同解氟次数对各含氟浓度的桑叶进行处理后养蚕的解氟效果.结果,解氟剂对蚕体无毒害作用,相反,能有效地削弱氟化物的不良影响,增强蚕的体质,提高结茧率,增加上茧总量,降低死笼率.     

萘胺类化合物对氟中毒家蚕体内氧自由基水平的影响

为了解萘胺类化合物CRL缓解家蚕氟中毒的机理,研究了CRL对氟中毒蚕血淋巴中氧自由基(O₂)水平的影响.家蚕幼虫添食NaF溶液后,幼虫血淋巴中O₂的含量明显增高,说明家蚕的氟中毒与蚕体内的O2水平有关.氟中毒的家蚕幼虫经CRL处理后,血淋巴中的O2的含量有所下降,经CRL和增效剂协同处理后O₂的含量大幅度下降,甚至接近正常蚕(对照区)的水平,由此说明CRL的解毒功效在增效剂的协同作用下会进一步提高.     

蜕皮前后家蚕幼虫血淋巴的蛋白质组学分析

 【目的】对家蚕幼虫血淋巴在蜕皮前后的蛋白质变化进行研究,发现参与蜕皮过程的蛋白质,为深入研究家蚕幼虫的蜕皮过程提供新的思路,也为研究其它昆虫的蜕皮过程提供启示。【方法】应用以双向电泳（2-DE）进行蛋白质分离、以基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）进行蛋白质鉴定的蛋白质组学方法对家蚕幼虫血淋巴在蜕皮前后的蛋白质变化进行研究。【结果】经过蜕皮过程后,家蚕幼虫血淋巴中蛋白质的数量、种类和部分蛋白质的表达量发生了明显的变化：4眠蚕血淋巴中有10个明显的特异蛋白点,5龄起蚕血淋巴中2个明显的特异蛋白点,还有2个蛋白点的表达量发生了明显的上调或下调。经过质谱鉴定,以上14个蛋白点中 有9个具有可信结果,其中4种蛋白被过去的试验证明与蜕皮过程有关,其它5种蛋白质是新发现的与蜕皮过程有关的蛋白质。【结论】化学感应蛋白9、储存蛋白2、抗胰蛋白酶原、酚氧化酶原亚基1和亲环蛋白A、KIF27类蛋白、天蚕素原、副肌球蛋白、神经原钙结合蛋白以及另外5种未被鉴定的蛋白质可能参与了家蚕幼虫的蜕皮过程。     

家蚕中肠丝氨酸蛋白酶基因对家蚕微孢子虫入侵的响应模式

为探究接种家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)24与48 h后,家蚕中肠6种丝氨酸蛋白酶基因(serine protease gene, sps)的表达变化趋势,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR, qRT-PCR)方法对正常组和微孢子虫感染试验组的6个家蚕中肠丝氨酸蛋白酶基因(编号分别为sp1、sp3、sp5、sp8、sp11和sp12)进行定量分析.结果显示,与正常家蚕中肠内丝氨酸蛋白酶基因的转录水平相比, sp1、sp3、sp5和sp12在接种家蚕微孢子虫24与48 h后均上调表达,其中sp5上调最明显,接种家蚕微孢子虫24与48 h的表达量分别是对照的1.9和1.2倍;sp8和sp11在受微孢子虫感染24 h后表达上调,而48 h后表达量下降.结果表明,丝氨酸蛋白酶(serine protease,SP)参与了家蚕中肠对微孢子虫入侵的免疫反应;不同丝氨酸蛋白酶上调倍数不同,说明不同丝氨酸蛋白酶参与家蚕免疫反应的程度不同;家蚕微孢子虫侵染48 h后,sp8和sp11出现了下调,推测微孢子虫的成功入侵抑制了sp8和sp11的表达.家蚕中肠不同丝氨酸蛋白酶在微孢子虫感染的不同时间的表达变化趋势为进一步研究丝氨酸蛋白酶家族在家蚕微孢子虫与宿主家蚕互作中的作用奠定了基础.     

家蚕品种金秋及其杂交亲本的蛋白质表达谱分析

 【目的】探讨家蚕杂交育成品种及其亲本蛋白水平的差异,从蛋白水平分析育成品种的基因结构,为阐明杂交育种成败的分子机理创造条件。【方法】采用蛋白质组研究技术,分析杂交亲本及其育成品种的丝腺、血淋巴和中肠的蛋白质表达谱。【结果】3种组织器官中育成品种金秋与两个亲本的匹配蛋白斑点比例只达到70%左右,剩余30%左右是各个品种的特异蛋白斑点;在匹配蛋白斑点中,还有9%～24%的蛋白表现上调和下调。这些特异蛋白可能是两个亲本的基因在杂交育成品种中产生了互作而形成的新蛋白,也可能是对相同的蛋白进行了不同的修饰而获得的修饰蛋白。【结论】新品种的育成,除了汇集亲本的优良基因外,还有赖于基因互作产生的新功能蛋白的作用。     

氟化物对家蚕血液和中肠中海藻糖含量的影响

为了探讨氟化物对家蚕代谢机制的影响,以家蚕耐氟品种T6和氟化物敏感品种734为研究材料,从5龄起 蚕开始分别添食经50,100,200,400mg/kgNaF溶液浸泡后的新鲜桑叶,检测家蚕血液和中肠中海藻糖含量的变 化.结果表明,血液中,随着添氟浓度的增加,734添氟组海藻糖含量约是对照组的0.89,0.95,0.65和0.61倍, T6约是对照组的0.82,0.86,0.87和0.89倍.734的3个低浓度添氟组和2个高浓度添氟组之间的差异极显著(p <0.01),而T6各处理组之间的差异均不显著;在中肠中,随着添氟浓度的增加,734添氟组海藻糖含量约是对照 组的0.79,1.04,1.18和1.30倍,T6组约是对照组的0.66,0.76,0.68和0.67倍.734对照组和最高浓度添氟组之 间的差异显著(p<0.05),50mg/kgNaF处理组与2个高浓度添氟组之间的差异极显著,T6对照组与各添氟组之 间的差异极显著(p<0.01).氟化物能使耐氟家蚕血液和中肠,以及敏感家蚕血液中的海藻糖含量降低,却能使敏 感家蚕中肠组织中海藻糖含量升高.推测家蚕中海藻糖含量与蚕体的耐氟性能有一定的相关性.     

家蚕耐氟机理研究

[目的]研究家蚕的耐氟机理。[方法]以耐氟家蚕品种T6和氟敏感家蚕品种733新为供试品种,采用酸浸提法测定蚕沙、饲料、全蚕体的氟含量。[结果]添氟和不添氟饲料的实测含氟量分别为413.3和56.5mg/kg。在添氟14d后,耐氟组家蚕品种T6个体粗大仍然健康;氟敏感家蚕品种733新个体很小,取食量显著下降,蚕沙量比对照组明显减少,表现出明显的氟中毒症状。添氟初期和表现症状的后期,氟敏感家蚕的蚕沙氟含量有所波动。从第8天开始,耐氟家蚕品种的蚕沙氟含量显著下降。氟敏感品种733新的排泄能力高于耐氟品种T6。耐氟和氟敏感家蚕的蚕沙平均氟含量与全蚕体内氟含量的和相近。[结论]家蚕体内可能有某种（类）氟过氧化物酶,使游离氟失去毒害作用。     

家蚕中肠特异启动子BmAPN的克隆及活性分析

【目的】克隆和鉴定1个家蚕中肠特异启动子,为研究家蚕的免疫应答和应用研究提供新的工具。【方法】从家蚕品种大造中提取基因组总DNA,用PCR方法克隆家蚕中肠特异表达基因BmAPN（GenBank登录号：BAA33715.1）的上游调控序列。利用此序列构建以EGFP为报告基因的转基因表达载体pBac[BmAPN-EGFP-SV40,3×P3-DsRed],通过显微注射获得转基因家蚕,在个体水平上检测启动子的活性。【结果】所克隆的BmAPN启动子长度为1 598 bp,其驱动的EGFP仅在转基因家蚕中肠特异表达,与内源基因BmAPN的表达特征一致。该启动子在家蚕幼虫时期活性相对较高,且在起蚕期的活性要明显高于眠蚕期,推测该启动子中的特异元件受激素调控。【结论】经克隆获得的BmAPN启动子为有活性的启动子,且为家蚕中肠特异启动子。     

桑蚕幼虫中肠细胞腺苷三磷酸酶活性的细胞化学

用电镜细胞化学技术研究了桑蚕五龄幼虫中肠组织细胞中ＡＴＰａｓｅ的亚细胞分布，ＡＴＰａｓｅ仅大量分布在中肠圆筒形细胞的微绒毛和杯形细胞在肠腔的开口处、肠壁肌肉的肌质膜上、部分细胞的细胞质膜和细胞器及细胞质中。ＡＴＰａｓｅ的这种分布状态与细胞的功能紧密相关。     

闹羊花素—Ⅲ对菜粉蝶幼虫血淋巴和中肠酯酶的影响

闹羊花素－Ⅲ（简称R－Ⅲ）对菜粉蝶5龄幼虫血淋巴和中肠酯酶的活性，并分析了酯酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）图谱。活体试验结果表明，R－Ⅲ以每虫5μg定量饲喂或以20mg/L浸渍叶碟后饲喂试虫，能显著降低血淋巴和中肠酯酶比活力，以每虫1－3μg处理或5mg/L浸叶饲喂处理时，对酶活性的影响取决于处理剂量和时间。PAGE表明，R－ Ⅲ以每虫5μg处理，酯酶酶谱发生明显变化，主酶带明显抑制。